Analytik von Aminosäuren und biogenen Aminen in fermentierten ...

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Aldrich-Chemie, 89555 Steinheim, Deutschland Ethanol p-Nitrobenzyloxycarbonylchlorid 2 MATERIAL 26 Fluka, Sigma-Aldrich Chemie, 82041 Deisenhofen, Deutschland Borsäure Pentafluorpropionsäureanhydrid Petrolether Salzsäure (32 %) Triethylamin Trifluoressigsäureanhydrid Novabiochem, Läufelfingen, Schweiz N-Isobutyryl-L-cystein N-Isobutyryl-D-cystein Merck Schuchardt, 85662 Hohenbrumm, Deutschland Artikel-Nr.: 11,260-7 Artikel-Nr.: 22,280-1 Artikel-Nr.: 15660 Artikel-Nr.: 77292 Artikel-Nr.: 77380 Artikel-Nr.: 91230 Artikel-Nr.: 90335 Artikel-Nr.: 91719 Artikel-Nr.: 07518 Artikel-Nr.: 08343 9-(Fluorenylmethyl)chloroformiat Artikel-Nr.: 818203 Fluka, Sigma-Aldrich Chemie, 82041 Deisenheim, Deutschland Dowex 50WX 8, 200-400 mesh, H + -Form Artikel-Nr.: 67H1538 2.2.4 Gase aus Druckgasflaschen für HPLC und GC Helium 4,6; Synthetische Luft (20,5 % Vol. O2 in N2); Wasserstoff 5,0; Stickstoff: technische Qualität (alle Gase von Messer-Griesheim, Düsseldorf, Deutschland)
2 MATERIAL 27 2.3 Herstellung von Lösungen und Reagenzien 2.3.1 OPA/MPA-FMOC-Cl-Methode 2.3.1.1 Aminosäurestammlösungen und Standardgemische OPA/MPA-FMOC-Cl-Methode Zur Herstellung der Aminosäurestammlösungen wurde L-Aminosäurenlösung (Ami- no Acid Standard H, im folgenden Standard H) von Pierce (Rockford, IL, USA) verwendet (siehe Kap. 2.2.1). Zusätzlich wurden DL-Cit, DL-Orn, Tau und Gaba abge- wogen und in Gemisch von MeOH und Kaliumboratpuffer (0,5 M, pH 10,0) (80:20, v:v) (MKB) gelöst, so daß eine Stammlösung mit der Endkonzentration von 2,5 mM erreicht wurde. DL-Asn, DL-Gln sowie DL-Trp wurden wegen ihrer Hydrolyse- bzw. Säureempfindlichkeit in bidest. Wasser gelöst. Die Standardgemische wurden durch Verdünnung der Stammlösungen mit MKB in den Konzentrationen 1, 5, 25, 50 und 200 μM hergestellt. Als interner Standard wurden Nva und Sar verwendet. Um eine Konzentration von 1,0 mM zu erhalten, wurden 1,17 mg Nva und 0,89 mg Sar ein- gewogen und anschließend mit MKB auf 10 ml aufgefüllt. Alle Stammlösungen und Standardgemische wurden bei -18 ° C aufbewahrt. 2.3.1.2 Reagenzien für OPA/MPA-FMOC-Cl-Derivate Kaliumboratpuffer (0,5 M, pH 10,0) Zur Herstellung eines 0,5 M Kaliumboratpuffers wurden 3,0915 g Borsäure in 90 ml bidest. Wasser gelöst. Der Ansatz wurde mit 5 M KOH auf pH 10,0 eingestellt und anschließend mit bidest. Wasser auf 100 ml aufgefüllt. OPA-MPA 100 mg OPA wurden in 1 ml 0,5 M Kaliumboratpuffer pH 10,0 und 9 ml MeOH ge- löst, und anschließend 100 μl Mercaptopropionsäure zugesetzt.
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4.1.3 Miso 4 ERGEBNISSE 81 Es wurde
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4.1.5 Sake 4 ERGEBNISSE 89 Die Erge
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4.1.6 Fischsaucen Sake 4 ERGEBNISSE
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4.2 Chirale Aminosäureanalytik 4 E
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4.3.4 Biogene Amine in Pepperonipas
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4.3.5 Biogene Amine in Sake 4 ERGEB
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5 DISKUSSION 129 Authentizitätskon
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5.2.1.3 Biogene Amine in Sojasaucen
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5 DISKUSSION 135 5.2.2.2 Chirale An
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5.2.6 Diskussion der Methoden 5 DIS
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Danke Herrn Prof. Dr. Brückner dan
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