Mikrobiologie-Praktikum Inhalt

Mikrobiologie-Praktikum
Versuch Nr. 3:
Luftkeimzahlbestimmung
Inhalt
1. Aufgabe S. 2
2. Nährbodenherstellung S. 2
2.1 Rezeptur S. 2
2.2 Durchführung S. 2
3. Beimpfung S. 3
4. Bebrütung S. 3
5. Auswertung S. 3
6. Diskussion S. 4

15.04.2005
1. Aufgabe
In diesem Versuch soll die Luftkeimzahl bestimmt werden. Dies geschieht mit dem
Luftkeimzahlmessgerät, welches die Luft durch eine Lochplatte saugt und dann auf ein
HNB-Agarmedium in einer Petrischale leitet. Es werden zwei verschiedene Luftvolumina
angesaugt , darum werden zwei Petrischalen benötigt. Nach 24 Stunden Bebrütung, soll dann
das erste mal die Anzahl der Gesamtkeimzahl unter Berücksichtigung der statistischen
Korrekturtabelle nach „Feller“ in GKZ/m 3 ermittelt werden. Je nach Keimart müssen
eventuell noch weitere Auszählungen vorgenommen werden.
2. Nährbodenherstellung
2.1 Rezeptur
Bestandteile: HNB-Agar (Komplexmedium zur Anzucht von Bakterien)
Zusamensetzung pro 1 Liter Leitungswasser
- 3g Fleischextrakt
- 5g Pepton aus Fleisch
- 5g Hefeextrakt
- 5g reines Natriumchlorid
- 15g Agar (pH: 7,2)
2.2 Durchführung
Alle Bestandteile bis auf das Agarpulver werden in einen Erlenmeyerkolben eingewogen und
in der Hälfte der erforderlichen Wassermenge gelöst. Durch gründliches Schütteln und mit
Hilfe eines Magnetrührers wird die Lösung homogenisiert. Das Agarpulver wird in 500mL
Meplatflaschen vorgelegt und die Lösung sowie das restliche Wasser unter Rühren
hinzugefügt. Anschließend wird der Agar bei 121°C 15 Minuten autoklaviert.
Um steriles Arbeiten zu ermöglichen, wird der Agar unter der Clean-Bench in Petrischalen zu
Nährböden gegossen. Beim Gießen ist darauf zu achten, dass eine luftblasenfreie ca. 5mm
starke Schicht entsteht. Die Arbeitstemperatur sollte 50°C betragen, da sich der Agar ab 40°C
verfestigt. Die abgekühlten Nährböden werden kopfüber im Kühlschrank bis zur Beimpfung
gelagert.
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15.04.2005
3. Beimpfung
Vor Beginn der Messung werden alle Teile des Luftkeimsammlers mit Isopropanol
desinfiziert. Das Gerät wird nun auf eine stabile Unterlage gestellt und eine Petrischale,
welche Nährboden enthält, eingesetzt. Nach Schließen des Lochdeckels erfolgt die
Programmierung (Volumen, Zeitverzögerung etc.). Der Staubdeckel wird entfernt und die
Messung durch Bestätigung mit „yes“ gestartet.
Das Gerät saugt 100 Liter Luft pro Minute an. Nach Beendigung des Probenahme schaltet
das Gerät selbstständig ab. Der Sammelkopf wird geöffnet, die Petrischale geschlossen,
entnommen und beschriftet.
Die Beimpfung fand im Büro der Chemikalienausgabe der Hochschule statt.
4. Bebrütung
Die beimpften Petrischalen werden bei 37°C im Brutschrank bebrütet.
5. Auswertung
Um nun, nach einer Bebrütungszeit von 24 Stunden und einer weiteren von ein paar Tagen,
die Luftkeimzahl zu bestimmen, werden zum jeweiligen Zeitpunkt die Kolonien ausgezählt
und statistisch durch die Formel von Feller korrigiert. Diese Korrektur ist notwendig ,da mit
zunehmender Zahl der Luftkeime auch die Wahrscheinlichkeit zunimmt, dass zwei Luftkeime
durch das selbe Loch im Deckel gesaugt wurden. Dies bedeutet bei Mikroorganismen, dass
zwei dicht benachbarte Keime nur eine Kolonie bilden.
Die „Feller-Korrektur-Formel“ lautet:
Pr = N (1/N + 17N-1 + 1/N-2 + 1/N-r +1)
Wobei :
Pr = statistisch korrekte Gesamtkeimzahl
N = die 400 Löcher der Lochplatte
r = Koloniezahl
Im Labor liegt eine Korrekturtabelle nach Feller vor, aus welcher unmittelbar nach der
Auszählung die statistisch korrekte Gesamtkeimzahl entnommen werden kann.
Mit diesem Wert kann dann die Gesamtkeimzahl auf 1m 3 errechnet werden.
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15.04.2005
Auszählung vom 1. Tag nach der Beimpfung (14.11.2003):
Datum der
Beimpfung
Ort der Beimpfung Volumen
[L/min]
Gezählte
Kolonien [r]
Gesamtkeimzahl nach
„Feller-Korrektur“ [Pr]
13.11.2003 Chemikalienausgabe 250 117 weiß glatt 138
13.11.2003 Chemikalienausgabe 1000 400 weiß glatt 2628
Auszählung vom 4. Tag nach der Beimpfung (17.11.2003):
Datum der
Beimpfung
Ort der Beimpfung Volumen
[L/min]
Gezählte
Kolonien [r]
13.11.2003 Chemikalienausgabe 250 1 weiß kraterförmig
+ weißer und gelber
Verwuchs
13.11.2003 Chemikalienausgabe 1000 1 weiß kraterförmig
+ weißer und gelber
Verwuchs +
Schimmel-Verwuchs
Gesamtkeimzahl nach
„Feller-Korrektur“ [Pr]
Durch Verwuchs keine
Auszählung und
Korrektur möglich
Durch Verwuchs keine
Auszählung und
Korrektur möglich
6. Diskussion
Am Tag nach der Beimpfung waren bei den Platten beider Volumina schon viele Kolonien
gewachsen. Auf dem Nährboden des Volumens von 1000 L war erkennbar, dass hier durch
jedes Loch der Lochplatte mindestens ein Keim gesaugt wurde. Die Kolonien hatten alle das
selbe Aussehen, weiß und glatt.
Am vierten Tag nach der Beimpfung konnte keine Auszählung und somit auch keine „Feller-
Korrektur“ vorgenommen werden, da die beiden Nährböden komplett mit Verwuchs bedeckt
waren. Erkennbar war jedoch, dass verschiedene Keime in der Luft der Chemikalienausgabe
sein müssen, da sowohl gelbe als auch weiße Kolonien sichtbar waren.
Zudem konnte eine weitere Einzelkolonie entdeckt werden, welche eine schnee-weiße Farbe
und eine kraterförmige Struktur besaß. Auf der 1000-L-Platte war zusätzlich
Schimmelverwuchs zu sehen.
Aus diesen Ergebnissen lässt sich erkennen, dass sich in der Chemikalienausgabe zum
Zeitpunkt der Beimpfung eine nicht unbeträchtliche Menge an Luftkeimen befand.
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