Metodi per il controllo della qualità delle sostanze ricavate dalle ...

Metodi per il controllo della qualità delle sostanze ricavate dalle piante medicinali
Tabella 3
Determinazione dell’attività emolitica:
diluizioni seriali per il saggio preliminare
Provetta no.
1 2 3 4
Estratto della droga (mL) 0,10 0,20 0,50 1,00
Tampone fosfato TS a pH 7,4 (mL) 0,90 0,80 0,50 -
Sospensione del sangue (2%) (mL) 1,00 1,00 1,00 1,00
Saggio preliminare
Preparare in 4 provette una serie di diluizioni dell’estratto della droga vegetale miscelando
tampone fosfato TS a pH 7,4 e sospensione di sangue (2%) come mostrato nella
Tabella 3.
Non appena pronte, agitare delicatamente le provette capovolgendole, evitando la
formazione di schiuma. Dopo 30 minuti, agitare nuovamente le provette e riporle diritte
per 6 ore a temperatura ambiente. Esaminare le provette e registrare la diluizione alla
quale l’emolisi è stata totale, come risulta denunciato dalla formazione di una soluzione
limpida colorata in rosso e nella quale non è osservabile alcun deposito di eritrociti; quindi
procedere come segue.
• Se l’emolisi totale è avvenuta solamente nella provetta n° 4, utilizzare la soluzione
madre dell’estratto della droga per eseguire il saggio principale.
• Se l’emolisi totale è stata osservata nelle provette n° 3 e 4, preparare una soluzione
dell’estratto della droga due volte più diluita usando tampone fosfato TS a pH 7,4.
• Se l’emolisi totale è stata osservata nelle provette n° 2, 3 e 4, preparare una soluzione
dell’estratto della droga cinque volte più diluita impiegando tampone fosfato TS a
pH 7,4.
• Se dopo 6 ore, tutte e 4 le provette contengono una soluzione limpida rossa, preparare
una soluzione dell’estratto della droga 10 volte più diluita impiegando tampone
fosfato TS a pH 7,4 e ripetere con questa il saggio preliminare.
• Se in nessuna provetta è stata osservata emolisi totale, ripetere il saggio preliminare
utilizzando un estratto più concentrato della droga.
Saggio principale
Preparare in 13 provette una serie di soluzioni dell’estratto della droga, non diluite o
diluite secondo i risultati del saggio preliminare, miscelando come mostrato nella Tabella
4 tampone fosfato TS a pH 7,4 e sospensione di sangue (2%).
Procedere con le diluizioni e le valutazioni come effettuato per il test preliminare, ma
effettuando l’osservazione dei risultati dopo 24 ore anziché 6. Calcolare in g la quantità di
droga oppure in g o in mL la quantità di preparazione che ha provocato l’emolisi totale.
Con lo scopo di eliminare le variazioni individuali di resistenza degli eritrociti all’azione
delle saponine, preparare nello stesso modo prima descritto per l’estratto della
droga una serie di diluizioni di saponina R. Calcolare poi in g la quantità di saponina che
ha provocato l’emolisi completa.
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