„Transformation von Osteospermum ecklonis mit ... - ArchiMeD
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Material und Methoden 22<br />
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pLMV15 Das Plasmid enthält die 3'-Hälfte des full-length-Klons <strong>von</strong> LMV-O (nt 5363 - nt<br />
10080) in pBluescript II KS+ (Revers et al., 1997; GenBank X97704 - siehe<br />
Anhang 1).<br />
pBTΩ Dieses Plasmid enthält die Ω-leader Sequenz in pBluescript II KS+. Diese<br />
Sequenz (67 nt) stammt vom nicht-kodierenden 5'-Ende des viralen Genoms <strong>von</strong><br />
tobacco mosaic tobamovirus (TMV) und verstärkt die Translation transgener<br />
Transkripte (Gallie et al., 1987).<br />
pBAR-SPL3 Das Plasmid ist ein Derivat des binären Vektors pGPTV-BAR (Becker et al.,<br />
1992). Es enthält die SPL3 cDNA aus Arabidopsis thaliana (EMBL<br />
Zugangsnummer für SPL3 cDNA : Y09427) unter der Kontrolle des 35S<br />
Promotors und Poly(A)-Signals aus CaMV. Als Selektionsmarker dient das bar-<br />
Gen (Phosphinotricin-Resistenz) unter Kontrolle des nos-Promotors und<br />
Poly(A)-Signals.<br />
pBIN19 Binärer Vektor <strong>mit</strong> nptII-Gen (Kanamycinresistenz) unter Kontrolle des nos-<br />
Promotors und Poly(A)-Signals in der T-DNA (Bevan, 1984). Die erfolgreiche<br />
Transformation <strong>von</strong> Bakterien kann durch eine auf dem Plasmid kodierte<br />
Kanamycinresistenz überprüft werden.<br />
pUC18 und pUC19 Standardklonierungsvektor <strong>mit</strong> Ampicillinresistenz (Vieira & Messing, 1982).<br />
pBluescript II KS+ Standardklonierungsvektor <strong>mit</strong> Ampicillinresistenz (Alting-Mees & Short,<br />
1989).<br />
Tab. 3 : Plasmide, die zur Herstellung eigener Transformationsvektoren benutzt wurden<br />
2.1.3. Primer<br />
Alle Primer wurden <strong>von</strong> der Firma MWG-Biotech, Ebersberg, in PSF-gereinigter Qualität bezogen.<br />
LMV1 5' - GAT ATC AAC AAT GTC GAA AGA AGC TCT C - 3'<br />
LMV2 5' - TCG AAA AGC TTG CAA AGG TAA ACG G - 3'<br />
LMV3 5' - TTG CAA GCT TTT CGA ACT GCA TCA G- 3'<br />
LMV4 5' - GAT ATC TTA TTG AAA CTG TAC TGC GTC TCC - 3'<br />
CORE1 5' - GTC GAC TAA TAG AAG GAT GAC GAC ATC AAC - 3'<br />
CORE2 5' - CTC GAG CCT CTC CGT GTT CTC TTC - 3'
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