„Transformation von Osteospermum ecklonis mit ... - ArchiMeD

Einleitung 4
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Proteinasen in funktionelle Proteine prozessiert wird (Riechmann et al., 1992). Der offene Leserahmen
wird von zwei nicht-kodierenden Regionen flankiert, an das 5'-Ende des viralen Genoms ist ein Virus-
kodiertes Protein (VPg) gebunden. Diese Struktur unterscheidet potyvirale RNA von durch RNA-
Polymerase II transkribierter mRNA, an deren 5'-Ende 7-Methylguanylsäure (5'-cap) gebunden ist. Da
eine effiziente Translation von mRNA eine Interaktion zwischen 5'-cap und 3'-poly(A) erfordert
(Gallie, 1998), muß es für Potyviren einen alternativen Mechanismus geben.
VPg
6K1 6K2
P1 HC-PRO P3 CI
NIa
VPg Pro
NIb CP
Abb. 2 : Organisation eines Potyvirus Genoms (Revers et al., 1999). Potyviren haben eine
einzelsträngige, am 3‘-Ende polyadenylierte genomische RNA, an deren 5‘-Ende ein Virus-kodiertes
Protein (VPg) gebunden ist. Erläuterungen der Organisation des Polyproteins im Text.
Das translatierte Polyprotein wird von drei viruskodierten Proteinasen - P1, HC-Pro und NIa - in zehn
einzelne Proteine zerteilt (Riechmann et al., 1992). Das nuclear inclusion protein a (NIa) schneidet als
Proteinase an mindestens sieben Schnittstellen (Revers et al., 1997). Die von NIa erkannten
Schnittstellen sind die Dipeptide Q/A, Q/S, Q/G und Q/V. Als Konsensus findet man an der Position 4
upstream der Schnittstelle die Aminosäure Valin. Eine weitere Schnittstelle liegt intern zwischen der
VPg und der Proteinase Domäne an einem E/S Dipeptid (Dougherty & Parks, 1991). Die Proteinase-
Aktivität der helper component (HC-Pro) wurde erstmalig bei tobacco etch potyvirus (TEV)
nachgewiesen (Carrington et al., 1989). HC-Pro schneidet an seinem Carboxy-Terminus zwischen
G/G, die Sequenz der TEV Schnittstelle findet sich homolog im LMV Polyprotein an den Positionen
890 - 896 (QHYRVG/G). Die dritte Proteinase ist das Protein P1, das an seinem Carboxy-Terminus
das Dipeptid Y/S schneidet (Mavankal & Rhoads, 1991).
An der Replikation des viralen Genoms sind wahrscheinlich verschiedene viruskodierte Proteine
beteiligt (Revers et al., 1999), aber die zentrale Rolle kommt dem Protein NIb (nuclear inclusion
protein b) zu, für das Aktivität als RNA-abhängige RNA-Polymerase nachgewiesen werden konnte
(Hong & Hunt 1996).
Für das Protein P3 konnte noch keine Funktion nachgewiesen werden, es gibt aber Hinweise, daß es
an der Regulation der Replikation beteiligt ist. Nach der Insertion von 12 Nukleotiden in die für P3
kodierende Sequenz von TVMV (tobacco vein mottling potyvirus) wurde keine Replikation des
poly(A)