Biophysical studies of membrane proteins/peptides. Interaction with ...

SINOPSE
aceitantes. Dadores mais próximos da periferia da proteína podem estar mais próximos
de aceitantes do que dadores no centro da proteína. Tendo em conta esta preocupação,
um modelo de FRET foi desenvolvido para aplicação em sistemas contendo proteínas
com múltiplos resíduos de Trp, considerando as restrições geométricas da OmpF. Esta
metodologia permitiu a recuperação de um intervalo possível para a constante de
ligação entre a OmpF e o CP. Em virtude das grandes dimensões do trímero de OmpF,
dependendo do local de ligação ao antibiótico assumido no modelo utilizado na análise
dos dados de FRET, a eficiência de ligação pode ser diferente. Dois locais de ligação ao
CP correspondendo a situações limite (ligação no centro do trímero e ligação à periferia
do trímero) foram considerados. Comparando os resultados obtidos segundo estes
modelos e os resultados obtidos através de um método independente, foi possível
concluir que o local de ligação do CP à OmpF está provavelmente distante do centro do
trímero e mais próximo da periferia.
No Capítulo V, a interacção de um péptido anfipático N-terminal de um domínio N-
BAR com sistemas modelo de membranas foi estudada. Diversos autores consideraram
a hipótese de que este segmento contribui para as propriedades remodeladoras de
membranas do domínio N-BAR (tubulação de liposomas esféricos), através da inserção
profunda no interior da bicamada. Isto teria como consequência a indução de assimetria
entre as monocamadas dos lipossomas, que por fim levaria à alterações da curvatura na
membrana. Esta hipótese foi aqui testada através do estudo das interacções de um
péptido correspondendo a este segmento com sistemas modelo de membranas.
Novamente, metodologias de fluorescência foram utilizadas e complementadas com
microscopia electrónica. Conclui-se que a ligação do péptido às membranas é
essencialmente electrostática, afastando a hipótese frequentemente levantada de este
segmento dos domínios N-BAR agir através da estabilização da conformação do
domínio associado com membranas, mediante fortes interacções hidrófobas com o
interior da bicamada lipídica. De qualquer forma, os resultados de um estudo de FRET
apontam para um papel alternativo do segmento N-terminal do domínio N-BAR. Os
resultados demonstram claramente que o péptido se encontra na forma dimerizada
depois da ligação à membrana. Estes resultados estão em concordância com uma
proposta recente de que o segmento anfipático N-terminal dos domínios N-BAR poderia
agir através da mediação da associação entre dímeros de domínios BAR. A microscopia
electrónica não permitiu identificar alterações morfológicas significativas dos
lipossomas após interacção com o péptido.
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