Biotecnologia

ertini, 1994), sugerindo que a presençadessas células seja essencial noperíodo inicial da maturação.A maturação representa o estágiofinal da preparação do ovócito para afecundação; portanto, as mudanças estruturaise bioquímicas que ocorremdurante esse período sãonecessárias para que esseprocesso seja completo.Entretanto, para que issoocorra, o ovócito precisater competência meiótica,que é adquirida progressivamentedurante afase final do crescimentoovocitário. Essa competênciase refere à capacidadedo ovócito de completara divisão meiótica,descondensar a cabeçado espermatozóide, formaros pró-núcleos e suportaro desenvolvimentoembrionário subseqüente(Warssaman & Albertini,1994). Ovócitoscompetentes necessitamter estocado fatores importantes,na forma de proteínas ouRNAm estável, que deverão ser utilizadosdurante a maturação, fecundação einício do desenvolvimento embrionário(Chan e Chian, 1998).Tendo em vista que os ovócitosmaturados in vitro, quando comparadosaos in vivo apresentam menorestaxas de blastocisto após a fecundaçãoe o cultivo in vitro (Takagi et al.,2001), pode-se supor que a maturaçãoainda continua sendo um problema naPIV. Sendo que, vários fatores podemafetar o sucesso da maturação ovocitária,entre eles podemos citar a morfologiado complexo cumulus-ovócito(CCO), as condições de maturação e acompetência do ovócito.A morfologia dos CCOs tem sidocorrelacionada com as taxas de blastocistos,a redistribuição das mitocôndriase o conteúdo de ATP dos ovócitos,os quais diferem entre os consideradosmorfologicamente bons e ruins. Emovócitos imaturos morfologicamentesuperiores, as mitocôndrias aparecemdistribuídas de forma uniforme na periferiado citoplasma. Após a maturação,aparecem como grupos maioreslocalizados não só na periferia mas34 Biotecnologia Ciência & Desenvolvimento - nº 26- maio/junho 2002Figura 3 - Fecundação in vitro de ovócitos bovinos, em queovócitos maturos e espermatozóides são co-incubados no meiode fecundação por um período de 12 a 18 horastambém na porção mais central docitoplasma, o que não ocorre nos ovócitosconsiderados inferiores (Stojkovicet al., 2001). Da mesma forma, oconteúdo de ATP em ovócitos imaturosé maior nos morfologicamente superiores,havendo uma correlação positivaentre a concentração de ATP doovócito e o número total de células dosembriões produzidos. Esses fatores,entre outros, podem ser responsáveispela diferença na capacidade de desenvolvimentodesses ovócitos.Além das características morfológicas,as condições de cultivo afetamdrasticamente a maturação. A presençade hormônios, substâncias antioxidantes,fatores de crescimento, temperatura,atmosfera gasosa, são algunsfatores que têm sido relatados comoresponsáveis por muitos dos problemasque ocorrem durante a maturação.Em bovinos, o crescimento do ovócitoestá completo quando o folículosatingem em torno de 2 mm de diâmetroe, nesse estágio, alguns ovócitos jáestão competentes para se desenvolverin vitro. Para a MIV, os ovócitos sãocoletados, geralmente, de folículos de2-6 mm, e são maturados in vitro porum período de 24 horas. Se compararmoscom a situação in vivo, folículosdesse diâmetro levariam alguns diasaté chegarem ao estágio pré-ovulatório.Portanto, esse período que correspondeao de dominância folicular, éeliminado no cultivo in vitro. É possívelque os vários processos, pelosquais os ovócitos passam durante esseperíodo, possam afetar a competênciados ovócitos utilizados para PIV, já quenesses o período final da foliculogênesenão ocorre (Dode e Adona 2001;Dieleman et al., 2002). Visando a superaressa situação, váriastentativas têm sidofeitas, utilizando agentesfisiológicos e farmacológicospara reter osovócitos imaturos emmeiose (Dode et al.1999; Adona et al.,2000a; Adona et al.,2000b; Dode et al.2000b). Essa retençãodo núcleo, por um determinadoperíodo antesda retomada da meiosedaria aos ovócitosuma maior oportunidadepara que as mudançascitoplasmáticas necessáriasà maturaçãopudessem ocorrer. Entretanto,até o momento,nenhuma melhora naprodução de embriões tem sido obtidaquando os ovócitos são retidos até 24horas após a aspiração (Dode e Adona,2001).Mesmo após a rigorosa seleção deovócitos e o uso de condições decultivo adequadas, a taxa de produçãode embriões viáveis ainda é o dobroem ovócitos maturados in vivo quandocomparados com os maturados in vitro(Van de Leemput et al., 1999).Portanto, o folículo de origem pareceser vital para conferir aos ovócitos oambiente necessário para atingir a completacompetência para o desenvolvimento.Essa hipótese foi confirmadapor Pivato et al. (1999) e Blodin et al.(2002), que utilizaram diferentes protocoloshormonais antes da OPU, eobtiveram ovócitos mais competentes,aumentando o número de embriõesproduzidos na PIV.Fecundação in vitroPara a FIV, espermatozóides e ovócitosmaturos são co-incubados em ummeio específico, por um período emtorno de 18 horas (figura 3), sendopossível co-incubar por períodos me-