i Éder Ricardo de Moraes Efeito diferencial do veneno do escorpião ...

As correntes de sódio foram isoladas essencialmente como descrito por Omri e Meiri
(1990). Correntes de potássio foram bloqueadas utilizando Cs + como o cátion
presente em maior concentração no meio intracelular e pela presença de TEA na
solução de pipeta (interna) e externa. Canais para Ca 2+ foram bloqueados por
cádmio (0.2 mM) e níquel (0.2 mM). Estas concentrações de cádmio e níquel são
relacionadas com a redução da condutância de canais TTX-R em neurônios do DRG
e outros neurônios sensoriais (Ikeda e Schofield, 1987; Kuo et al., 2002). Entretanto,
estes bloqueios não alterariam os nossos resultados porque as correntes de sódio
TTX-R remanescentes ainda era mais do que suficientemente grandes para serem
registradas com precisão. A solução final utilizada para registrar correntes de sódio
foi obtida por combinação de 30% da solução externa 1 e de 70% solução externa 2.
Desta forma a concentração final de sódio na solução externa era 40 mM. Esta
concentração não-fisiológica de sódio foi escolhida para evitar correntes do íon sódio
exageradamente grandes.
4.13. Preparação e armazenamento do veneno:
O veneno de Tityus bahiensis foi fornecido pelo Professor Evanguedes Kalapothakis,
do departamento de Biologia Geral do Instituto de Ciências Biológicas da UFMG.
Recebemos 2,5 mg do veneno total liofilizado. O veneno foi ressuspendido em 750
µL de água deionizada, centrifugado, e o sobrenadante foi dividido em alíquotas de
20 µL, que foram mantidas em -80ºC. A concentração de proteína neste extrato foi
estimada em 2,87 µg de proteína/µL, usando o método de Bradford (1976) e tendo a
albumina bovina como padrão. As alíquotas de veneno foram descongeladas em
gelo na hora dos experimentos e o veneno foi adicionado diretamente na solução
extracelular, juntos com 50 µg/mL de Citocromo C (Sigma, C-3006) para prevenir a
ligação não específica do veneno (Leão et al., 2000). O Citocromo C foi incluído
também na solução externa controle (sem veneno).
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