Tierärztliche Hochschule Hannover Einfluss unterschiedlicher ...

3 Material und Methoden
Die genaue Zusammensetzung der in den Versuchen eingesetzten Medien und Chemikalien ist
in Anhang A beschrieben.
3.1 Ovum Pick-Up (OPU)
Die Abbildung 3.1 zeigt die einzelnen Arbeitsschritte des OPU-Versuchsteiles. Die Gewinnung
von Kumulus-Oozyten-Komplexen (KOK) erfolgt mittels OPU ab dem siebten Tag nach der
Brunst (Brunst=Tag 0). Bei jeder OPU-Session erfolgt eine Blutprobenentnahme für die spätere
Ermittlung des Serumprogesterongehaltes. Weiterhin werden morphologische Eigenschaften
der C.l. sowie Anzahl und Größen der punktierten Follikel erfasst. Nach jeder OPU-Session
erfolgt die Entfernung der Kumuluszellen und die Konservierung der Oozyten für die spätere
RT-qPCR. Die einzelnen Arbeitsschritte sollen im Folgenden ausführlich erläutert werden.
3.1.1 Auswahl der Versuchstiere und Feststellung des Versuchsbeginns
Die Versuchstiergruppe bestand aus insgesamt drei trockenstehenden Kühen sowie sechs Färsen
der Rasse Deutsche Holstein, die alle einen physiologischen Zyklus aufwiesen. Durch routinemäßige
tägliche Brunstkontrolle erfolgte zunächst eine Bestimmung des Zyklusstandes. Ab dem
siebten Tag (±1) nach Brunst (= Tag 0) wurden die Tiere dann über einen Zeitraum von 5-6 Wochen
regelmäßig dem OPU-Verfahren unterzogen. Im erstem Durchgang mit zweimal wöchentlichen
OPU-Sitzungen bestand die Versuchsgruppe aus sechs Tieren, davon je drei Kühe und
Färsen. Aufgrund auftretender Zwischenbrunsten wurde bei zwei Tieren der Punktionsdurchlauf
an Tag 21 des Zyklus abgebrochen und nach erneuter natürlicher Brunst neu begonnen.
Ein erneuter Durchgang des OPU-Versuches mit vier Tieren des ersten Durchganges erfolgte
nach einer zweimonatigen Ruhepause. Bei zwei Tieren fand die Punktion zweimal wöchentlich
statt, bei zwei Tieren dreimal. Drei Tiere, die vor Versuchsbeginn noch keiner OPU-Sitzung
unterzogen worden waren, bildeten den dritten Versuchsdurchgang mit zweimal wöchentlichen
Punktionen.
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