Versuch Nr. 7 Antibiotika und Agardiffusionstest Inhalt

Mikrobiologie-Praktikum
Versuch Nr. 7
Antibiotika und Agardiffusionstest
Inhalt
1. Einleitung 2
2. Durchführung 2
2.1 Herstellung der Impfsuspension 2
2.2. Herstellung des Saatagars 2
2.3 Vorbereitung der Streptomycin-Blättchen 3
2.4 Bebrütung und Auswertung 3
3. Ergebnisse 3
4. Diskussion 3

15.04.2005
1. Einleitung
Antibiotika:
Sammelbegriff für chemische Wirkstoffe aus Stoffwechselprodukten von Mikroorganismen,
die andere pflanzliche oder tierische Mikroorganismen (z.B. Bakterien, Pilze, Protozoen) im
Wachstum hemmen oder abtöten. Viren, mit Ausnahme einiger großer Viren, werden von
Antibiotika nicht beeinflusst, da sie keinen eigenen Stoffwechsel besitzen.
Agardiffusionstest:
In Abhängigkeit von Konzentration, relativer Molekülmasse und Temperatur diffundieren
Stoffe unterschiedlich schnell. Bringt man ein Antibiotika auf ein Agarmedium (z.B. mit hilfe
von Papierblättchen), so diffundiert dieses mit steigender Konzentration weiter in den Agar.
Man kann eine Hof-Bildung um die Blättchen beobachten. In diesem Bereich wird das
Bakterienwachstum verhindert. Der Durchmesser der Höfe ist proportional zur Antibiotika-
Konzentration.
Aufgabe dieses Versuches soll sein, die Konzentration einer Streptomycinlösung mit Hilfe
des Plattendiffusionstests zu bestimmen.
2. Durchführung
2.1 Herstellung der Impfsuspension
0,2g Nährbouillon der Firma Merck werden in 25 mL destilliertem Wasser gelöst und auf 5
Reagenzgläser gleichmäßig verteilt. Diese werden mit Kapsenberg-Kappen verschlossen und
autoklaviert.
Die sterilen Bouillons werden mit E.coli GY 767 beimpft und über nacht bei 37°C bebrütet.
2.2. Herstellung des Saatagars
Zusammensetzung des Saatagars auf 1L destilliertes Wasser
5,0g Pepton aus Fleisch
3,0g Fleischextrakt
15,0g Agar-Agar
Der Fleischextrakt und das Pepton werden in destilliertem Wasser gelöst und auf pH 7
eingestellt. Diese Lösung wird zu dem vorgelegten Agar-Pulver gegeben, homogenisiert und
autoklaviert.
Nach dem Autoklavieren lässt man den Agar auf ca 40°c abkühlen. 2 mL Impfsuspension pro
100 mL Agar werden unter leichtem Schwenken beigemengt und danach in Petrischalen
gegossen. (8-10 mL pro Petrischale)
2

15.04.2005
2.3 Vorbereitung der Streptomycin-Blättchen
Nun werden Papierblättchen von 9 mm Durchmesser mit jeweils drei Tropfen einer wässrigen
Streptomycinsulfatlösung getränkt. Die Streptomycinkonzentration soll 10, 100 und
1000 µ g/mL betragen.
Pro Platte werden 3 Blättchen derselben Konzentration aufgelegt. Dies geschieht um eine
statistisch abgesicherte Dreifachbestimmung zu erhalten.
2.4 Bebrütung und Auswertung
Die Agar-Platten werden 16 bis 24 Stunden bei 37°C bebrütet. Nach diesem Zeitraum werden
die Hemmhofdurchmesser (in mm) gemessen.
Zur Aufstellung der Eichkurve wird der Hemmhofdurchmesser gegen den dekadischen
Logarithmus der Streptomycin-Konzentration aufgetragen.
Auf der Basis dieser Eichkurve kann die Streptomycin-Konzentration der Probelösung
ermittelt werden.
3. Ergebnisse
Da sich der Agar im Brutschrank wieder verflüssigte und die Streptomycinplättchen darin
versanken, konnte keine Auswertung erfolgen.
4. Diskussion
Möglicherweise wurde zuwenig Agar-Agar verwendet, oder der verwendete Agar band
unzureichend ab.
3