Entwicklung einer HPLC-Methode zur Bestimmung des - OPUS ...

kernhaltige Zellen zu dephosphorylieren und in dieser Form aus den Erythrozyten zu
transportieren (113). Die phosphorylierten Metaboliten wiederum sind die Ursache für
eine Abnahme des intrazellulären ATP-Anteils der Erythrozyten (118). Dadurch werden
diese beschädigt (vermutlich durch eine Membrandestabilisierung) und verstärkt im
Sinne einer Hämolyse im retikuloendothelialen System der Milz abgebaut (119). Die
Folgen sind eine damit einhergehende Anämie und die Freisetzung des RBV (117),
(120).
Die Metabolisierung erfolgt über zwei Wege: 1. Durch reversible Phosphorylierung (zu
Mono-, Di-, und Triphosphaten) und 2. Durch einen Abbauweg mit Deribosylierung und
Amidhydrolyse, so dass ein Triazolcarbonsäure-Metabolit entsteht (114), (121). Die
Kinetik der Phosphorylierung wurde in vitro an verschiedenen menschlichen Zellen
untersucht und festgestellt, dass vorwiegend Triphosphatmetaboliten entstehen (113).
RBV sowie seine beiden Triazolcarbamid- und Triazolcarbonsäure-Metaboliten werden
renal, vorwiegend in Form der Metaboliten eliminiert (117), (106).
1.3 High Performance Liquid Chromatography (HPLC)
1.3.1 Allgemeines
Die Flüssigchromatographie ist eine analytische Methode aus der Chemie, die in der
Lage ist, Moleküle aller Art qualitativ und quantitativ zu untersuchen. Die Vielfalt der
Trennverfahren ermöglicht sowohl die Untersuchung von niedermolekularen
organischen Molekülen (wie z. B. Arzneistoffen und Hormonen), als auch von großen
Biomolekülen (wie z. B. Peptiden und Kohlenhydraten). Für eine wirksame
Chromatographie sind sehr kleine Teilchen für die stationäre Phase und damit eine
hoher Druck für die mobile Phase notwendig. Daher wurde die HPLC in den
Anfangszeiten auch Hochdruckflüssigchromatographie (=High Pressure Liquid
Chromatographie) genannt. Die Hochleistungsflüssigchromatographie (= High
Performance Liquid Chromatography = HPLC) entwickelte sich in den 60er Jahren aus
der Säulenchromatographie (122).
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