i Éder Ricardo de Moraes Efeito diferencial do veneno do escorpião ...

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RINGER MAMÍFERO SEM ADIÇÃO DE Ca 2+ /Mg 2+ REAGENTE CONCENTRAÇÃO (mM) pH ajustado em 7,4 com NaOH. NaCl 140,0 KCl 2,5 Hepes 10,0 Glicose 7,5 Tabela 1: Solução de Ringer Mamífero, sem adição de cálcio e magnésio. 28
4.5. Tratamento Enzimático: Solução Enzimática 1: Papaína (1 mg/mL), ativada pela adição de cisteína (0,03 mg/mL) diluídas em solução de Ringer filtrada. Solução Enzimática 2: Colagenase (2,5 mg/mL), diluída em solução de Ringer filtrada. 4.6. Plaqueamento dos neurônios: Meio de cultura F12, com 10% V/V soro fetal bovino e penicilina/estreptomicina na concentração de 100 unidades/mL de penicilina e 100 µg/mL de estreptomicina. 4.7. Manutenção de neurônios em cultura: Meio de cultura L15 com 10% V/V soro fetal bovino e concentração de 100 unidades/mL de penicilina e 100 µg/mL de estreptomicina 4.8. Superfícies para plaqueamento: Discos de vidro (5 mm de diâmetro) foram autoclavados e cobertos com aproximadamente 30 µL de poli-L-lisina (20 µg/mL). Foram mantidos a 4ºC por no mínimo 12 horas. Foram lavados com água deionizada estéril. Em seguida, esses discos foram estocados a 4ºC. No dia em que foram utilizados para o plaqueamento, os discos de vidro foram cobertos com laminina (20 mg/mL) diluída em Ringer e mantidos a 4 ºC por 6 horas. A laminina foi removida instantes antes do plaqueamento dos neurônios. 4.9. Dissecação: Os ratos foram decapitados por guilhotinamento. A pele do dorso foi removida, assim como a parte anterior do gradil costal e vísceras torácicas. Também foram removidos os corpos vertebrais, deixando expostos a medula e os nervos que chegam a ela. Nos nervos posteriores (que conduzem informações aferentes) estão localizados os Gânglios da Raiz Dorsal (DRG). Esses gânglios formam coleções de corpos neuronais responsáveis por conduzir da periferia ao Sistema Nervoso Central as informações sobre o ambiente em que este indivíduo habita. 29
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