Braz Oral Res, v. 19, Supplement (Proceedings of the 22nd Annual ...

Pc321
Expressão anômala de bcl-2 e bax na carcinogênese bucal
experimental em ratos
Ribeiro DA*, Salvadori DMF, Marques MEA
Patologia - UNIVERSIDADE ESTADUAL PAULISTA. E-mail: ak92@hotmail.com
Apoptose é um fenômeno de morte celular geneticamente programada, que garante a eliminação de células em
estágio final de seu ciclo de vida ou acometidas por danos genéticos irreparáveis. Estudos têm demonstrado que
a perda da resposta apoptótica em células é um dos mecanismos cruciais na citodiferenciação maligna. Assim,
o objetivo desse estudo foi examinar a apoptose por meio da expressão das proteínas bcl-2 e bax, pela imunoistoquímica,
durante a carcinogênese bucal experimental. Para isto, foram utilizados 30 ratos Wistar machos,
divididos em três grupos, de acordo com o momento de sacrifício: quatro, 12 e 20 semanas pós-tratamento com
a 4-nitroquinolina 1-óxido (4NQO). Um total de dez animais foi utilizado como controle negativo. No grupo
controle negativo, a marcação de bcl-2 se restringiu às camadas basal e suprabasal do epitélio, enquanto que a
imunorreatividade do bax se restringiu às camadas superficiais. Apesar da mucosa bucal estar aparentemente
normal após quatro semanas consecutivas de exposição à 4NQO, as proteínas bcl-2 e bax estavam expressas
em todas as camadas do epitélio. Nas lesões displásicas obtidas após 12 semanas de tratamento com a 4NQO,
a proteína bcl-2 estava expressa nas camadas superficiais do epitélio, enquanto que bax não houve alterações
significativas. Em 20 semanas de administração da 4NQO, os carcinomas espinocelulares exibiram marcação
esporádica da proteína bcl-2, ao passo que a proteína bax foi amplamente observada nas ilhotas tumorais.
A partir desses resultados obtidos, conclui-se que a expressão anômala de bcl-2 e bax pode estar associada
com o risco de câncer bucal.
Pc322
Expressão de transcritos do gene HOXA7 em carcinomas
epidermóide de boca por RT-PCR e hibridização in situ
Matizonkas-Antonio LF*, Silva-Valenzuela MG, Acquafreda T, Libório TN, Michaluarte P, Nunes FD
Estomatologia - UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO - SÃO PAULO. E-mail: lulimati@hotmail.com
Dentre as neoplasias malignas que acometem a boca, o carcinoma epidermóide (CE) é a mais freqüente. A
literatura mostra uma constante busca por marcadores que possam prever o comportamento do CE. Os genes
homeobox são importantes genes no controle do desenvolvimento, regulando aspectos da morfogênese e diferenciação
celular. Estudos têm mostrado alterações genéticas ou a expressão de genes homeobox em diversas
neoplasias. O homeobox HOXA7 já foi relacionado a carcinomas de ovário, carcinomas de pele em camundongos
e leucemias. Neste estudo foi verificada a presença de transcritos do HOXA7 em CEs de boca e no epitélio
não tumoral adjacente (NT). Amostras de NT e CE foram obtidas no HC-FMUSP e divididas em duas partes.
Uma parte foi utilizada para extração de RNA e amplificação dos transcritos pela RT-PCR e o outro espécime
foi submetido à hibridização in situ (ISH) utilizando-se sondas “sense” e “antisense” marcadas com digoxigenina.
A amplificação do HOXA7 foi observada em 72,73% dos casos, sendo 13,64% apenas no TN, 40,91%
somente no CE e 18,18% dos casos em ambas as amostras. Nos TNs o sinal da ISH foi intenso no epitélio,
ora nas camadas basais e suprabasais ora disperso sendo mais proeminente na camada espinhosa. Nos CEs os
transcritos foram localizados por toda neoplasia sendo que o sinal era menor em áreas menos diferenciadas e
em alguns casos foi negativo.
Esses resultados mostram que os CEs de boca expressam o HOXA7, principalmente em regiões mais bem diferenciadas,
sugerindo que a perda de expressão deste esteja relacionada com a progressão desta neoplasia.
Pc323
Expressão de focos GST-P+ (Glutationa S-transferase forma
placentária) na carcinogênese bucal experimental em ratos
Silva RN*, Ribeiro DA, Salvadori DMF, Marques MEA
Patologia - FACULDADE DE MEDICINA DE BOTUCATU - UNESP. E-mail:
re_adeno@terra.com.br
Glutationa S-transferases (GSTs) são enzimas de detoxificação de fase II, cuja função é a conjugação de
glutationas a um sítio eletrofílico de amplo espectro de compostos potencialmente tóxicos e carcinogênicos.
Estudos demonstram que a GST-P (forma placentária da GST) mostra-se como um adequado biomarcador
para a detecção de lesões pré-neoplásicas e neoplásicas. Assim, o objetivo do presente estudo foi verificar
a incidência de focos GST-P+ pela imunoistoquímica, durante a carcinogênese bucal experimental. Foram
utilizados 30 ratos Wistar machos, divididos em três grupos, de acordo com o momento de sacrifício: quatro,
12 e 20 semanas pós-tratamento com a 4-nitroquinolina 1-óxido (4NQO). Dez animais foram utilizados
como controle negativo. Os resultados mostraram uma expressão de focos GST-P+ na mucosa bucal
aparentemente normal, exposta à 4NQO durante quatro semanas consecutivas. Pôde-se também constatar
imunorreatividade do GST-P+ nas lesões displásicas e nos carcinomas espinocelulares em 12 e 20 semanas
pós-tratamento com a 4NQO. O grupo controle negativo não apresentou focos GST-P+.
A partir dos resultados obtidos, conclui-se que a identificação de focos GST-P+ na mucosa bucal pode ser
uma ferramenta útil para a identificação de áreas de alto risco para o surgimento de lesões pré-neoplásicas
e neoplásicas.
Pc324
Expressão de “Matrix metalloproteinases” e inibidores tecidual
por fibroblastos derivados de mucosa mastigatória normal
Cury PR*, Canavez F, Leite K, Araújo VC, Araujo NS
Microbiologia - FACULDADE DE ODONTOLOGIA SÃO LEOPOLDO MANDIC. E-mail:
patcury@yahoo.com
As metaloproteinases matriciais (MMP) são necessárias para a degradação de componentes da matriz extracelular
durante o desenvolvimento embrionário, morfogênese e remodelação tecidual, reparação e invasão
de tumores. Sua atividade proteolítica é precisamente regulada por inibidores teciduais de metaloproteinases
(TIMP). O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito do fator de crescimento epidermal (EGF) na
expressão de MMPs e TIMPs por fibroblastos derivados de mucosa bucal. Fibroblastos humanos de mucosa
bucal normal, entre a 5ª e 6ª passagens, foram estimulados com EGF 10 -3 , 10 -6 , 10 -9 , 10 -12 M por 24 horas.
Células sem tratamento serviram como controle. O RNA foi extraído e a expressão gênica da MMP-1, 2,
3 e 11 e TIMP-1 e 2 foi avaliada através de “real-time RT-PCR”, sendo a beta-actina usada como controle
endógeno. Os resultados mostraram um aumento da expressão das MMP-1 e MMP-3 e diminuição da expressão
de TIMP-1 independentes da concentração de EGF. Entretanto, concentrações específicas de EGF
aumentaram a expressão de MMP-2 (10 -12 e 10 -3 M), MMP-11 (10 -12 M) e TIMP-2 (10 -6 M).
Pode-se concluir que o fator de crescimento epidermal pode determinar um desequilíbrio na expressão de
metaloproteínases e inibidores teciduais de metaloproteinases.
Pc325
Efeitos da ovariectomia e dos tratamentos com sinvastatina ou
alendronato sódico na densidade óssea alveolar em ratas
Anbinder AL*, Prado FA, Prado MA, Moraes LC, Rocha RF
Odontologia - UNIVERSIDADE DE TAUBATÉ. E-mail: raq@iconet.com.br
Os bisfosfonatos são medicamentos para o tratamento de doenças caracterizadas pelo aumento da reabsorção
óssea, como a osteoporose. As estatinas são utilizadas para redução de níveis elevados de colesterol
e estudos têm revelado sua ação anabólica no osso. O objetivo deste trabalho foi avaliar a influência da
ausência de hormônios ovarianos e dos tratamentos com sinvastatina ou alendronato sódico na densidade
óssea alveolar em ratas. Foram utilizadas 54 ratas que sofreram ovariectomia ou cirurgia simulada (sham).
Um mês após, os animais passaram a receber diariamente, via oral, 25 mg/kg de sinvastatina, 2 mg/kg de
alendronato ou igual volume de água (placebo). Trinta e cinco dias depois do início do tratamento os animais
foram sacrificados, as hemimandíbulas esquerdas removidas e radiografadas em aparelho de raios X digital.
Com auxílio de software para análise de imagens foi calculada a densidade radiográfica em tons de cinza da
área de osso alveolar sob o primeiro molar mandibular. As medidas foram tomadas 3 vezes e as médias, submetidas
à ANOVA, ao nível de 5%. Para avaliação da calibração intra-examinador, calculou-se o coeficiente
de variação das medidas repetidas, encontrando-se valores sempre inferiores a 3%. Os animais tratados com
alendronato apresentaram estatisticamente maiores valores de densidade que aqueles que receberam placebo
e não houve diferença estatística entre os valores das ratas tratadas com sinvastatina ou placebo. As ratas
ovariectomizadas apresentaram menor densidade óssea que as sham-operadas.
Concluiu-se que a ovariectomia reduziu a densidade óssea alveolar e que o tratamento com alendronato foi
eficiente para o tratamento desta situação.
Pc326
Células apresentadoras de antígenos no periodonto: Análise
comparativa entre pacientes transplantados e normorreativos
Kawamura JY*, Alves SM, Cury PR, Araújo VC, Araújo NS, Magalhães MHCG
Estomatologia - UNIVERSIDADE DE SÃO PAULO - SÃO PAULO. E-mail:
kwm_juliana@hotmail.com
A ciclosporina é a droga imunossupressora mais utilizada por pacientes transplantados de órgãos. Dentre
seus efeitos adversos, salienta-se a hiperplasia gengival medicamentosa (HGM) que, segundo a literatura,
não aumenta o risco para doença periodontal. Para melhor conhecimento do mecanismo da resposta inflamatória
do periodonto de pacientes que utilizam ciclosporina, a proposta do estudo foi analisar a expressão
das células apresentadoras de antígenos (CAAs) em biópsias gengivais destes pacientes comparativamente a
biópsias gengivais de pacientes normais. Vinte e oito espécimes com diagnóstico de gengivite e periodontite
de pacientes normais e 14 espécimes de HGM foram avaliados imunoistoquimicamente, através da técnica
estreptavidina-biotina, empregando-se os seguintes anticorpos: CD1a (células de Langerhans), FXIIIA
(células dendríticas intersticiais), CD68 (macrófagos). O número de células positivas foi comparado entre
os 3 grupos para 3 regiões: epitélio oral, epitélio sulcular e tecido conjuntivo . Os resultados foram analisados
estatisticamente e mostraram que, de modo geral, os espécimes de pacientes normais exibiram maior
quantidade de células de Langerhans, menor quantidade de macrófagos e de células dendríticas intersticiais,
quando comparados aos dos pacientes transplantados (p < 0,05).
Os resultados permitiram concluir que a diminuição das células de Langerhans em gengiva de pacientes
transplantados parece estar sendo compensada pelo aumento de macrófagos e de células dendríticas intersticiais
os quais apresentam funções semelhantes à primeira, no processo inflamatório.
Pc327
Impacto prognóstico da expressão dos antígenos p53 e
metalotioneína em lesões avançadas de carcinoma epidermóide
bucal
Elneser NE*, Cardoso SV, Faria PR, Loyola AM, Aguiar MCF
Pós-Graduação em Odontologia - UNIVERSIDADE FEDERAL DE UBERLÂNDIA. E-mail:
nadim_ctbmf@yahoo.com.br
Mutações no gene TP53 são encontradas na maioria dos carcinomas epidermóides bucais (CaEB), mas não
em todos eles. Experimentalmente, a proteína não-enzimática metalotioneína (MT) é capaz de remover átomos
de zinco da proteína p53, inativando-a. Em estudo anterior, observamos correlação direta e significativa entre
os índices de expressão desses dois antígenos no CaEB. Por outro lado, ambas as proteínas têm sido associadas
ao comportamento dessa doença. Assim, o objetivo do presente trabalho foi avaliar se grupos de CaEB, construídos
pela avaliação concomitante dos índices de imunomarcação de MT e p53, seriam diferentes em termos de
sobrevida global. Para tanto, foram avaliados 50 casos de lesões clinicamente avançadas (TNM III e IV). Após
ensaios imunoistoquímicos e construção de índices de marcação em relação a 500 células tumorais, os casos
foram classificados como negativos ou positivos para imunolocalização do antígeno p53 (ponto de corte = 10%),
e então como tendo expressão normal ou superexpressão do antígeno MT (ponto de corte = 76%). Assim, foram
delineados quatro grupos: 1) p53neg/MTpos; 2) p53pos/MTpos; 3) p53neg/MTsuper; 4) p53pos/MTsuper. Finalmente,
comparou-se a sobrevida global entre esses grupos, pela construção de curva de Kaplan-Meier e teste
de log-rank. Observou-se então que os tumores positivos para p53 e que, concomitantemente, superexpressavam
MT (grupo 4) apresentaram deterioração significativa de sobrevida em relação às demais lesões.
A observação concomitante da imunolocalização dos antígenos metalotioneína e p53 aparentemente é capaz de
diferenciar casos de carcinoma epidermóide bucal quanto à sobrevida.
Pc328
Utilização de LR White para visualização de materiais de rotina
pela microscopia ótica
Alfaro SEN*, Oliveira SP, Cruz RLS, Dias EP
Patologia - UNIVERSIDADE FEDERAL FLUMINENSE. E-mail: sielena@uol.com.br
Habitualmente, materiais para análise pela microscopia ótica ou eletrônica são fixados, processados,
cortados e corados diferentemente. A fixação convencional em formol é rápida e barata, porém, devido à
inclusão em parafina, os cortes são usualmente feitos com 5-7 µm de espessura. Perdem-se, assim, detalhes
citológicos, sobretudo em grande aumento. Estes materiais podem ser corados com hematoxilina-eosina
(HE) e processados para histoquímica (HQ) e imuno-histoquímica (IHQ). Porém, não é possível fazer cortes
semifinos e/ou ultrafinos. O processamento usual para ME visa à inclusão em resinas hidrofóbicas, que
impedem coloração por HE, HQ e IHQ, feitas em meio hidrofílico. A utilização de resinas hidrofílicas permite
fazer cortes semifinos e ultrafinos bem como coloração HE, HQ, IHQ e incluir espécimes maiores sem
prejuízo da posterior realização de cortes ultrafinos. Esta dualidade possibilitou visualização prévia com HE
para seleção direcionada de áreas para análise ultra-estrutural. Este trabalho objetivou testar a utilização da
resina hidrofílica LR White para obter cortes semifinos e ultrafinos no mesmo bloco. Utilizamos amostras
derivadas de 12 papilomas escamosos orais, dos quais processamos fragmentos para inclusão em parafina e
em LR White. Obtivemos cortes semifinos, corados com HE e comparados com os do material parafinado.
Tanto material parafinado como incluído em LR White permitiram a coloração HE e visualização do tecido.
Entretanto, no grande aumento foi evidente maior riqueza de detalhes com inclusão em LR White.
Concluímos que as resinas hidrofílicas são excelente opção para processar material, principalmente quando
precisa-se análise ultra-estrutural posterior.
Braz Oral Res, v. 19, Supplement (Proceedings of the 22 nd Annual SBPqO Meeting) 2005.
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