Metodi per il controllo della qualità delle sostanze ricavate dalle ...

Metodi per il controllo della qualità delle sostanze ricavate dalle piante medicinali
• uno spruzzatore con un beccuccio molto sottile di materiale resistente ai reagenti che
devono essere impiegati;
• una lampada a luce ultravioletta ad emissione di onde corte (254 nm) e lunghe (365 nm).
Procedimento
Preparazione dell’adsorbente (solo in caso non si usino lastre d’acquisto)
Se non specificato altrimenti nel proedimento analitico relativo al materiale vegetale in
esame, preparare una miscela composta dalla sostanza coprente, da acqua o da una
soluzione acquosa (vedi capitolo 21 “Specifiche per gli adsorbenti”) e, usando lo strumento
per spalmare, coprire la lastra con uno strato spesso 0,25 mm. Asciugare all’aria
le lastre appena ricoperte, attivarle portandole in forno alla temperatura di 110° C per 30
minuti e poi lasciarle raffreddare. Controllare l’uniformità della copertura alla luce diretta
e la consistenza a luce riflessa. Se le lastre non devono essere usate immediatamente,
porle in un essiccatore contenente gel di silice R. Per formare i bordi, rimuovere una piccola
striscia (larga 2-5 mm) del materiale coprente da entrambi i lati della lastra.
Se il metodo analitico richiede che il materiale adsorbente debba essere acido, alcalino
o tamponato, per la preparazione della miscela vanno usati al posto dell’acqua acidi,
alcali o tamponi diluiti come è specificato nel metodo relativo al materiale vegetale in
esame. Se l’assorbente impiegato non contiene già un legante, al posto dell’acqua
andrebbe impiegata una soluzione acquosa di 5-7 g di sodio carbossimetilcellulosa R.
Saturazione della camera cromatografica
Se non diversamente specificato nel metodo analitico, la cromatografia deve essere eseguita
nella camera cromatografica satura dei vapori della fase mobile. Per portare a saturazione l’atmosfera
della camera cromatografica, applicare fino a metà dell’altezza delle pareti laterali
della camera della carta da filtro, introdurre nella camera una quantità di fase mobile sufficiente
per imbibire completamente la carta da filtro e per formare un fondo del livello di circa
5 mm. Chiudere la camera e lasciarla per almeno un’ora a temperatura ambiente.
Tutte le operazioni durante le quali le lastre sono esposte all’aria dovrebbero essere preferibilmente
eseguite ad un’umidità relativa del 50-60% e le lastre stesse dovrebbero essere
maneggiate con cura.
Applicazione del materiale da analizzare e delle soluzioni di riferimento
Usando una micropipetta o una siringa graduata in µL, porre delle gocce della soluzione
del materiale da analizzare e delle soluzioni di riferimento in corrispondenza del fronte
di partenza, che deve essere fissato a 15 mm dal bordo inferiore della lastra e a questo
parallelo. Le gocce devono essere distanti almeno 15 mm dai bordi laterali della lastra e
distare almeno 15 mm l’una dall’altra. Le macchie formate dalle soluzioni devono essere
piccole più che sia possibile, preferibilmente di diametro non superiore a 4 mm; se
necessario, applicare le soluzioni a piccole porzioni per volta, essiccando le macchie tra
una applicazione e l’altra. Il fronte che deve essere raggiunto dalla fase mobile ascendente
deve essere marcato alla distanza specificata nel metodo analitico, solitamente a
10-15 cm dalla linea di partenza.
Sviluppo dei cromatogrammi
Fare asciugare le macchie, porre la lastra nella camera in posizione la più verticale possibile,
assicurandovi che le macchie emergano al di sopra del livello del liquido costi-
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