Kärntner Schaf - Verein Kärntner Brillenschafe

Tab. 1: Untersuchte DNA-Mikrosatellitenmarker
Locus Herkunft Genebank-
Accession-Nr.
23
Primer A Primer B
McM42 Schaf L34281 * catctttcaaaagaactccgaaagtg cttggaatccttcctaactttcgg
TGLA53 Rind ----- * gctttcagaaatagtttgcattca atcttcacatgatattacagcaga
OarFCB20 Schaf L20004 * ggaaaacccccatatatacctatac aaatgtgtttaagattccatacatgtg
INRA49 Rind X71588 gtttgtattagtttgtgttctttggc * ttccacaatcacacaggcca
MAF65 Schaf M67437 * aaaggccagagtatgcaattaggag ccactcctctgagaatataacatg
McM527 Schaf L34277 * gtccattgcctcaaatcaattc aaaccacttgactactccccaa
OarCP49 Schaf U15702 * acagacacggcttagcaactaaac gtttgtggggatgaatattccttcataag
OarAE119 Schaf L11050 * ctcagcaaatggttcctgggcacc gtttatagtgaggtgaccacttgatg
HSC Schaf M90759/M33306 * ctgccaatgcagagacacaaga gtctgtctcctgtcttgtcatc
MAF214 Schaf M88160 *aatgcaggagatctgaggcagggacg gggtgatcttagggaggttttggagg
OarFCB11 Schaf L01531 * gcaagcaggttctttaccactagcacc ggcctgaactcacaagttgatatatctatcac
*gelabelte Primer, Farbstoff siehe Tab.6; unterstrichen = getailt
Durchfu hrung der PCR:
Material:
0,2 ml PCR-Tubes
DNA-Thermo-Cycler (Gene Amp PCR-System 9600)
Taq-Polymerase (AmpliTaq Gold TM , 5 U/–l)
10 x PCR-Puffer II (Applied Biosystems)
MgCl2-Losung (25 mM, Applied Biosystems)
DMSO
PCR-Wasser (LiChrosolv ’ , Wasser fu r die Chromatographie, Merck)
Primermixe
dNTP°s (2,5 mM von jedem)
Durchfu hrung:
Die verwendeten Oligonukleotide wurden bei der Firma GibcoBRL, Wien bzw.
VBCGenomics, Wien bezogen, in Wasser aufgenommen und auf eine Konzentration von 10
–M eingestellt. Aus diesen Stocklosungen wurden Arbeitslosungen, bzw. Primermixe fu r die
jeweilige Multiplex-PCR hergestellt. Ein Mix fu r 100 Proben setzt sich wie folgt zusammen:
Tab. 2: Multiplex 1 (6plex)
Stock (∑M) Endkonzentration(∑M) Locus x 1 (∑l) x 100 (∑l)
10 0,25 McM42 0,38 37,50
10 0,20 OarFCB20 0,30 30,00
10 0,13 MAF65 0,20 19,50
10 0,30 TGLA53 0,45 45,00
10 0,67 McM527 1,01 100,50
10 0,25 INRA49 0,38 37,50
± 1,80 2,70 270,00