i Éder Ricardo de Moraes Efeito diferencial do veneno do escorpião ...

4.5. Tratamento Enzimático:
Solução Enzimática 1: Papaína (1 mg/mL), ativada pela adição de cisteína (0,03
mg/mL) diluídas em solução de Ringer filtrada.
Solução Enzimática 2: Colagenase (2,5 mg/mL), diluída em solução de Ringer
filtrada.
4.6. Plaqueamento dos neurônios:
Meio de cultura F12, com 10% V/V soro fetal bovino e penicilina/estreptomicina na
concentração de 100 unidades/mL de penicilina e 100 µg/mL de estreptomicina.
4.7. Manutenção de neurônios em cultura:
Meio de cultura L15 com 10% V/V soro fetal bovino e concentração de 100
unidades/mL de penicilina e 100 µg/mL de estreptomicina
4.8. Superfícies para plaqueamento:
Discos de vidro (5 mm de diâmetro) foram autoclavados e cobertos com
aproximadamente 30 µL de poli-L-lisina (20 µg/mL). Foram mantidos a 4ºC por no
mínimo 12 horas. Foram lavados com água deionizada estéril. Em seguida, esses
discos foram estocados a 4ºC.
No dia em que foram utilizados para o plaqueamento, os discos de vidro foram
cobertos com laminina (20 mg/mL) diluída em Ringer e mantidos a 4 ºC por 6 horas.
A laminina foi removida instantes antes do plaqueamento dos neurônios.
4.9. Dissecação:
Os ratos foram decapitados por guilhotinamento. A pele do dorso foi removida, assim
como a parte anterior do gradil costal e vísceras torácicas. Também foram removidos
os corpos vertebrais, deixando expostos a medula e os nervos que chegam a ela.
Nos nervos posteriores (que conduzem informações aferentes) estão localizados os
Gânglios da Raiz Dorsal (DRG). Esses gânglios formam coleções de corpos
neuronais responsáveis por conduzir da periferia ao Sistema Nervoso Central as
informações sobre o ambiente em que este indivíduo habita.
29