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EFICIENCIA DE USO DEL NITRÓGENO MATERIALES Y MÉTODOS L a eficiencia de uso del nitrógeno se determinó con base en la relación kg de fruto producido por kg de N aplicado (Janssen, 1988). Contenido de clorofila “a” y “b” E l método utilizado para la determinación de la concentración de clorofila “a” y “b”, se basó en la utilización de un agente químico que extrae los distintos pigmentos foliares y fue descrito por Wellburn (1994). Se recolectaron taleolas (discos de 7 mm de diámetro) foliares de cada uno de los tratamientos y repeticiones evaluadas, libres de nervaduras con un peso aproximadao de 0.125 g y se colocaron en tubos de ensaye. Seguidamente se adicionaron 10 ml de metanol a cada tubo de ensaye y se dejó reposar durante 24 horas en oscuridad. Pasado este tiempo se procedió a la lectura en un espectrofotómetro VIS/UV, Spectrophotometer 6405 (Figura 9), a las longitudes de onda de 666, 653 y 470 nm. Se incluyó un blanco que contenía exclusivamente metanol. Las 47
concentraciones de clorofila “a” y “b” se expresaron como µg/cm 2 de peso fresco. Figura 9. Espectrofotómetro VIS/UV, ubicado en el Laboratorio de Fisiología y Nutricional del CIAD-Delicias, empleado en el análisis de clorofila en nogal. Determinación de pigmentos con el SPAD-502 portátil E l medidor portátil de clorofila SPAD-502 (Figura 10), es un instrumento utilizado para la medida relativa del verdor en tejidos de hojas (Hoeft y Peck, 2002). Los valores SPAD se basan en el principio de que la parte de la luz que llega a la hoja es absorbida por la clorofila y el resto se trasmite a través de ella entrando en contacto con la celda detectora, la cual es convertida en una señal eléctrica. La cantidad de luz captada por la celda es inversamente proporcional a la cantidad de luz utilizada por la clorofila. La señal es procesada y la absorbancia es cuantificada en valores adimensionales que van de 0 a 199, por lo que las unidades SPAD serán siempre las mismas de acuerdo con el tono verde de las hojas (Sainz 48
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