LAPORAN AKHIR - KM Ristek

etadin) sehingga diperoleh biji yang steril. Biji dipotong menjadi 2 -3 bag ian danditanam pada media MS dengan penambahan BA (1, 3, 5 mgJI) + GA3 (0 dan 5 mgJI)dan PVP 300 mg/I untuk menginduksi pembentukan tunas. Media dipadatkan denganpenambahan 0.8% agar. pH media dibuat 5.8 dengan menggunakan 0.1 N NaOH atau0.1 N HCI sebelum dipanaskan dalam autoklaf pada suhu 121°C dengan tekanan 15 psiselama 15 menit. Kultur diinkubasi pada suhu 25°C hingga terbentuk tunas.Setelah diperoleh tunas in vitro, maka tunas yang dihasilkan dipindahkan pad amedia MS dengan penambahan BA ( 1 - 2 mgJI), thidiazuron (0.2 dan 0.5 mgJI) dan PVP300 mgJI untuk menginduksi multiplikasi hingga diperoleh tunas yang banyak. Botolditempatkan pad a rak kultur dengan penyinaran selama 16 jamJhari, dengan intensitascahaya 1000 lux. Rancangan percobaan yang digunakan adalah aeak kelompok dengan15 ulangan.Induksi dan regenerasi kalusInduksi kalus dilakukan dengan menggunakan daun in vitro. Daun dipotong-potongdengan ukuran 0.5 x 0.5 em Formulasi media yang digunakan adalah MS denganpenambahan 2,4-0 atau picloram (0, 2, 4 dan 8 mgJI). Botol ditempatkan pada kondisigelap didalam ruangan dengan suhu 20 - 22°C. Sub kultur dilakukan setiap bulan padamedia yang sama sehingga terbentuk kalus. Peubah yang diamati adalah waktuterbentuknya kalus, struktur kalus, warna kalus, serta visual kalus. Kalus denganstruktur yang remah dipindahkan pada media regenerasi. Formulasi media yangdigunakan adalah MS + BAP (0.1 atau 1 mg/I) dengan penambahan GA3 3 mg/I. Peubahyang diamati adalah waktu terbentuknya tunas, jumlah tunas, jumlah daun, dan panjangtunas. Raneangan pereobaan yang digunakan adalah aeak lengkap dengan 15 ulangan.4.2.3. Inisiasi rekayasa genetik mangga dan duku dengan menggunakan gen gusSebelum melakukan transformasi gen kedalam tanaman, sebaiknya metodatransformasinya sudah dikuasai. Pada pereobaan ini akan dilakukan metodapendahuluan untuk mengetahui efektivitas metoda transformasi gen yang akanditerapkan pad a kedua jenis tanaman diatas. Untuk itu akan diuji penggunaan gen guspad a tanaman mangga dan duku.Bahan tanaman yang digunakan adalah kalus yang diperoleh dari pereobaan Idan II. Metoda inokulasi yang digunakan adalah dengan eara eksplan direndam dalamdalam suspensi bakteri selama 15 dan 30 menit.8