Tese de Mestrado - Isabella versao final corrigida - UFF

Tabela 2: Relação dos anticorpos monoclonais utilizados na citometria de fluxo.
Anticorpos monoclonais Fluorocromo Fonte Diluição
Anti-CD3 Fitc Pharmingen 1/300
Anti-B220 Fitc Pharmingen 1/400
Anti-CD4 Pe Pharmingen 1/300
Anti-CD8 Spectral red Southern 1/600
Anti-CD25 Fitc Sigma 1/5
Anti-CD62L Fitc Pharmingen 1/100
Anti-CD44 Fitc Pharmingen 1/50
3.7 RT-PCR
3.7.1 Extração de RNA total
O RNA total foi isolado pelo método de TRIzol ® Reagent (Invitrogen,
CA, EUA). Os músculos foram homogeneizados na proporção de 50mg de
tecido para 1000µl de Trizol e centrifugados a 12.000 xg por 10 minutos a 4°C
para remover o fragmento de tecido não dissolvido. Os sobrenadantes foram
congelados a -20°C até o momento de uso. Após serem descongelados, foi
adicionado 200µl de uma solução de clorofórmio/ álcool isoamílico na
proporção 24:1 (v:v) seguindo-se nova homogeneização. Após 10 minutos no
gelo, a mistura foi centrifugada a 12.000 xg por 15 minutos a 4°C. A fase
aquosa foi coletada e transferida para outro tubo contendo o mesmo volume de
isopropanol (Merck do Brasil). As soluções foram agitadas até a
homogeneização, armazenadas a -20°C por no mínimo 3 0 minutos e
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