♦ 由 A. oryzae 產生胞外蛋白質之分類 已知固態培養及液態培養條件下,胞外蛋白質產生之差異。加上細胞壁上 蛋白質的分析,可將蛋白質分成四大類(圖五):在固態培養下表現、在液 態培養下表現、在兩種培養條件皆表現、在兩種培養條件下皆表現但在液 態培養中無法外泌。 ♦ 分析兩種培養條件下上述四群蛋白質之基因表現 利用北方分析,研究 glaB、dppV、glaA、xynG2、TAA、bgI、xynG1 的表 現,而 glaB、dppV 只於固態培養下表現,glaA、xynG2 在兩種培養條件下 皆表現但產量不同,TAA、bgI、xynG 在兩種培養條件下也會表現,但後 面兩種酵素無法外泌於液態培養基中。 參考文獻 1. Christensen, T., H. Woeldike, E. Boel, S. B. Mortensen, K. Hjortshoej, L. Thim, and M. T. Hansen. 1988. High level expression of recombinant genes in Aspergillus oryzae. Bio/Technology 6:1419-1422. 2. Hatamoto, O., H. Sekine, E. Nakano, and K. Abe. 1999. Cloning and expression of a cDNA encoding the laccase from Schizophyllum commune. Biosci. Biotechnol. Biochem. 63:58-64 3. Acuna-Arguelles, M. E., M. Gutierrez-Rojas, G. Viniegra-Gonzalez, and E. Favela-Torres. 1995. Production and properties of three pectinolytic activities produced by Aspergillus niger in submerged and solid-state fermentation. Appl. Microbiol. Biotechnol. 43:808-814 4. Hata, Y., H. Ishida, E. Ichikawa, A. Kawato, K. Suginami, and S. Imayasu. 1998. Nucleotide sequence of an alternative glucoamylase-encoding gene (glaB) expressed in solid-state culture of Aspergillus oryzae. Gene 207:127-134. 5. Akao, T., K. Gomi, K. Goto, N. Okazaki, and O. Akita. 2002. Subtractive cloning of cDNA from Aspergillus oryzae differentially regulated between solid-state culture and liquid (submerged) culture. Curr. Genet. 41:275-281.
圖表 圖一. 比較外泌蛋白質量,以 100 毫升培養液及 10 克 wheat bran 分析。 圖二. 0-40 時培養,蛋白質表現之差異,以 CBB 染色,比較液態及固態培養。 圖三. 依 MALDI-TOF MS 分析二維電泳上亮點,得到可辨認身分之蛋白質, 液態及固態發酵之差異。上至下分別為固態發酵、液態發酵、在液態發 酵時被細胞壁隔絕之蛋白質。