Dissolved organic matter in water of Daugava river

Glikogēna noteikšana raugos S. cerevisiae izmantojot jaunus uzbenzantrona bāzes sintezētos fluoroforusI.KrallišaLatvijas Universitātes Mikrobioloģijas un biotehnoloģijas institūts, Rīga, Latvijakrallish@latnet.lvFluorescentās metodes mūsdienās uzskata par progresīvu un efektīvu pieejumikroorganismu fizioloģijas pētījumiem, kā arī biotehnoloģijas jomā. Izmantojot uzbenzantrona bāzes sintezētās fluorescentās zondes, tika veikti Saccharomyces cerevisiaeiekš šūnu rezerves metabolīta glikogēna biosintēzes pētījumi oksidatīvā stresa - 10% (v/v)spirta barotnē un normālos augšanas apstākļos. S. cerevisiae ir vērtīgo bioloģiski aktīvovielu producents un plaši izmantots pētījumos kā eukariotisko šūnu modelis, tāpēc tas irļoti perspektīvs un piemērots modelis fluorescento metožu izstrādei ar mērķi pētīteikariotisko organismu šūnu noturības mehānismus dažādu stresa faktoru ietekmei uzšūnu fizioloģiju.Lai atlasītu efektīvas fluorescentās zondes tika pārbaudīta jauniegūto zonžu piemērotībaun aktivitāte attiecībā pret mērķa savienojumu glikogēnu, kurš tika izdalīts no S.cerevisiae šūnām. Fluorescento zonžu efektivitāte tika salīdzināta ar komerciāloglikogēnam specifisko akriflavīna efektivitāti. Kā efektivitātes rādītāji tika ņemti zonžuspektrālu parametru (emisijas maksimums un fluorescences intensitāte) atkarība noglikogēna koncentrācijas. Tika pārbaudītas vairākas fluorescentās zondes izmantojotglikogēna standarta šķīdumu , kā arī glikogēns tika izdalīts no S. cerevisiae šūnām augotsintētiskajā Ridera barotne vai YPG barotnē. Glikogēns tika izdalīts no raugu šūnāmizmantojot 0,25 M Na 2 CO 3 (sārmainā frakcija) un 0,5M HClO 4 (skābā frakcija), kā arīdots kopējais glikogēna saturs šūnās. Dati iegūtie glikogēna satura noteikšanā, izmantojotakriflavīnu un atlasītos uz benzantrona bāzes sintezētos fluorescentos zondus tikasalīdzināti ar glikogēna noteikšanu šūnu ekstraktos ar vispārpieņemto ķīmisko antronametodi.Pētījumu rezultātā tika parādīta pozitīva korelācija starp glikogēna saturu un fluorescencesintensitāti izmantotos paraugos, kas ļauj izmantot jaunos uz benzantrona bāzes sintezētosfluorescentos zondus glikogēna satura ātram skrīningam raugu šūnu ekstraktos. Raugušūnas oksidatīva stresa apstākļos palielina rezerves savienojuma glikogēna sintēzi, līdzīgikā agrāk novērotam trehalozes uzkrājumam palielināšanai līdzīgos oksidatīva stresaapstākļos.- 44 -