Download - Pusat Dokumentasi dan Informasi Ilmiah UNS

25 69
50 ml dari 0,2 M buffer phosphat pH 6,5 dan 0,0125 gram fast Blue BB
salt. Gel yang telah dielektroforesis dikeluarkan dan dimasukkan dalam
larutan pewarna tersebut. Gel diinkubasi pada suhu kamar selama
minimal 120 menit sambil digoyang secara perlahan-lahan setiap 10
menit. Setelah muncul pita-pita, pewarna dibuang dan dibilas dengan
akuades, kemudian gel diambil gambarnya dengan kamera digital.
2) Pewarnaan Peroksidase
Dalam cawan pewarnaan, sebanyak 0,0125 gram O-dianisidin dilarutkan
dalam 2,5 ml aseton lalu ditambahkan 50 ml buffer asetat pH 4,5 dan 2
tetes hidrogen peroksida. Gel yang telah dielektroforesis dimasukkan
dalam larutan pewarna dan diinkubasi selama 10 menit sambil digoyang
secara perlahan-lahan setiap 2 menit. Setelah muncul pita-pita, pewarna
dibuang dan dibilas dengan akuades, kemudian gel diambil gambarnya
dengan kamera digital.
g. Proses Fiksasi Gel
Fiksasi dilakukan segera setelah proses pewarnaan gel selesai.
Larutan pewarna dibuang dan diganti dengan larutan fiksasi sebanyak 50
ml, dengan tujuan untuk menghentikan aktivitas isozim. Larutan fiksasi
yang dipakai tergantung sistem isozim yang digunakan.
Untuk isozim esterase dan peroksidase larutan fiksasi yang
digunakan adalah larutan fiksasi B yang dibuat dengan cara mencampurkan
250 ml alkohol; 25 ml aseton; dan 225 ml H 2 O. Selanjutnya gel disimpan