„Transformation von Osteospermum ecklonis mit ... - ArchiMeD

Inhaltsverzeichnis
______________________________________________________________________________________
2.4.6. Nachweis von Agrobacterium tumefaciens in regenerierten Pflanzen 45
2.4.7. Nachweis des SPL3-Konstrukts 46
2.4.8. NptII-ELISA 47
2.4.9. GUS-Färbung 47
2.5. Medien und Puffer 48
3. Ergebnisse 50
3.1. Vermehrung von lettuce mosaic potyvirus auf Lactuca sativa 50
3.2. Klonierung der Transformationsvektoren 51
3.2.1. Klonierung von pGJ-LMV-Prot 51
3.2.2. Klonierung der CORE-Konstrukte 55
3.2.3. Klonierung von pNPTII-SPL3 57
3.3. Transformation von Agrobacterium tumefaciens 58
3.4. Regeneration von Osteospermum ecklonis 59
3.5. Selektionsmarker für Osteospermum ecklonis 60
3.6. Antibiotika zum Eliminieren von Agrobacterium tumefaciens 63
3.7. Transformation von Osteospermum ecklonis 65
3.8. Transformation von Nicotiana benthamiana 66
3.9. Analyse transgener Osteospermum ecklonis 67
3.9.1. GUS-Färbung 67
3.9.2. Extraktion von pflanzlicher Gesamt-DNA 69
3.9.3. Nachweis des SPL3-Konstrukts 70
3.9.4. Nachweis von Agrobacterium tumefaciens 71
3.9.5. Nachweis des LMV-Prot-Konstrukts 72
3.9.6. Nachweis der CORE-Konstrukte 74
3.10. Analyse transgener Nicotiana benthamiana 75
3.10.1. Nachweis des LMV-Prot-Konstrukts 75
3.10.2. Multiplex-PCR 77
3.10.3. NptII-ELISA 79
4. Diskussion 80
5. Zusammenfassung 92
6. Literaturverzeichnis 94
7. Anhang 102
7.1. Sequenz der cDNA von lettuce mosaic potyvirus 102
Curriculum vitae 108