LAPORAN AKHIR - KM Ristek

Metode Pengujian ekspresi gen Gus (Jefferson et aI, 1987).Pembuatan larutan X-Gluc : 90 ml 0,1 M buffer phosphat pH 7.7 93.60 mg X-Glue (konsentrasi final 2 mM)14.85 mg Potassium Ferrieyanide (konsentrasi final 0.5 IJM)334.80 mg Sodium EDTA (konsentrasi final 10 mM)90 IJI Triton X-100 (konsentrasi final 0.1%)Prosedur pengujian :Eksplan atau jaringan tanaman yang akan diuji, direndam dalam larutan X-Gluedan diinkubasi pada suhu 37°C selama 5 jam atau semalam tergantung pada intensitaspewarnaan. Kemudian eksplan dieuei dalam etanol 70% untuk melarutkan klorofil dandisimpan pada suhu 4°C. kemudian dipindahkan pada media kokultivasi selama 9 hari.Selanjutnya eksplan dipindahkan pada media regenerasi yang sudah diberiasetosiringon 100 dan 200 uM. Pengamatan ada tidaknya spot biru dapat dilakukansecara visual atau melalui mikroskop.BAB V. HASIL DAN PEMBAHASAN5.1. Mikropagasi mangga melalui kultur in vitroInduksi dan penggandaan tunas secara langsung dengan menggunakan mata tunasterminal atau lateralTujuan dari percobaan ini adalah menginduksi pembentukan tunas ganda agardiperoleh daun in vitro yang akan digunakan sebagai bahan tanaman untuk diinduksiagar membentuk kalus yang akan digunakan untuk tahap percobaan transformasigenetik. Hasil penelitian hingga saat ini menunjukkan bahwa sangat sulit untukmendapatkan eksplan yang steril karena kontaminasi yang sangat tinggi yangdisebabkan oleh jamur dan bakteri. Untuk meningkatkan keberhasilan sterilisasi, makadilakukan pemangkasan berulangkali dari pohon induk di rumah kaca agar diperolehtanaman yang juvenil (muda). Dengan metoda ini, upaya memperoleh eksplan yangsteril dapat ditingkatkan.Faktor lain yang menghambat pertumbuhan eskplan adalah produksi fenol yangberlebihan dari eksplan. Untuk mengantisipasi hal tersebut telah digunakan penggunaanpolivinil pirolidon (PVP) hingga 500 mg/l dan charcoal 2,5 gIl.Menurut Krishna danSingh (2006) beberapa masalah yang dihadapi dalam kultur in vitro mangga adalah9