Analytik von Aminosäuren und biogenen Aminen in fermentierten ...

1 EINLEITUNG 4
wegen der unterschiedlichen optischen Aktivität der D- und L-AS sowohl die optische
Reinheit eines Aminosäureenantiomeren als auch der Anteil beider optischer Anti-
poden einer AS in einer Mischung durch die Messung des Drehwinkels von linear
polarisiertem Licht ermittelt. Das Verfahren ist jedoch auf die Messung in Reinsub-
stanz beschräkt und nicht für Bestimmung in komplex zusammengesezten Proben-
matrices geeignet [46]. Durch die Behandlung mit D- und L-Aminosäurenoxidasen
(AO) lassen sich die Enantiomeren von AS enzymatisch bestimmen [47-50]. Auf-
grund der unterschiedlichen Substratspezifität der AO werden mit dieser Methode
nur bestimmte AS quantifiziert. Eine weitere klassische chromatographische Metho-
de stellt die Trennung von diastereomeren Dipeptiden mittels der Ionenaus-
tauschchromatographie nach Umsetzung der D- und L-AS mit L-Aminosäure-
carboxyanhydriden dar [51]. Aufgrund der umfangreichen Bedeutung der AS ist eine
schnelle und empfindliche Methode erforderlich. Die erforderliche hohe Tennlei-
stung, verbunden mit einer hohen Nachweisempfindlichkeit und einer möglichst weit-
reichenden Automatisierbarkeit der Analyse, bieten zur Zeit vor allem die Hochlei-
stungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) und die Gaschromatographie (GC)
[52,53]. Bei den chromatographischen Methoden zur Enantiomerentrennung beste-
hen zwei Möglichkeiten, zum einen die direkte Enantiomerentrennung an chiralen
stationären Phasen, zum anderen die indirekte Diastereomerentrennung nach Deri-
vatisierung mit chiralen Reagenzien an konventionellen achiralen Phasen.
1.1.2.2 Gaschromatographie (GC)
In der GC-Analytik von AS dominieren im Gegensatz zur HPLC die direkten Verfah-
ren zur Enantiomerentrennung, d.h. die Bestimmung der AS-Enantiomeren an chi-
ralen Phasen. GIL-AV et al. [54] stellten eine chirale Trifluoracetyl-L-leucin-
laurylester-Phase vor, mit deren Hilfe einige AS-Racemate gaschromatographisch in
ihre optischen Antipoden aufgetrennt werden konnten. Im Verlauf der folgenden
Entwicklung im Bereich der Trennung von D- und L-AS waren Phasen mit
N-substituierten AS wie z.B. L-Valin (L-Val) als Selektor [55-57], solche mit
L-Phenylalanin (L-Phe) [58] oder auch Phasen vom Dipeptidester-Typ, mit L-Val und
L-Leucin (L-Leu) [59] erfolgreich. Gerade der Einbau von AS in diesen Phase hat