Manual de Métodos Analíticos de los Compuestos Orgánicos

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INECC-CCA, (2010). MANUAL DE MÉTODOS ANALITICOS DE LOS COMPUESTOS ORGANICOS PERSISTENTES
PARA LAS MATRICES PRIORITARIAS DEL PRONAME. México, p. 222.
NORTH AMERICAN COMMISSION FOR
ENVIRONMENTAL COOPERATION (NACEC)
DESARROLLO DE LOS PROTOCOLOS BASE
PARA EL PROGRAMA NACIONAL DE
MONITOREO Y EVALUACIÓN (PRONAME)
ANEXO 3 DEL REPORTE FINAL
MANUAL DE MÉTODOS ANALITICOS DE LOS
COMPUESTOS ORGANICOS PERSISTENTES PARA LAS
MATRICES PRIORITARIAS DEL PRONAME
L A B O R A T O R I O S A B C
QUÍMICA INVESTIGACIÓN Y ANÁLISIS S.A. DE C.V.
Revisión 3.5 Febrero 2012

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1.0 INTRODUCCIÓN
2.0 OBJETIVOS
3.0 MÉTODOS ANALÍTICOS
3.0.1 ESTRUCTURA DE LOS MÉTODOS
CONTENIDO
3.1 PLAGUICIDAS ORGANOCLORADOS (POCs)
3.1.1 Aplicación y Alcances
3.1.2 Resumen
3.1.3 Procedimientos de extracción y purificación de muestras
3.1.3.1 Interferencias generales
3.1.3.2 Seguridad general
3.1.3.3 Matrices
3.1.3.3.1 Aire Ambiente
3.1.3.3.2 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras,
superficiales epicontinentales y subterráneas)
3.1.3.3.3 Suelos
3.1.3.3.4 Sedimentos (marinos y epicontinentales)
3.1.3.3.5 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos, y Tejidos
animales
3.1.3.3.5.1 Tejidos y Alimentos con Alto Contenido de Grasa
(> 2% Grasa)
3.1.3.3.5.1.1 Leche
3.1.3.3.5.1.2 Queso, Yema de Huevo o Huevo
Deshidratado
3.1.3.3.5.1.3 Mantequilla
3.1.3.3.5.1.4 Hígado
3.1.3.3.5.1.5 Tejido graso
3.1.3.3.5.2 Alimentos con bajo contenido de grasa
3.1.3.3.5.2.1 Alta humedad y azucares bajos (>75%
agua < 5% azucares)
3.1.3.3.5.2.1.1 Lechuga, etc.
3.1.3.3.5.2.1.2 Huevo entero
3.1.3.3.5.2.2 Alta humedad, azucares intermedios
(>75% agua y 5-15% azucares)
3.1.3.3.5.2.3 Alta humedad azucares altos (>75%
agua

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3.1.4 Método de identificación y cuantificación instrumental
3.1.4.1 Aplicación y Alcances
3.1.4.2 Resumen
3.1.4.3 Equipos y Materiales
3.1.4.4 Reactivos y materiales de referencia
3.1.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptación y rechazo
3.1.4.6 Calibración
3.1.4.7 Procedimiento analítico
3.1.4.8 Desempeño del método
3.1.4.9 Tablas y figuras
3.2 BIFENILOS POLICLORADOS (PCBs)
3.2.1 Aplicación y Alcances
3.2.2 Resumen
3.2.3 Procedimientos de extracción y purificación de muestras
3.2.3.1 Interferencias generales
3.2.3.2 Seguridad general
3.2.3.3 Matrices
3.2.3.3.1 Aire Ambiente
3.2.3.3.2 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras,
superficiales epicontinentales y subterráneas)
3.2.3.3.3 Suelos
3.2.3.3.4 Sedimentos (marinos y epicontinentales)
3.2.3.3.5 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos, y Tejidos
animales
3.2.3.3.5.1 Tejidos y Alimentos con Alto Contenido de Grasa
(> 2% Grasa)
3.2.3.3.5.1.1 Leche
3.2.3.3.5.1.2 Queso, Yema de Huevo o Huevo
Deshidratado
3.2.3.3.5.1.3 Mantequilla
3.2.3.3.5.1.4 Hígado
3.2.3.3.5.1.5 Tejido graso
3.2.3.3.5.2 Alimentos con bajo contenido de grasa
3.2.3.3.5.2.1 Alta humedad y azucares bajos (>75%
agua < 5% azucares)
3.2.3.3.5.2.1.1 Lechuga, etc.
3.2.3.3.5.2.1.2 Huevo entero
3.2.3.3.5.2.2 Alta humedad, azucares intermedios
(>75% agua y 5-15% azucares)
3.2.3.3.5.2.3 Alta humedad azucares altos (>75%
agua

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3.2.4 Método de identificación y cuantificación instrumental
3.2.4.1 Aplicación y Alcances
3.2.4.2 Resumen
3.2.4.3 Equipos y Materiales
3.2.4.4 Reactivos y materiales de referencia
3.2.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptación y rechazo
3.2.4.6 Calibración
3.2.4.7 Procedimiento analítico
3.2.4.8 Desempeño del método
3.2.4.9 Tablas y figuras
3.3 HIDROCARBUROS POLIAROMÁTICOS (HPAs), CLORDECON Y
PENTACLOROBENCENO
3.3.1 Aplicación y Alcances
3.3.2 Resumen
3.3.3 Procedimientos de extracción y purificación de muestras
3.3.3.1 Interferencias generales
3.3.3.2 Seguridad general
3.3.3.3 Matrices
3.3.3.3.1Aire Ambiente
3.3.3.3.2 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras,
superficiales epicontinentales y subterráneas)
3.3.3.3.3 Suelos
3.3.3.3.4 Sedimentos (marinos y epicontinentales)
3.3.3.3.5 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos, y Tejidos
animales
3.3.3.3.5.1 Tejidos y Alimentos con Alto Contenido de Grasa
(> 2% Grasa)
3.3.3.3.5.1.1 Leche
3.3.3.3.5.1.2 Queso, Yema de Huevo o Huevo
Deshidratado
3.3.3.3.5.1.3 Mantequilla
3.3.3.3.5.1.4 Hígado
3.3.3.3.5.1.5 Tejido graso
3.3.3.3.5.2 Alimentos con bajo contenido de grasa
3.3.3.3.5.2.1 Alta humedad y azucares bajos (>75%
agua < 5% azucares)
3.3.3.3.5.2.1.1 Lechuga, etc.
3.3.3.3.5.2.1.2 Huevo entero
3.3.3.3.5.2.2 Alta humedad, azucares intermedios
(>75% agua y 5-15% azucares)
3.3.3.3.5.2.3 Alta humedad azucares altos (>75%
agua

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3.3.3.3.7 Leche Materna
3.3.4 Método de identificación y cuantificación instrumental
3.3.4.1 Aplicación y Alcances
3.3.4.2 Resumen
3.3.4.3 Equipos y Materiales
3.3.4.4 Reactivos y materiales de referencia
3.3.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptación y rechazo
3.3.4.6 Calibración
3.3.4.7 Procedimiento analítico
3.3.4.8 Desempeño del método
3.3.4.9 Tablas y figuras
3.4 BIFENILOS POLIBROMADOS (PBBs) y BIFENILOS POLIBROMADOS ETER (PBDEs)
3.4.1 Aplicación y Alcances
3.4.2 Resumen
3.4.3 Procedimientos de Extracción y Purificación de muestras
3.4.3.1 Interferencias generales
3.4.3.2 Seguridad general
3.4.3.3 Matrices
3.4.3.3.1 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras,
superficiales epicontinentales y subterráneas)
3.4.3.3.2 Suelos
3.4.3.3.3 Sedimentos (marinos y epicontinentales)
3.4.3.3.4 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos, y Tejidos
animales,
3.4.3.3.4.1 Tejidos y alimentos con grasa (≥ 2% Grasa)
3.4.3.3.4.1.1 Leche
3.4.3.3.4.1.2 Queso, Yema de Huevo o Huevo
Deshidratado.
3.4.3.3.4.1.3 Mantequilla
3.4.3.3.4.1.4 Hígado
3.4.3.3.4.1.5 Tejido Graso
3.4.3.3.4.2 Alimentos con Bajo Contenido de Grasa
3.4.3.3.4.2.1 Alta humedad azucares bajos (> 75%
agua < 5% azucares)
3.4.3.3.4.2.1.1 Lechugas, etc.
3.4.3.3.4.2.1.2 Huevo entero
3.4.3.3.4.2.2 Alta humedad azucares intermedios (>75%
agua y 5-15% azucares)
3.4.3.3.4.2.3 Alta humedad azucares altos (> 75% agua <
15-30% azucares)
3.4.3.3.4.2.4 Alimentos secos con baja humedad (≤ 75%
agua)
3.4.4 Método de Identificación y Cuantificación Instrumental
3.4.4.1 Aplicación y Alcances
3.4.4.2 Resumen
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3.4.4.3 Equipos y Materiales
3.4.4.4 Reactivos y Materiales de Referencia
3.4.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptación y rechazo
3.4.4.6 Calibración
3.4.4.7 Procedimiento Analítico
3.5 ACIDO PERFLUOROCTANICO SULFONICO (PFOS) Y SUS SALES,
3.5.1 Aplicación y Alcances
3.5.2 Resumen
3.5.3 Procedimientos de Extracción y Purificación de muestras
3.5.3.1 Interferencias generales
3.4.3.2 Seguridad general
3.5.3.3 Matrices
3.5.3.3.1 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras,
superficiales epicontinentales y subterráneas)
3.5.3.3.2 Suelos y Sedimentos
3.5.3.3.3 Alimentos procesados, sin procesar, organismos y tejidos
animales
3.5.3.3.3.1 Tejido graso e hígado
3.5.3.3.3.2 Alimentos procesados y sin procesar
3.5.4 Método de identificación y cuantificación instrumental
3.5.4.1 Aplicación y Alcances
3.5.4.2 Resumen
3.5.4.3 Equipos y Materiales
3.5.4.4 Reactivos y Materiales de Referencia
3.5.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptación y rechazo
3.5.4.6 Calibración
3.5.4.7 Procedimiento Analítico
3.6 METALES Y METALOIDES (Excepto Mercurio)
3.6.1 Aplicación y Alcances
3.6.2 Resumen
3.6.3 Procedimientos de Digestión de muestras
3.6.3.1 Interferencias generales
3.6.3.2 Seguridad general
3.6.3.3 Matrices
3.6.3.3.1Aire Ambiente
3.6.3.3.2 Aguas superficiales epicontinentales y subterráneas.
3.6.3.3.3 Aguas marinas, estaurinas y de lagunas costeras.
3.6.3.3.4 Suelos
3.6.3.3.5 Sedimentos (marinos y epicontinentales)
3.6.3.3.6 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos, y Tejidos
animales.
3.6.3.3.7 Sangre Humana
3.6.3.3.8 Leche Materna
3.6.4 Método de identificación y cuantificación instrumental
3.6.4.1 Aplicación y Alcances
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3.6.4.2 Resumen
3.6.4.3 Equipos y Materiales
3.6.4.4 Reactivos y materiales de referencia
3.6.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptación y rechazo
3.6.4.6 Calibración
3.6.4.7 Procedimiento analítico
3.7 MERCURIO
3.7.1 Aplicación y Alcances
3.7.2 Resumen
3.7.3 Procedimientos de extracción y digestión de muestras
3.7.3.1 Interferencias generales
3.7.3.2 Seguridad general
3.7.3.3 Matrices
3.7.3.3.1 Aire Ambiente
3.7.3.3.2 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras,
superficiales epicontinentales y subterráneas)
3.7.3.3.3 Suelos
3.7.3.3.4 Sedimentos (marinos y epicontinentales)
3.7.3.3.5 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos y Tejidos
animales
3.7.3.3.6 Sangre Humana
3.7.3.3.7 Leche Materna
3.7.4 Método de identificación y cuantificación instrumental
3.7.4.1 Aplicación y Alcances
3.7.4.2 Resumen
3.7.4.3 Equipos y Materiales
3.7.4.4 Reactivos y materiales de referencia
3.7.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptación y rechazo
3.7.4.6 Calibración
3.7.4.7 Procedimiento analítico
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1.0 INTRODUCCIÓN
La problemática de la medición analítica de los Compuestos Orgánicos Persistentes y de los
metales y metaloides tóxicos en matrices complejas como son las ambientales, se incrementa
cuando se utilizan métodos analíticos no estandarizados, ya que muchos de los métodos
publicados en la bibliografía científica no cuentan con los sustentos de validación necesarios o no
los publican para que otros técnicos o científicos los puedan utilizar confiablemente. No solo por
que no tengan los datos de desempeño completos, sino que en muchas ocasiones tienen defectos
en su redacción lo que los hace poco robustos.
Un método estandarizado no solo consiste en que haya sido probado y validado por varios
laboratorios competentes, sino que sea entendido por todos de la misma forma, en eso consiste la
robustez de un método analítico, que tenga un formato uniforme y que todos los que lo lean,
entiendan lo mismo.
Los métodos analíticos se clasifican en:
1.- Métodos primarios: Son métodos de la más alta calidad metrológica, cuya operación
está completamente descrita y entendida en términos de las unidades SI y cuyos resultados son
aceptados sin referencia a un patrón de la misma cantidad (Gravimetría, Volumetría,
Espectrometría de masas con dilución isotópica, etc.).
2.- Métodos Racionales o No Empíricos: Son métodos estandarizados perfectamente
caracterizados para una matriz específica, expresados usualmente en masa o fracción mol y en
principio cualquier efecto sistemático debido al sesgo del método o de la matriz debe ser corregido,
aunque es mas usual que éstos sean mínimos, normalmente el resultado del mensurando no
depende del método utilizado (p.ej. Contenido de Níquel en una aleación).
3.- Método Empíricos: Son métodos en los cuales el resultado del mensurando depende del
método utilizado (p. ej. Grasas y Aceites en aguas residuales), normalmente son métodos
acordados para propósitos de mediciones comparativas dentro de un particular campo de
aplicación, donde el mensurando depende característicamente del método utilizado. En estos
métodos no se pueden utilizar correcciones por sesgo del método o de la matriz y los resultados
del mensurando se deben referir al método utilizado. En el caso de los análisis del medio
ambiente, las variaciones del sustrato y de la matriz tienen efectos significativos y desconocidos
(p. ej. No existen 2 aguas residuales industriales o dos suelos o dos residuos peligrosos
exactamente iguales), por lo que los métodos analíticos que se utilizan, se consideran en este
rubro.
Los métodos que se utilizan para la medición de metales, metaloides , Plaguicidas
Organoclorados, los Hidrocarburos Poliaromáticos, los Bifenilos Policlorados, los PBDEs y los
PFOS son de tipo Racional, por lo que teóricamente, sin importar la técnica que lo conforme, debe
dar resultados comparables dentro de las incertidumbres que cada método tenga. Sin embargo,
existen factores intrínsecos en cada método como son las columnas analíticas en el caso de las
separaciones cromatográficas, la respuesta de los detectores utilizados, los procedimientos de
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extracción y limpieza de las muestras y los procedimientos de calibración que hacen que los
resultados analíticos puedan ser muy diferentes.
El propósito de la redacción de los métodos analíticos de este manual es precisamente tener en un
formato uniforme los métodos para determinar los COPs y los metales y metaloides que se desean
analizar en el PRONAME a partir de referencias estandarizadas y validadas, en todos los métodos
que se presentan se proporcionan los datos de desempeño y validación como guía para los
usuarios y las especificaciones de control de calidad necesarias para proporcionar resultados
analíticos confiables y comparables.
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2.0 OBJETIVOS
Contar con los métodos analíticos estandarizados y con sus datos homologados de desempeño y
control de calidad para determinar las Sustancias Persistentes y Bioacumulables, dentro de los
cuales se incluyen a los Compuestos Orgánicos Persistentes en un formato uniforme para que
sean utilizados por los integrantes del PRONAME.
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3.0 MÉTODOS ANALÍTICOS
En el presente capítulo se presentan los métodos de extracción, purificación y determinación
cualitativa y cuantitativa de los analitos abarcados en este proyecto.
3.0.1 ESTRUCTURA DE LOS MÉTODOS
Cada uno de los métodos desarrollados en el presente manual, tiene referencias específicas de
métodos estandarizados y validados por Instituciones extranjeras o internacionales ampliamente
reconocidas, solamente se modificó el formato para hacerlos uniformes y se incluyeron datos
sobre el desempeño del método, en algunos casos de otras referencias que lo han utilizado.
El formato de los métodos es el siguiente:
3.X.1 Aplicación y Alcances
3.X.1.1 Propósito
3.X.1.2 Analitos
3.X.1.3 Matrices
3.X.1.4 Limitaciones
3.X.2. Resumen
3.X.3 Procedimientos de extracción y purificación de muestras
3.X.3.1 Interferencias generales
3.X.3.2 Seguridad general
3.X.3.3 Matrices
3.X.3.3.1 Aire Ambiente
3.X.3.3.1.1 Equipo y materiales
3.X.3.3.1.2 Reactivos y Materiales de Referencia
3.X.3.3.1.3 Procedimientos de Extracción
3.X.3.3.1.4 Procedimientos de Purificación de Muestras
3.X.3.3.2 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras, superficiales
epicontinentales y subterráneas),
3.X.3.3.2.1 Equipo y materiales
3.X.3.3.2.2 Reactivos y Materiales de Referencia
3.X.3.3.2.3 Procedimientos de Extracción
3.X.3.3.2.4 Procedimientos de Purificación de Muestras
3.X.3.3.3 Suelos
3.X.3.3.3.1 Equipo y materiales
3.X.3.3.3.2 Reactivos y Materiales de Referencia
3.X.3.3.3.3 Procedimientos de Extracción
3.X.3.3.3.4 Procedimientos de Purificación de Muestras
3.X.3.3.4 Sedimentos (marinos y epicontinentales)
3.X.3.3.4.1 Equipo y materiales
3.X.3.3.4.2 Reactivos y Materiales de Referencia
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3.X.3.3.4.3 Procedimientos de Extracción
3.X.3.3.4.4 Procedimientos de Purificación de
3.X.3.3.5 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos y Tejidos
animales
3.X.3.3.5.1 Equipo y materiales
3.X.3.3.5.2 Reactivos y Materiales de Referencia
3.X.3.3.5.3 Procedimientos de Extracción
3.X.3.3.5.4 Procedimientos de Purificación de Muestras
3.X.3.3.6 Sangre humana
3.X.3.3.6.1 Equipo y materiales
3.X.3.3.6.2 Reactivos y Materiales de Referencia
3.X.3.3.6.3 Procedimientos de Extracción
3.X.3.3.5.4 Procedimientos de Purificación de Muestras
3.X.3.3.7 Leche Materna.
3.X.3.3.7.1 Equipo y materiales
3.X.3.3.7.2 Reactivos y Materiales de Referencia
3.X.3.3.7.3 Procedimientos de Extracción
3.X.3.3.7.4 Procedimientos de Purificación de Muestras
3.X.4.0 Método de identificación y cuantificación instrumental
3.X.4.1 Aplicación y Alcances
3.X.4.1.1 Matrices
3.X.4.1.2 Limitaciones
3.X.4.2 Resumen
3.X.4.3 Equipo y Materiales
3.X.4.4 Reactivos y Materiales de Referencia
3.X.4.5 Control de calidad y especificaciones de aceptación y rechazo
3.X.4.5.1 Verificación del Equipo
3.X.4.5.2 Verificación de la calibración inicial
3.X.4.5.3 Verificación de la contaminación de reactivos
3.X.4.5.4 Verificación del lote analítico
3.X.4.5.5 Verificación de las interferencias de matriz
3.X.4.5.6 Verificación de la Estabilidad de la Curva de Calibración
3.X.4.5.7 Verificación de estándares surrogados
3.X.4.5.8 Verificación de estándares internos
3.X.4.5.9 Control de Calidad Estadístico
3.X.4.5.10 Validación de modificaciones del método o de métodos alternos
3.X.4.5.11 Composición del lote analítico (para cada 20 muestras)
3.X.4.5.12 Criterios de aceptación y rechazo
3.X.4.6 Calibración
3.X.4.7 Procedimiento analítico
3.X.4.7.1 Análisis de los extractos de las muestras
3.X.4.7.2 Identificación de los analitos
3.X.4.7.3 Cálculos
3.X.4.8 Desempeño del Método
3.X.4.8.1 Límite de Detección
3.X.4.8.2 Límite Práctico de Cuantificación
3.X.4.8.3 Rango de Trabajo
3.X.4.8.4 Precisión
3.X.4.8.5 Exactitud
3.X.4.8.6 Incertidumbre
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3.X.4.9 Tablas y Figuras
Todos los métodos son basados en desempeño, es decir, pueden ser modificados con la condición
de que se alcancen los mismos parámetros de desempeño, este desempeño debe ser evaluado en
matrices reales y no con muestras de control de calidad de matriz simple.
Las referencias obtenidas que se tradujeron para cada uno de los métodos de extracción fueron
las siguientes:
MÉTODOS DE PREPARACIÓN DE MUESTRAS A DESARROLLAR (EXTRACCIÓN Y PURIFICACIÓN DE EXTRACTOS)
MATRICES Metales Mercurio
Congéneres de
PCBs
HPAs, Clordecon y
Pentaclorobenceno
Plaguicidas
Organoclorados
PBDEs PFOS
Aire Ambiente EPA IO-2.1 EPA IO-5 EPA TO-4A EPA TO-13A EPA TO-4A - -
Suelos y
Sedimentos
Aguas
Marinas
Aguas
Superficiales
epicontinental
es
Aguas
Estaurinas y
de Lagunas
Costeras
Aguas
Subterráneas
Sangre
Humana
Leche
Materna
EPA 3051A
EPA 3051A
EPA 200.10 EPA 3015-A
EPA 3015A EPA 3015A
EPA 200.10 EPA 3015-A
EPA 3015A EPA 3015-A
NIOSH 8005
Paulo R. et. al,
Multielement
Determination in
Small
Samples of
Human Milk
by Inductively
Coupled Plasma
Atomic Emission
Spectrometry.
Brasil. Biological
Trace element
research. 1997.
Morales I, Reyes
R, Alvarado J,
Domínguez J,
Mijares R (2007)
Diagnóstico de la
Contaminación de
Mercurio en el
Personal de una
Unidad
Odontológica
Caracas,
de
Venezuela. Acta
Odontol Venez
45, Nº 3/2007
Stewart A. et. al,
Measurement of
Total Mercury in
Biological
Specimens by
Cold
Atomic
Vapor
Fluorescente
Spectrometry.199
4 Clinical
Chemistry. Vol
40(2). p206-210.
EPA 3550C
/EPA 3620C
/EPA 3660C
EPA 3510C
/EPA 3620C
EPA 3510C
/EPA 3620C
EPA 3510C
/EPA 3620C
EPA 3510C
/EPA 3620C
NIOSH 8004
K Norén, et. al,
Methylsulfonyl
metabolites of
PCBs and DDE
in human milk
in
Sweden,1972-
1992. Environ
Health
Perspect. 1996
vol.104(7).
P766-772.
EPA 3550C /EPA
3630C
EPA 3510C / EPA
3630C
EPA 3510C / EPA
3630C
EPA 3510C / EPA
3630C
EPA 3510C / EPA
3630C
Ken, Sexton et al,
Polycyclic Aromatic
Hydrocarbons in
Maternal and Umbilical
Cord Blood from
Pregnant Hispanic
Women Living in
Brownsville, Texas; Int.
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3379;
doi:10.3390/ijerph80833
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L. Zainieri, et. al,
Polyciclyc aromatic
hydrocarbons (HPAs) in
human milk from Italian
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cigarette smoking and
residential area.
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67(7). p1265-1274
EPA 3550C /EPA
3620C /EPA 3660B
EPA 3510C /EPA
3620C
EPA 3510C /EPA
3620C
EPA 3510C /EPA
3620C
EPA 3510C /EPA
3620C
Mathur, H. B, et al,
Analysis of Pesticide
Residues in Blood
Samples from
Villages of Punjab;
India: Centre for
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metabolites of PCBs
and DDE in human
milk in
Sweden,1972-1992.
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Perspect. 1996
vol.104(7). P766-772
EPA 1614
Perfluorinated
Organic Chemical
in the European
enviroment.
Scientific Report.
Faculty of Science.
Univ. of
Amsterdam,
Holland
EPA 1614 ISO 25101:2009
EPA 1614 ISO 25101:2009
EPA 1614 ISO 25101:2009
EPA 1614 ISO 25101:2009
- -
- -
13

Este documento pertenece al INECC-CCA citar como:
INECC-CCA, (2010). MANUAL DE MÉTODOS ANALITICOS DE LOS COMPUESTOS ORGANICOS PERSISTENTES
PARA LAS MATRICES PRIORITARIAS DEL PRONAME. México, p. 222.
Alimentos,
tejidos y
Organismos
Bajo
contenido de
Grasas
Higado y
Tejidos
Alto
contenido de
Grasas
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FDA-EAM-
4,4-2010 FDA-EAM-4,5-2008 Food and Drug Administration, Pesticides Analytical Manual Method 303
FDA-EAM-
4,4-2010
FDA-EAM-
4,4-2010
FDA-EAM-4,5-2008
FDA-EAM-4,5-2008
Food and Drug
Administration,
Pesticides
Analytical
Manual Method
304
NOAA Technical
Memorandum
NOS ORCA 130.
nacional Status
and Trenes
Prrogam for
Marine
Environmetal
Quality.
Extraction of
biological
Tissues of trace
organic analisis
Pag. 98-101. US
Department of
Commerce.
Silver Spring
Maryland. March
1998.
Food and Drug Administration,
Pesticides Analytical Manual Method
304
Food and Drug Administration, Pesticides Analytical Manual Method 304
A continuación se presentan los esquemas de trabajo que se deben utilizar para el análisis de
muestras ambientales para evitar retrabajos:
MATRICES Metales Hg
MÉTODOS DE ANÁLISIS (CUALITATIVOS Y CUANTITATIVOS)
Congéneres
de PCBs
HPAs
Plaguicidas
Organoclorados
Survey of PFOS
and related
fluorochemicals in
food. Report
number: FD
08/04. Central
Science
Laboratory. York
UK. 2008
Extraction of
Potassium
Perfluorooctanes
ulfonate or other
anionic
fluorochemical
surfactants from
liver for analysis
using HPLC-
ES/MS. 3M
Environmental
Laboratory.
Method FACT-
.1.0 1998
Extraction of
Potassium
Perfluorooctanes
ulfonate or other
anionic
fluorochemical
surfactants from
liver for analysis
using HPLC-
ES/MS. 3M
Environmental
Laboratory.
Method FACT-
.1.0 1998.
PBBEs PFOS
Aire Ambiente EPA IO-3.4 EPA IO-5 EPA 8082A EPA 8270D EPA 8081B - -
Suelo y
Sedimentos
EPA 6010C EPA-7474A EPA 8082A EPA 8270D EPA 8081B
EPA
1614/
EPA
527
Perfluorinated
Organic
Chemical in the
European
enviroment.
Scientific
Report. Faculty
of Science.
Universidad de
Amsterdam
Holland
14

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INECC-CCA, (2010). MANUAL DE MÉTODOS ANALITICOS DE LOS COMPUESTOS ORGANICOS PERSISTENTES
PARA LAS MATRICES PRIORITARIAS DEL PRONAME. México, p. 222.
Aguas Marinas EPA 200.10 EPA-7470A EPA 8082A EPA 8270D EPA 8081B
Aguas
Superficiales
epicontinentales
Aguas
Estuarinas y de
Lagunas
Costeras
Aguas
Subterráneas
Sangre
Humana
Leche Materna
Alimentos,
organismos y
tejidos
EPA 6010C EPA-7470A EPA 8082A EPA 8270D EPA 8081B
EPA 200.10
/EPA 200.13
EPA-7470A EPA 8082A EPA 8270D EPA 8081B
EPA 6010C EPA-7470A EPA 8082A EPA 8270D EPA 8081B
NIOSH 8005
Paulo R. et.
al,
Multielement
Determination
in Small
Samples of
Human Milk
by Inductively
Coupled
Plasma
Atomic
Emission
Spectrometry.
Brasil.
Biological
Trace
element
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FDA-EAM-
4,4-2010
Morales I, Reyes
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Diagnóstico de la
Contaminación de
Mercurio en el
Personal de una
Unidad
Odontológica de
Caracas,
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Odontol Venez 45,
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Measurement of
Total Mercury in
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FDA-EAM-4,5-
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NIOSH 8004
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metabolites of
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1992. Environ
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Polycyclic Aromatic
Hydrocarbons in Maternal
and Umbilical
Cord Blood from Pregnant
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Brownsville, Texas; Int. J.
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Blood Samples
from Villages of
Punjab; India:
Centre for
Science and
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2005. (esta
metodología se
refiere al “EPA
8081B”)
K Norén, et. al,
Methylsulfonyl
metabolites of
PCBs and DDE
in human milk
in
Sweden,1972-
1992. Environ
Health
Perspect. 1996
vol.104(7).
P766-772.
Food and Drug Administration, Pesticides Analytical Manual
EPA
1614/
EPA
527
EPA
1614/
EPA
527
EPA
1614/
EPA
527
EPA
1614/
EPA
527
ISO 25101:2009
ISO 25101:2009
ISO 25101:2009
ISO 25101:2009
- -
- -
EPA
1614/
EPA
527
Analysis of
Fluorochemicals
in Liver Extracts
Using HPLC-
Electrospray/MS
3M
Environmental
Laboratory.
Method FACT-
.1.0 1998.
15

Este documento pertenece al INECC-CCA citar como:
INECC-CCA, (2010). MANUAL DE MÉTODOS ANALITICOS DE LOS COMPUESTOS ORGANICOS PERSISTENTES
PARA LAS MATRICES PRIORITARIAS DEL PRONAME. México, p. 222.
16

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3.1 PLAGUICIDAS ORGANOCLORADOS (POCs)
El principio de este método se basa en la extracción, purificación y concentración del extracto
purificado con objeto de la medición de los plaguicidas clorados presentes en el extracto orgánico
purificado de la muestra inyectando una alícuota de 2 µL en un cromatógrafo de gases con un par
de columnas capilares y un par de detectores de captura de electrones en paralelo (canales
cuantitativo y confirmativo). La identificación de los analitos se realiza por la comparación de sus
tiempos de retención y áreas con las de los estándares certificados en las dos columnas diferentes
simultáneamente, su cuantificación se realiza por medio del método de estándar externo.
NOTA: Este método está basado en su desempeño, se permite que el laboratorio omita cualquier
paso o modifique cualquier procedimiento, suponiendo que todos los requerimientos de
desempeño especificados se cumplan. Al laboratorio no se le permite omitir cualquier punto de
control de calidad, ni los parámetros que se especifiquen como “NO MODIFICABLES”. Los
términos “debe”, “puede” y “deberá” son mencionados a través de los métodos y están destinados
a ilustrar la importancia de los procedimientos para producir datos verificables en los rangos de
trabajo del método. El término “debe” es usado para indicar que los desarrolladores de este
método encontraron ciertos procedimientos esenciales en muestras analizadas exitosamente; de
todas maneras, estos procedimientos pueden ser modificados u omitidos si el laboratorio puede
demostrar fehacientemente que la calidad de los resultados no resulta afectada.
PARÁMETROS NO MODIFICABLES
Cromatógrafo de Gases (Columnas Capilares).
Detector de Captura de Electrones o Selectivo de Masas siempre que se demuestre que
tengan límites de detección equivalentes.
Se debe tener confirmación de identidad en cada muestra que se detecte supuestamente uno
de los analitos, esta confirmación puede ser realizada por el método de la columna alternativa
o por espectrometría de masas si lo permite la concentración detectada (se deben evaluar los
LDM o espectrometría de masas antes de su utilización confirmatoria para asegurar que sean
equivalentes a los de ECD).
3.1.1 Aplicación y Alcances
3.1.1.1 Propósito – Este es un método para el análisis de los plaguicidas clorados,
principalmente para los considerados como Compuestos Orgánicos Persistentes (COPs), esta
diseñado para ser altamente sensible y específico.
De acuerdo a la matriz analizada se utilizan diferentes métodos de extracción y purificación
para obtener extractos que son analizados en las mismas condiciones instrumentales.
3.1.1.2 Analitos –El método es aplicable a los siguientes analitos:
Aldrin
Clordano
DDT (y metabolitos DDD y DDE)
Dieldrin
Endrin
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α-Endosulfan
β-Endosulfan
Endosulfan sulfato
Heptacloro
Heptacloro epóxido
Hexaclorobenceno
Lindano (ɤ-BCH)
α-BCH
β-BCH
Mirex
Toxafeno
Este método puede ser aplicado a otros analitos de la misma familia de plaguicidas
organoclorados, se debe validar la aplicación para cada uno de los analitos que quiera ser
analizado.
3.1.1.3 Matrices – Este método es aplicable para el análisis de los plaguicidas
organoclorados mencionados en el inciso anterior en las siguientes matrices ambientales:
Aire Ambiente
Suelos
Sedimentos Marinos
Sedimentos Epicontinentales
Aguas Marinas
Aguas Estaurinas y de Lagunas Costeras
Aguas Superficiales Epicontinentales
Aguas Subterráneas
Alimentos procesados y sin procesar, Organismos y Tejidos animales
Sangre
Leche Materna
3.1.1.4 Limitaciones – Los límites de detección en las muestras reales dependerán de las
interferencias presentes en las mismas, por lo que es muy importante tener en cuenta que pueden
variar hasta en magnitudes de 10 a 1,000 veces (factores de concentración de las muestras e
interferencias presentes en el extracto purificado).
Este método está restringido para utilizarse sólo bajo la supervisión de analistas expertos en el uso de
cromatografía de gases y en la interpretación de sus resultados. Cada analista debe demostrar la
habilidad para generar resultados aceptables con este método.
3.1.2 Resumen
AIRE AMBIENTE
Se utiliza un muestreador alto volumen modificado (Hi-Vol), con un filtro de fibra de vidrio
y un cartucho absorbente con espuma de poliuretano (PUF). El muestreo se lleva a cabo
a una flujo de ~ 200-280 L/min durante 24 h.
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El filtro y el cartucho PUF se colocan en contenedores limpios y sellados, para luego
trasladarse al laboratorio para su análisis. Los plaguicidas se recuperan por extracción
Soxhlet con éter al 5% en hexano.
El volumen de los extractos se reduce con la técnica Kuderna-Danish (K-D) y se
purifican por cromatografía en columna.
Los extractos se someten a cromatografía de gases con detector de captura de
electrones (GC/ECD) para la detección y cuantificación de plaguicidas.
Generalmente se alcanzan límites de detección

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Después de la limpieza, el extracto concentrado se analiza inyectando una alícuota
de 2 µL en el sistema cromatográfico.
SANGRE HUMANA
Una alícuota de sangre es diluida con agua destilada, se añaden una solución
saturada de NaCl y se extrae con hexano:acetona el extracto se pasan a través de
sulfato de sodio anhidro y se concentra a aproximadamente 1-2mL. Se realiza una
limpieza por cromatografía de columna y el extracto es analizado por GC-MS
LECHE MATERNA
Una muestra de 10mL de leche se trata con una resina comercial y acido fórmico, los
analitos se extraen.
La limpieza de los extractos se lleva a cabo por cromatografía en columna.
Los compuestos organoclorados son analizados por GC-MS.
3.1.3 Procedimientos de Extracción y Purificación de muestras
Antes de utilizar cualquier procedimiento de limpieza, el analista debe procesar una
serie de estándares de calibración por medio del procedimiento para validar los patrones
de elusión y la ausencia de interferencias de los reactivos.
3.1.3.1 Interferencias generales
Las interferencias del método pueden originarse por la presencia de contaminantes
en los solventes, reactivos, material de vidrio o cualquier otro material durante el
procesamiento de la muestra (contaminación cruzada) o por la presencia de
sustancias diferentes que coeluyen en los tiempos de retención de los analitos de
interés (gas acarreador contaminado, partes del GC sucias y la presencia de
compuestos coeluidos de la matriz de la muestra).
El material de vidrio debe lavarse escrupulosamente. El material de vidrio
primeramente debe ser enjuagándo con el último disolvente utilizado, después lávelo
con agua caliente y detergente; enjuáguelo con agua corriente y agua desionizada.
Escúrralo, séquelo y enjuáguelo con acetona. Después de secarlo, selle el material
de vidrio y guárdelo en un ambiente limpio para evitar acumulación de polvo u otros
contaminantes. Guarde el material invertido o tapado con papel aluminio.
El uso de reactivos y disolventes de alta pureza ayuda a eliminar los problemas de
interferencias. Puede ser necesario purificar los disolventes por destilación en
material de vidrio. PRECAUCIÓN: Al purificar un disolvente se eliminan los
estabilizadores, lo que puede hacerlo peligroso. También pueden eliminarse
conservadores, reduciéndose su vida de anaquel.
La cromatografía de gases con la detección selectiva por GC/ECD disminuye el
riesgo de interferencias por compuestos orgánicos extraños. Sin embargo, ciertos
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plaguicidas organoclorados (p.ej., toxafeno y clordano) son mezclas complejas de
compuestos simples, lo cual puede causar dificultad en cuantificar exactamente una
formulación particular en una muestra de componentes múltiples.
Puede existir interferencia cuando se analiza una muestra con concentraciones bajas
de los analitos después de una muestra con concentraciones altas. Para evitar esto,
después de una muestra con concentraciones altas, debe inyectarse una o varias
veces hexano para asegurar que se obtengan valores precisos en la siguiente
muestra.
Pueden existir interferencias de la matriz cuando se extraen contaminantes de la
muestra. Las interferencias en la matriz varían considerablemente de fuente a fuente,
dependiendo de la muestra colectada. En la mayoría de las muestras es necesario
limpiar los extractos de la muestra. En ese caso debe confirmarse una identificación
positiva.
Es importante que las muestras y los estándares de trabajo se encuentren en el
mismo disolvente. El disolvente de trabajo para los estándares debe ser el mismo que
el disolvente final utilizado en la preparación de la muestra. De no ser este el caso,
puede afectarse la comparación cromatográfica entre los estándares y la muestra.
Debe tenerse cuidado al determinar endrin, ya que se ha reportado que puede
degradarse en el inyector “splitless”. El analista debe estar preparado para esta
posible interferencia.
Cantidades variables de plaguicidas comerciales, se adhieren al material de vidrio,
por lo que debe disminuirse la manipulación de la muestra y el contacto con
superficies de vidrio.
El aldrin se oxida rápidamente al contacto con cloro. La eliminación de cloro con tiosulfato de
sodio al hacer la colecta retardará la oxidación de estos compuestos.
PRECAUCIÓN: Un pico de tiempo de retención variable en la ventana de retención
de heptacloro ha sido detectado durante el análisis de agua de pozo, corriente o
grado reactivo, al parecer está relacionado con el dibutilftalato.
La presencia de azufre elemental resultará en picos anchos que interfieren con la detección de
plaguicidas organoclorados de elusión larga. Se sugiere el uso del método de limpieza con
cobre para remover el azufre. La recuperación del endrin aldehído (utilizando el procedimiento
TBA) se reduce drásticamente al utilizar este procedimiento de limpieza, este compuesto debe
determinarse antes de la limpieza del azufre.
Ceras, grasas y otros coextractables de alto peso molecular pueden removerse por el
procedimiento de limpieza de permeación de gel, ya que producen señales de fondo que
aumentan considerablemente el LDM y ensucia el ECD.
Los Bifenilos Policlorados interfieren con la identificación de los plaguicidas. La única forma
de identificar la presencia de plaguicidas en presencia de PCBs es su confirmación por
GC/MS.
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3.1.3.2 Seguridad general
La carcinogenidad y toxicidad de los químicos utilizados en este método no han sido
determinadas con precisión; de todas maneras, cada sustancia química debe ser
tratada como potencial peligro a la salud. La exposición a estas sustancias químicas
debe ser reducida al menor nivel posible. Se sugiere que el laboratorio realice
monitoreos de higiene ocupacional de cada reactivo a los que pueda estar expuesto
el analista y que dichos resultados estén disponibles para los analistas.
Los siguientes plaguicidas han sido clasificados tentativamente como posibles
carcinogénicos para animales y humanos: aldrin comercial, clordano, dieldrin,
heptacloro, hexaclorobenceno y toxafeno. Los materiales estándar puros y soluciones
estándares patrón de estos productos deben manipularse en una campana de
extracción o en una caja de guantes.
PRECAUCIÓN: Al purificar un disolvente se eliminan estabilizadores, lo que puede
hacerlo peligroso.
Este método puede no mencionar todas las precauciones de seguridad asociadas
con su uso. El laboratorio es responsable de mantener un ambiente de trabajo seguro
y un archivo de las normas de seguridad respecto a la exposición y manejo seguro de
las sustancias químicas especificadas en este método. Debe tenerse un archivo de
referencias de las hojas de información de seguridad el cual debe estar disponible a
todo el personal involucrado en estos análisis.
3.1.3.3 Matrices
3.1.3.3.1 Aire Ambiente
3.1.3.3.1.1 Equipo y Materiales
La mención de marcas, modelos y proveedores de equipos y materiales en este método se citan
debido a que fueron los utilizados para desarrollarlo y solamente tienen propósitos ilustrativos.
Su mención no implica ninguna aprobación oficial. Puede obtenerse un desempeño equivalente
usando otros equipos y materiales que no hayan sido especificados en este método, pero la
demostración del desempeño equivalente de otros equipos y materiales es responsabilidad del
laboratorio que utilice este método.
Sólo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este método
analítico.
Muestreador de altos volúmenes con cartucho PUF – Disponible de General Metal
Works (Modelo PS-1).
Cabeza de Muestreo para contener cartucho de vidrio con tapón PUF – Disponible
de General Metal Works.
Orificio de calibración – Disponible de General Metal Works
Manómetro – Para usarse con el orificio de calibración.
22

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Sistema de extracción Soxhlet – Incluyendo extractores Soxhlet (250 y 500 mL),
canastillas de calentamiento, transformadores de voltaje variable y fuente de
enfriamiento por agua – para la extracción de los cartuchos de PUF antes y después
del muestreo.
Horno de vacío conectado a un aspirador de agua – Para secar los cartuchos de PUF
extraídos.
Fórceps – Para manipular las muestras con filtros de fibra de cuarzo.
Dado – Para cortar los tapones de PUF.
Aditamentos para la preparación de los extractos, purificación y análisis.
Guantes de poliéster – Para manipular los cartuchos PUF y los filtros.
3.1.3.3.1.2 Reactivos y Materiales de Referencia
Los reactivos que requiere el método deben ser tipo ACS grado reactivo o pesticida, a menos
que otra cosa se indique.
Espuma de poliuretano – Stock de hojas de 3 pulgadas de ancho tipo poliéter
utilizado para rellenar muebles. Densidad 0.022 g/cm 3 .
Filtros de fibra de cuarzo – Pallflex 2500 Quast, o equivalentes.
Filtro de fibra de fieltro de 4.9 mg/cm 2 y 0.6 mm de ancho. Para colocar cabezas de
muestra para estudios de eficiencia de colección. Pre-extraídos con éter etílico al
5% en hexano.
Hexano – Grado pesticida o destilado en vidrio.
Éter etílico preservado con 2% de etanol – grado destilado en vidrio o equivalente.
Acetona – Grado pesticida o destilado en vidrio.
Alúmina – Grado de actividad IV. Tamiz 100/200.
3.1.3.3.1.3. Procedimientos de Extracción
Preparación de los cartuchos de muestreo (PUF).
El absorbente PUF es una espuma de poliuretano tipo poliéter (densidad No 3014 ó 0.0225
g/cm 3 ). Este tipo de espuma se usa para el relleno de muebles. Es blanca y al contacto con la
luz se torna amarillenta.
Los tapones de PUF son de 6.0 cm de diámetro, cortados cilíndricos de una hoja stock de 3
pulgadas y deben ajustar, con una ligera compresión en el cartucho de vidrio, soportados por la
malla de alambre. Durante el corte el dado se gira a alta velocidad (p.ej., en una prensa para
torno) y se lubrica continuamente con agua.
23

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Para la limpieza inicial, el tapón de PUF se coloca en un extractor Soxhlet y se extrae con
acetona de 12-24 horas a ~4 ciclos/hora. Para reusar los cartuchos, puede utilizarse éter etílico
al 5% en hexano como disolvente de limpieza.
La pieza de PUF ya extraída se coloca en un horno de vacío conectado a un aspirador de agua y
se seca a temperatura ambiente a ~2-4 horas (hasta que ya no se detecte el olor del disolvente).
La pieza se coloca en el cartucho muestreador de vidrio usando guantes de poliéster. El módulo
se empaca con papel aluminio previamente lavado con hexano, se coloca en un contenedor
etiquetado y se sella firmemente.
Para poder clasificar al lote como apto para ser utilizado, al menos uno de cada lote de
cartuchos ensamblados debe ser analizado como blanco de laboratorio. Un nivel

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laboratorio que utilice este método.
Sólo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este método
analítico.
Kuderna Danish con capacidad de 500 y 1,000 mL con columna de destilación Snyder
y matraces de 5 ó 10 mL Kontes
Embudos de separación de 2 L
Columna cromatográfica Pyrex 30 cm x 22 mm I.D. Con lana de vidrio al fondo y llave
de teflón.
Viales –con tapa de rosca y septa, de 2,0 mL, Agilent o equivalentes
Baño de agua con regulación de temperatura
3.1.3.3.2.2 Reactivos y Materiales de Referencia
Los reactivos que requiere el método deben ser tipo ACS grado reactivo o pesticida, a menos
que otra cosa se indique.
Cloruro de metileno disolvente de extracción – Grado pesticida o equivalente
Hexano, disolvente de cambio – Grado pesticida o equivalente
Sulfato de sodio anhidro - Granular anhidro (purificado por lavado con cloruro de
metileno seguido por calentamiento a 400 ºC por 4 horas).
Agua – A menos que otra forme se indique, el agua de referencia debe entenderse como
agua grado reactivo tipo I ASTM.
Florisil – Grado PR 60/100 activado a 675 ºC. El Florisil de diferentes lotes o
fuentes puede variar en cuanto a la capacidad de absorción. Se recomienda el uso
del valor de ácido laurico para estandarizar la cantidad de Florisil utilizada. El
procedimiento de referencia determina la absorción de la solución de ácido laurico
en hexano expresada en mg/g de Florisil. La cantidad de Florisil que se va a utilizar
para cada columna se calcula dividiendo 110 entre la proporción y multiplicando
por 20 g.
3.1.3.3.2.3 Procedimiento de Extracción
Todas las muestras deben ser extraídas como máximo una semana después de su colecta.
Retire las muestras del almacenamiento y permita que se establezca el equilibrio con la
temperatura ambiente.
Tomar un volumen de 1 L de la muestra en un matraz de separación de 2 L, Se mide el pH y si
es necesario este debe ser ajustado con acido sulfúrico 1:1 o con hidróxido de sodio 10 N de
modo que el pH quede dentro de un rango de 5 a 9.
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Posteriormente se adiciona la mezcla de surrogodos (Tetracloro-m-xileno y decaclorobifenilo).
Adicione al matraz 60 mL de cloruro de metileno, agite durante 1 o 2 minutos, permita que las
fases se separen en un lapso de tiempo de 10 minutos.
Drene la fase orgánica en un matraz. Re extraiga la fase acuosa con dos porciones mas de
cloruro de metileno de 60 mL y reúna los extractos orgánicos con el primero.
Si la muestra presenta problemas de emulsión durante la extracción se deberá utilizar
procedimientos mecánicos de separación como filtración, centrifugación, fibra de vidrio u otro
método físico para romper la emulsión.
Posteriormente el extracto se hace pasar por una columna que tenga 10 cm de sulfato de sodio
anhidro y este es transferido a un Kuderna-Danish, se añaden piedras de ebullición y se
concentran los extractos en un baño maria a una temperatura de 60-65 ºC hasta que se tenga un
volumen aparente de 1 mL, permita que se enfrié y posteriormente agregue 10 mL de Hexano y
continúe la concentración hasta un volumen de aproximadamente 5 mL
3.1.3.3.2.4 Procedimiento de Purificación de Muestras
Limpieza en columna de Florisil
Prepare una columna de Florisil de 22 mm de ID x 300 mm que contenga 10 cm de
Florisil activado sobre este colocar una capa de 1 cm aproximadamente de Na2SO4
anhidro. Humedezca la columna con 40-50 mL de hexano, coloque un concentrador
K-D en la parte inferior de la columna para recibir el eluato.
Transfiera el extracto de hexano a la columna y eluya con 30 mL del disolvente de
elusión al 6% (éter etílico/hexano).
Eluya con 30 mL de la disolución de elusión al 15% (éter etílico/hexano).
Eluya con 30 mL de la disolución de elusión al 50% (éter etílico/hexano).
Adicione una piedras de ebullición y evapore el disolvente en baño maria, cuando se tenga un
volumen aparente de 10 mL retirar el KD de la fuente de calor, esperar a que se enfríe y
terminar de evaporar el disolvente con nitrógeno a un volumen final de 1 mL.
3.1.3.3.3 Suelos
3.1.3.3.3.1 Equipo y Materiales
La mención de marcas, modelos y proveedores de equipos y materiales en este método se citan
debido a que fueron los utilizados para desarrollarlo y solamente tienen propósitos ilustrativos.
Su mención no implica ninguna aprobación oficial. Puede obtenerse un desempeño equivalente
usando otros equipos y materiales que no hayan sido especificados en este método, pero la
demostración del desempeño equivalente de otros equipos y materiales es responsabilidad del
laboratorio que utilice este método.
Sólo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este método
analítico.
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Equipo Kuderna-Danish (K-D) – Con capacidad de 500 y 1,000 mL con columna de
destilación Snyder y matraces de 5 ó 10 mL Kontes.
Extractor ultrasónico
Columna cromatográfica Pyrex 20 mm I.D. Con lana de vidrio al fondo y llave de
teflón.
NOTA: Los discos de vidrio poroso son difícilmente descontaminados después de
que se han pasado extractos altamente contaminados. Las columnas sin
poros pueden ser seleccionadas. Use un pequeño tapón de lana de vidrio
Pyrex para retener el absorbente. Lave previamente el tapón de lana con 50
mL de acetona seguido de 50 mL del solvente de elusión antes del
empacamiento de columna con absorbentes.
Baño de agua – Calentador, con cobertura con anillos concéntricos, capaz de control la
temperatura (+ 5 ºC). El baño debe utilizarse en una campana.
3.1.3.3.3.2 Reactivos y Materiales de Referencia
Los reactivos que requiere el método deben ser tipo ACS grado reactivo o pesticida, a menos
que otra cosa se indique.
Agua – A menos que otra forme se indique, el agua de referencia debe entenderse como
agua grado reactivo tipo I ASTM.
Acetona grado pesticida o equivalente
Hexano grado pesticida o equivalente
Cloruro de metileno grado pesticida o equivalente
Éter etílico
Sulfato de sodio – Granular anhidro (purificado por lavado con cloruro de metileno
seguido por calentamiento a 400 ºC por 4 horas).
Gránulos de cobre
Florisil – Grado PR 60/100 activado a 675 ºC. El Florisil de diferentes lotes o
fuentes puede variar en cuanto a la capacidad de absorción. Se recomienda el uso
del valor de ácido láurico para estandarizar la cantidad de Florisil utilizada. El
procedimiento de referencia determina la absorción de la solución de ácido láurico
en hexano expresada en mg/g de Florisil. La cantidad de Florisil que se va a utilizar
para cada columna se calcula dividiendo 110 entre la proporción y multiplicando
por 20 g.
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3.1.3.3.3.3 Procedimientos de Extracción
Mezcle 10 g de la muestra sólida con 10 g de sulfato de sodio anhidro; o bien con la cantidad
necesaria para tener la muestra como un polvo. Adicionar los estándares surrogados y 100 mL
de la mezcla de cloruro de metileno-acetona 1:1.
Sumergir el brazo del sonicador hasta que se encuentre un centímetro dentro del disolvente y
sonique durante 3 minutos a la potencia recomendada por el fabricante.
Decante el extracto y filtre en papel Whatman No. 41.
Repita la extracción en dos ocasiones mas con 100 mL de la mezcla cloruro de metilenoacetona
1:1 y reúna los extractos.
Ensamble un concentrador Kuderna Danish (K-D) sujetando un tubo concentrador de 10 mL a
un matraz de evaporación de 500 mL.
Seque el extracto pasándolo a través de una columna de secado que contenga alrededor de 10
cm de sulfato de sodio anhidro. Colecte el extracto seco en un concentrador K-D. Lave el
matraz de extracción y la columna con sulfato de sodio con 100 a 125 mL del solvente de
extracción para completar la cantidad transferida.
Agregue una o dos perlas de ebullición limpias al matraz de evaporación y unir una
columna Snyder de tres bolas. Humedezca previamente la columna Snyder agregando
aproximadamente 1 mL de cloruro de metileno. Coloque el aparato K-D en un baño
María (60 a 65 C) de manera que el tubo concentrador esté parcialmente sumergido en
el agua caliente. Ajustar la posición vertical del aparato y la temperatura del agua
requerida para completar la concentración en 15 ó 20 minutos. A un rango adecuado de
destilación las bolas de la columna estarán en constante movimiento sin que las
campanas se inunden. Cuando el volumen aparente de líquido sea de
aproximadamente 1 mL, retirar K-D y dejarlo enfriar por lo menos 10 minutos. Quitar
momentáneamente la columna Snyder, agregar 50 mL de hexano y una nueva perla de
ebullición, unir nuevamente la columna Snyder y concentrar el extracto a un volumen de
5 mL para llevar a cabo la purificación de la muestra; tape el tubo concentrador y
almacene en refrigeración si el procedimiento no se va a llevar a cabo inmediatamente.
Si el extracto se va almacenar por más de dos días deberá transferirse a un vial con
tapa roscada y película de teflón.
3.1.3.3.3.4 Procedimiento de Purificación de muestras
Limpieza en columna de Florisil
Prepare una columna de Florisil de 22 mm de ID x 300 mm que contenga 10 cm de
Florisil activado sobre este colocar una capa de 1 cm aproximadamente de Na2SO4
anhidro. Humedezca la columna con 40-50 mL de hexano, coloque un concentrador
K-D en la parte inferior de la columna para recibir el eluato.
Transfiera el extracto de hexano a la columna y eluya con 30 mL del disolvente de
elusión al 6% (éter etílico/hexano).
Eluya con 30 mL de la disolución de elusión al 15% (éter etílico/hexano).
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Eluya con 30 mL de la disolución de elusión al 50% (éter etílico/hexano).
Adicione una piedras de ebullición y evapore el disolvente en baño maria, cuando se tenga un
volumen aparente de 10 mL retirar el KD de la fuente de calor, esperar a que se enfríe y
terminar de evaporar el disolvente con nitrógeno a un volumen final de 10mL.
Limpieza con cobre
Al extracto adicionar 2 g de cobre metálico en gránulos (limpio) y agitar vigorosamente
durante 1 minuto.
3.1.3.3.4 Sedimentos (marinos y epicontinentales)
Ver procedimiento para suelos
3.1.3.3.5 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos y Tejidos animales,
Equipo y Materiales
La mención de marcas, modelos y proveedores de equipos y materiales en este método se citan
debido a que fueron los utilizados para desarrollarlo y solamente tienen propósitos ilustrativos.
Su mención no implica ninguna aprobación oficial. Puede obtenerse un desempeño equivalente
usando otros equipos y materiales que no hayan sido especificados en este método, pero la
demostración del desempeño equivalente de otros equipos y materiales es responsabilidad del
laboratorio que utilice este método.
Sólo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este método
analítico.
Equipo Kuderna-Danish (K-D) – Con capacidad de 500 y 1000 mL con columna de
destilación Snyder y matraces de 5 ó 10 mL Kontes.
Trituradora de alta velocidad – Trituradora waring o equivalente.
Columnas cromatográficas – Con llave de teflón y tapón de lana de vidrio; de 22mm
ID x 30mm.
Embudo de separación – Con capacidad de 2000, 1000 y 500 mililitros y llave de
teflón.
Columna Micro-Snyder – 2 bolas (Kontes Glass Co. No. 621400 o equivalente).
Columna Micro-Vigreaux – Kontes Glass Co. No. K-569251 o equivalente.
Reactivos y Materiales de Referencia
Los reactivos que requiere el método deben ser tipo ACS grado reactivo o pesticida, a menos
que otra cosa se indique.
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NOTA: El almacenaje de las soluciones estándar (patrón, compuestas, calibración
interna y estándares surrogados) debe ser a 4 o C en contenedores de
politetrafluoroetileno (PTFE) en la oscuridad. Cuando se prepara un lote de
estándares, se recomienda que las alícuotas del lote deben guardarse en pequeños
viales individuales. Todas las soluciones estándares patrón deben reemplazarse
después de un año o antes si la rutina de control de calidad indica algún problema.
Todas las otras soluciones estándares debe remplazarse después de seis meses o
antes si la rutina de control de calidad indica algún problema.
Acetonitrilo CH3CN
Éter de petróleo
Éter etílico
Acetonitrilo saturado con Éter de petróleo– Sature CH3CN con éter de petróleo.
Metanol – USP, grado reactivo o ACS.
Solución de álcali alcohólica al 2% – Disuelva 2 g KOH en metanol y diluya a 100
mL.
Solvente de elusión al 6% – Diluya 60 mL de éter etílico a 1 L con éter de petróleo.
Solvente de elusión al 15% – Diluya 150 mL de éter etílico a 1 L de éter de petróleo.
Solvente de elusión al 50% – Diluya 500 mL de éter etílico a 1 L de éter de petróleo
Florisil – Grado PR 60/100 activado a 675 ºC. El Florisil de diferentes lotes o
fuentes puede variar en cuanto a la capacidad de absorción. Se recomienda el uso
del valor de ácido láurico para estandarizar la cantidad de Florisil utilizada. El
procedimiento de referencia determina la absorción de la solución de ácido láurico
en hexano expresada en mg/g de Florisil. La cantidad de Florisil que se va a utilizar
para cada columna se calcula dividiendo 110 entre la proporción y multiplicando
por 20 g.
Sulfato de sodio anhidro - Granular anhidro (purificado por lavado con cloruro de
metileno seguido por calentamiento a 400 ºC por 4 horas).
Extracción de grasa
3.1.3.3.5.1 TEJIDOS Y ALIMENTOS CON GRASA (≥ 2% GRASA)
3.1.3.3.5.1.1 LECHE
Coloque 100 mL de leche (diluya leche evaporada 1:1 con agua) en un tubo de
centrifuga de 500 mL, adicione 100 mL de metanol, aproximadamente 1 g de oxalato
de sodio o de potasio y agite fuertemente. Adicione 50 mL de éter etílico y agite
vigorosamente 1 min abriendo el tubo para liberar la presión generada y deje reposar
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3 minutos; después adicione 50 mL de éter de petróleo y agite vigorosamente
durante 1 min abriendo el tubo para liberar la presión generada y deje reposar 3
minutos. Centrifugue aproximadamente durante 5 min a 1500 r.p.m. Retire la fase
orgánica y colóquela en un embudo de separación de 1 L que contenga de 500 a 600
mL de agua y 30 mL de solución saturada de NaCl. Re extraiga dos veces el residuo
acuoso del tubo de centrifuga con porciones de 50 mL de la mezcla éter etílico – éter
de petróleo (1:1) agitando vigorosamente, centrifugue y transfiera la fase orgánica
en el embudo de separación después de cada extracción. Mezcle muy lentamente los
extractos con el agua, drene y deseche la fase acuosa. Vuelva a lavar la fase
orgánica en dos ocasiones con 100 mL de agua y deseche la fase acuosa en cada
lavado. (Si se forma emulsión adicione 5 mL de la solución saturada de NaCl a la
fase orgánica o incluya un lavado con agua). Pase el extracto a través de una
columna de Na2SO4 de 50 x 25 mm OD y colecte el eluato en un K-D en el cual
previamente colocó una piedra de ebullición. Lave la columna con pequeñas
porciones de éter de petróleo y evapore el disolvente a una temperatura de 40 °C en
baño maria. Cuando el volumen aparente sea de 1 mL apague el baño, deje enfriar y
siga evaporando con nitrógeno hasta la obtención de la grasa (debe registrar el peso
de la grasa obtenida).
Partición con acetonitrilo
Pese ≤ 3 g de grasa, disuelva con un poco de éter de petróleo y transvase a un
embudo de separación de 125 mL, adicione éter de petróleo tal que el volumen total
de grasa y éter de petróleo sea de 15 mL, adicione 30 mL de CH3CN saturado con
éter de petróleo y agite vigorosamente durante 1 min. Permita la separación de fases
y drene el CH3CN en un embudo de separación de 1L que contenga 650 mL de agua,
40 mL de la solución saturada de NaCl y 100 mL de éter de petróleo. El éter de
petróleo del embudo de 125 mL reextráigalo 3 veces con porciones de 30 mL de
CH3CN saturado en éter de petróleo, en cada extracción, drene el acetonitrilo en el
embudo de 1L.
Mantenga el embudo en posición horizontal y mezcle vigorosamente durante 30-45 s.
Permita la separación de fases y drene la fase acuosa en un segundo embudo de 1 L;
adicione 100 mL de éter de petróleo y agite durante 15 segundos, permita la
separación de fases. Descarte la fase acuosa y combine el éter de petróleo con el
éter de petróleo del embudo original y lave con dos porciones de 100 mL de agua.
Descarte las fases acuosas y pase el extracto de éter de petróleo a través de una
columna de 50 x 25 mm. OD de Na2SO4 en un concentrador K-D de 500 mL.
Enjuague el embudo y después la columna con 3 porciones de 10 mL de éter de
petróleo. Reúna los extractos y concéntrelos en un K-D a un volumen aproximado de
10 mL para llevar a cabo el proceso de purificación.
Purificación en columna de Florisil
Prepare una columna de Florisil de 22 mm de ID x 300 mm que contenga 10 cm de
Florisil activado sobre este colocar una capa de 1 cm aproximadamente de Na2SO4
anhidro. Humedezca la columna con 40-50 mL de éter de petróleo, coloque un
concentrador K-D en la parte inferior de la columna para recibir el eluato.
Transfiera el extracto de éter de petróleo a la columna y permita su paso por la
columna con un flujo de 5 mL/min, enjuague los contenedores con dos porciones de 5
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mL de éter de petróleo y hágalos pasar por la columna, enjuague las paredes de la
columna con pequeñas porciones de éter de petróleo y eluya con 200 mL del
disolvente de elusión al 6% a 5 mL/min.
Eluya con 200 mL de la disolución de elusión al 15% a 5 mL/min
Eluya con 200 mL de la disolución de elusión al 50%
Adicione una piedras de ebullición y evapore el disolvente en baño maria, cuando se
tenga un volumen aparente de 10 mL retirar el KD de la fuente de calor, esperar a
que se enfríe y terminar de evaporar el disolvente con nitrógeno a un volumen final
de 10 mL.
3.1.3.3.5.1.2 QUESO, YEMA DE HUEVO O HUEVO
DESHIDRATADO
Coloque una muestra de 25 a 100 g de queso picado o 25 a 50 g de huevo (para
obtener 3 g de grasa), 2 g de oxalato de sodio o potasio y 100 mL de MeOH en un
mezclador de alta velocidad y mezcle durante 2 o 3 min (si por experiencia con estos
productos se sabe que la emulsión no se romperá durante la centrifugación, adicione
1 mL de agua/2g de la muestra antes del mezclado). Coloque el extracto en un tubo
de centrifuga 500 mL (o divida en dos tubos de 250 mL), adicione 50 mL de éter
etílico y agite vigorosamente por 1 min dejando reposar. Posteriormente adicione 50
mL de éter etílico y continúe como en 3.1.3.3.5.1.1 a partir de “centrifugue a 5 min
aproximadamente a 1500 r.p.m.”
3.1.3.3.5.1.3 MANTEQUILLA
Caliente a aproximadamente 50 °C hasta que se funda y filtre.
Continúe a partir de la partición en acetonitrilo como se indica en el punto
3.1.3.3.5.1.1
3.1.3.3.5.1.4 HIGADO
Pese de 25 a 50 g de muestra y triture en un mezclador de alta velocidad (si el
contenido de grasa es conocido o puede estimarse, ajuste el tamaño de la muestra
de tal forma que el máximo de grasa extraída sea de 3 g). Adicione 100 g de Na2SO4
anhidro y mezcle con espátula hasta la obtención de un polvo homogéneo, retire la
muestra de las orillas del vaso de mezclado con una espátula. Adicione 150 mL de
éter de petróleo y mezcle a una alta velocidad durante 2 min. Decante el éter de
petróleo sobrenadante en un embudo Büchner de 12 cm (con papel filtro) en un
matraz kitazato de 500 mL. Reextraiga los residuos contenidos en el vaso de
mezclado con dos porciones de 100 mL de éter de petróleo y mezcle durante 2 min
en cada ocasión (mezcle 1 min pare la mezcladora, limpie las orillas del vaso con una
espátula y continué mezclando durante 1 min mas). Decante el éter de petróleo
sobrenadante de los mezclados en el embudo Büchner combinando todos los
extractos, enjuague el vaso de mezclado y el Büchner con tres porciones de 25 a 50
mL éter de petróleo. Inmediatamente después del último enjuague, presione el
residuo del embudo Büchner con el fondo de un vaso para forzar a salir el éter de
petróleo remanente. Reúna los extractos y páselos a través de una columna de 40x25
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mm OD de Na2SO4 anhidro y colecte el eluato en un concentrador K-D de 500 o 1000
mL. Lave el matraz y la columna con pequeñas porciones de éter de petróleo.
Evapore la mayor parte del éter de petróleo en baño maria. Transfiera el extracto a un
vaso tarado, usando pequeñas cantidades de éter de petróleo. Evapore el éter de
petróleo con nitrógeno en baño maria hasta la obtención de la grasa. Pese y registre
el peso de la grasa extraída.
Continúe desde la partición en acetonitrilo como se indica en el punto 3.1.3.3.5.1.1
3.1.3.3.5.1.5 TEJIDO GRASO
Seguir el procedimiento descrito en 3.1.3.3.5.1.4
3.1.3.3.5.2 ALIMENTOS CON BAJO CONTENIDO DE GRASA
3.1.3.3.5.2.1 Alta humedad y azucares bajos ( > 75% agua < 5%
azucares)
3.1.3.3.5.2.1.1 Lechugas, Biota vegetal.
Pese 100 g de muestra cortada o triturada en un vaso de mezclado, adicione 200 mL de CH3CN y 10
g de Celite, mezcle a alta velocidad. Posteriormente filtre en un embudo Buchner (con papel filtro)
con matraz kitazato de 500 mL. Transfiera el filtrado a un matraz graduado de 250 mL y registre el
volumen (F).
Transferencia de residuos a éter de petróleo
Mida cuidadosamente 100 mL de éter de petróleo y póngalo en un embudo de separación, añada el
filtrado obtenido anteriormente. Agite vigorosamente de 1 a 2 min, adicione 10 mL de la solución
saturada de NaCl y 600 mL de agua. Mantenga el embudo en posición horizontal y mezcle
vigorosamente de 30 o 45 s. Permita la separación de fases y descarte la parte acuosa, lave la fase
orgánica con dos porciones de 100 mL de agua, descarte la fase acuosa y transfiera la fase orgánica a
una probeta de 100 mL registrando el volumen (P).
Adicione aproximadamente 15 g de Na2SO4 anhidro y agite vigorosamente (no permita que el
extracto este en contacto con el Na2SO4 mas de 1 hr o puede resultar perdidas de pesticidas
organoclorados por absorción).
Concentre a 10 mL en baño de agua en un concentrador K-D.
Continúe con la limpieza en columna de florisil como se indica en el punto
3.1.3.3.5.3.1.
3.1.3.3.5.2.1.2 Huevo entero
Si se va a utilizar el cascaron, este debe molerse a una alta velocidad para reducirlo
lo mas posible; adicionar yema, clara y mezclar a una velocidad baja durante 5 min
o bien hasta que la muestra este homogénea (una baja velocidad de mezclado
disminuirá la formación de grumos).
Pese ≤ 25 g de la mezcla de huevo y proceda como se indica en 3.1.3.3.5.2.1.1 a
partir de la adición de los 200 mL de CH3CN.
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3.1.3.3.5.2.2 Alta humedad, azucares intermedios ( > 75% agua y 5-
15% de azucares)
A 100 g de muestra se le adicionan 200 mL de CH3CN y 50 mL de agua y se
mezclan a alta velocidad. Se procede como en 3.1.3.3.5.2.1.1 a partir de la filtración
en el embudo Buchner.
3.1.3.3.5.2.3 Alta humedad azucares altos ( > 75% agua < 15-30%
azucares)
A 100 g de muestra adicione 200 mL de CH3CN, 50 mL de agua y mezcle a alta
velocidad durante 2 min. Se procede como en 3.1.3.3.5.4.1.1 a partir de la filtración
en embudo Buchner.
3.1.3.3.5.2.4 Alimentos secos con baja humedad (≤ 75% agua)
Pesar y moler de 20 a 50 g de muestra y hacerla pasar por un tamiz de malla 20.
Colocar de 20 a 25 g de la muestra en el vaso de un mezclador de alta velocidad,
adicionar 350 mL de agua al 35% en CH3CN (puede adicionar 10g de Celite para
ayudar la filtración) permita que la muestra se humedezca completamente y
posteriormente mezcle durante 5 min a alta velocidad y proceda como en
3.1.3.3.5.2.1.1 a partir de la filtración en embudo Buchner.
3.1.3.3.6 Sangre humana
3.1.3.3.6.1 Equipo y Materiales
Todo el material debe ser lavado con detergente, enjuagado con agua y finalmente
enjuagado con agua destilada y después con hexano.
Rotavapor
Kuderna Danish Con capacidad de 500 y 1,000 mL con columna de destilación Snyder
y matraces de 5 ó 10 mL Kontes
Embudos de separación de 125 mL
Columna de secado – Columna cromatográfica Pyrex 20 cm x 12 mm I.D. Con lana de
vidrio al fondo y llave de teflón.
Viales –con tapa de rosca y septa de 2.0 mL, Agilent #96-000099-00 o equivalentes
Baño de agua con regulación de temperatura
Vasos de precipitados de 50 mL
3.1.3.3.6.2 Reactivos y Materiales de Referencia
Los reactivos deben ser grado HPLC, destilados y revisados por cualquier contaminación de
pesticida.
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Acetona
Éter etílico
Hexano
Florisil – Grado PR 60/100 activado a 675 ºC. El Florisil de diferentes lotes o
fuentes puede variar en cuanto a la capacidad de absorción. Se recomienda el uso
del valor de ácido láurico para estandarizar la cantidad de Florisil utilizada. El
procedimiento de referencia determina la absorción de la solución de ácido láurico
en hexano expresada en mg/g de Florisil. La cantidad de Florisil que se va a utilizar
para cada columna se calcula dividiendo 110 entre la proporción y multiplicando
por 20 g.
Sulfato de sodio anhidro - Granular anhidro (purificado por lavado con cloruro de
metileno seguido por calentamiento a 400 ºC por 4 horas).
3.1.3.3.6.3 Procedimientos de Extracción
5mL de sangre son diluidos con 25mL de agua destilada, se añaden 2mL de una
solución saturada de NaCl, se transfieren a un embudo de separación de 125mL y se
realizan 3 extracciones con hexano:acetona (1:1) (20mL) agitando el embudo
vigorosamente por 2-3 min. Los 3 extractos combinados se pasan a través de sulfato
de sodio anhidro y se concentraron a aproximadamente 1-2mL usando un rotavapor
con vacío.
3.1.3.3.6.4 Procedimiento de Purificación de muestras
El florisil se activa a 130˚C durante toda la noche y se deja enfriar en un desecador
antes de usarse. El peso de florisil que se debe usar es predeterminado por
calibración usando ácido láurico. 1g de florisil se empaca en una columna
cromatográfica de vidrio de 20 cm de largo y 12 mm de diámetro interno, se añade
sulfato de sodio anhidro (0,5cm) sobre el florisil y la columna es pre-eluida con
hexano. Se transfiere el extracto a la columna, y se eluye con hexano (10mL), 6%
éter etílico en hexano (10mL), 15% éter etílico en hexano (10mL), 50% éter etílico en
hexano (10mL) y finalmente con éter etílico (10mL). Los extractos se combinan, se
evapora el disolvente llevando a sequedad y se reconstituyen en 2 mL de hexano.
3.1.3.3.7 Leche Materna
3.1.3.3.7.1 Equipo y Materiales
Baño ultrasónico
Lipidex 5000®. Gel lipofílico utilizado para la separación de ácidos grasos y
esteres. Hidroxialcoxipropil-dextrano
3.1.3.3.7.2 Reactivos y Materiales de Referencia.
Metanol grado HPLC
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Cloruro de metileno grado HPLC
Cloroformo grado HPLC
Ácido fórmico grado analítico
Agua desionizada
Oxido de Aluminio grado II - III
3.1.3.3.7.3 Procedimiento de Extracción
Se pesa una muestra de leche (10mL) en un matraz con tapón de teflón.
Se adiciona estándar interno y se mezcla cuidadosamente con la leche; posteriormente, se adicionan
10mL de acido fórmico a la mezcla así como 5.0g de Lipidex* 5000; la mezcla se agita bajo una
temperatura de 35ºC durante 2.5 horas, al cabo de las cuales es transferida a una columna de vidrio
(2cm de diámetro interno), el disolvente es drenado y, de manera consecutiva, se lava con 40mL de
metanol al 30% y 40mL de metanol al 50%.
Finalmente se eluye los analitos con 75mL de acetonitrilo.
La fracción de acetonitrilo es concentrada evaporando el disolvente mediante una ligera corriente de
nitrógeno a un volumen aparente de 10 mL.
3.1.3.3.7.4 Procedimiento de Purificación de las muestras
Se empacan 5 g de oxido de aluminio en una columna de vidrio (1cm de diámetro interno), los cuales
son lavados con 10mL de hexano.
Se transfiere cuantitativamente a la columna los 10 mL del extracto cuando esta contiene una mínima
porción de hexano.
Los compuestos organoclorados así como los PCBs son eluídos con 10mL de hexano, mientras que el
β-hexaclorociclohexano (β-HCH) y el dieldrin se eluyen con una fracción adicional de hexano
(20mL).
3.1.4 MÉTODO DE IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN
INSTRUMENTAL
3.1.4.1 Aplicación y Alcances
3.1.4.1.1 Matrices – Este método es aplicable para el análisis de plaguicidas
organoclorados en los extractos purificados de aguas naturales, residuales
municipales e industriales, así como suelo, residuos, sedimentos,
organismos, tejidos y alimentos, los extractos y su purificación depende de
la matriz analizada. Se deben seguir los procedimientos de extracción y
purificación adecuados para cada matriz.
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3.1.4.1.2 Limitaciones – Los límites de detección en las muestras reales dependerán de las
interferencias presentes en las mismas, por lo que es muy importante tener en
cuenta que pueden variar hasta en magnitudes de 10 a 1,000 veces (factores de
concentración de las muestras e interferencias presentes en el extracto purificado).
3.1.4.2 Resumen
Este método está restringido para utilizarse sólo bajo la supervisión de analistas
expertos en el uso de cromatografía de gases y en la interpretación de sus
resultados. Cada analista debe demostrar la habilidad para generar resultados
aceptables con este método.
El extracto purificado y concentrado se analiza en un Sistema de Cromatografía de Gases con 2
columnas (analítica y confirmativa) mediante un divisor de flujo colocado a la salida del
inyector, la muestra dividida se analiza con 2 detectores de captura de electrones
simultáneamente, en caso de que se detecte algún plaguicida mediante los tiempos de retención
(Tr) coincidentes en las 2 columnas y la equivalencia de áreas de los 2 picos, se cuantifica con
las áreas obtenidas del pico de la columna analítica, en caso de que no exista coincidencia entre
los Tr de las 2 columnas, o que sus áreas sean muy diferentes, entonces se trata de algún pico
interferente y no se reportan los resultados de la columna analítica.
3.1.4.3 Equipos y Materiales
Sólo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este método analítico.
Todo el material volumétrico utilizado en éste método debe ser clase “A” o estar verificada su
calibración.
3.1.4.3.1 Equipo
Cromatógrafo de gases – Sistema analítico completo con cromatógrafo de
gases para inyección split-spltless, inyector automático, 2 detectores de
captura de electrones (ECD) para operación simultánea, divisor de flujo 1:1
posterior al inyector, sistema de integración digital y estación de manejo de
datos (Agilent 7890 o equivalente).
Columna 1 (columna analítica) DB-35MS de 30 m x 0.25 mm de D.I. x 0.25
µm de espesor de fase o equivalente.
Columna 2 (columna confirmativa) DB-XLB DE 30 m X 0.25 mm D.I. x 0.25
µm de espesor de fase o equivalente.
3.1.4.3.2 Material
Matraces volumétricos clase A de 1, 5 y 10 mL para preparación de
estándares y curvas de calibración.
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Microjeringas de 10, 25, 50, 100 y 500 µL.
3.1.4.4 Reactivos y Materiales de Referencia
Los reactivos que requiere el método deben ser grado reactivo o plaguicida y deben cumplir
con las especificaciones del Committee on Analytical Reagents of the American Chemical
Society ACS a menos que otra cosa se indique.
3.1.4.4.1 Reactivos
Todos los disolventes utilizados deben ser grado optima, plaguicida, nanogrado o
equivalente y debe probarse que estén libres de ésteres del ácido ftálico.
3.1.4.4.1.1 Hexano, C6H14 grado optima, plaguicida o equivalente
3.1.4.4.1.2 Cloruro de Metileno CH2Cl2 grado óptima, plaguicida o equivalente
3.1.4.4.2 Materiales de referencia
Los patrones pueden ser estándares puros o adquirirse como disoluciones certificadas
(patrones de referencia).
3.1.4.4.2.1 Disoluciones
Disoluciones patrón.- (10 mg/L) de los plaguicidas, se deben incluir el
decaclorobifenilo y el tetracloro-m-xileno como surrogados.
Disolución Patrón de 0.05 mg/L.- A partir de la disolución de 10 mg/L, tome
25 µL con una microjeringa en un matraz aforado de 5 mL y afore a la marca
con hexano y agite para homogenizar. Guarde la disolución en viales de 2
mL.
.
Disolución de verificación de degradación de analitos (DVDA).- Prepare la
DVDA en el solvente apropiado a los niveles de concentración listados a
continuación. La disolución DVDA debe prepararse cada 6 meses o antes
si ésta presenta degradación o concentración.
Compuesto Concentración (mg/L)
Endrin 0.1
4,4’-DDT 0.1
Disoluciones de calibración.- Prepare 5 niveles como mínimo de diferente
concentración de las disoluciones estándar para cada analito de interés en
matraces volumétricos.
Para cada disolución estándar de calibración, adicione una cantidad conocida
de los compuestos a analizar y lleve al aforo con el solvente apropiado. El
punto de concentración más bajo de la curva de calibración debe ser 3 a 10
veces mayor que el valor del LDM. Las otras concentraciones corresponden
al intervalo esperado de las concentraciones encontradas en las muestras
reales o bien estarán definidas por el intervalo lineal del detector.
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Estándar de calibración de 0.001 mg/L.-
En un matraz aforado de 1 mL ponga 20 µL de la solución de 0.05 mg/L y
afore a la marca con Hexano. Guarde esta disolución en viales de 2 mL y
rotule con etiqueta que contenga método, fecha de preparación,
concentración, solvente utilizado, persona que lo preparó
Estándar de calibración de 0.002mg/L
En un matraz de 1 mL ponga 40 µL de la solución de 0.05 mg/L y afore a la
marca con Hexano. Guarde esta disolución en viales de 2 mL y etiquete.
Estándar de calibración de 0.005 mg/L.
En un matraz de 1 mL ponga 100 µL de la solución de 0.05 mg/L y afore a la
marca con hexano, guarde esta disolución en viales de 2 mL y etiquete.
Estándar de calibración de 0.01 mg/L.
En un matraz aforado 1 mL ponga 200 µL de la solución de 0.05 mg/L y afore
a la marca con hexano y guarde esta disolución en viales de 2 mL y etiquete.
Estándar de calibración de 0.02 mg/L.
En un matraz aforado de 1 mL ponga 400 µL de la solución de 0.05 mg/L y
afore a la marca con hexano, guarde la disolución en viales de 2mL y
etiquete.
Estándar de calibración de 0.05mg/L
A partir de la disolución de 10 mg/L, tome 25 µL con una microjeringa en un
matraz aforado de 5 mL y afore a la marca con hexano y agite para
homogenizar. Guarde la disolución en viales de 2 mL y etiquete.
3.1.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptación y rechazo
Cada laboratorio que utilice este método está obligado a operar un programa de
control de calidad (CC) formal. Los requerimientos mínimos de este programa
consisten en una demostración inicial de la capacidad del laboratorio para cumplir con
las especificaciones de desempeño del método, además realizar análisis continuos
de muestras de control de calidad (MCC) para demostrar la precisión y exactitud
continuas y el análisis de blancos. El desempeño del laboratorio debe compararse
con los criterios aquí establecidos, con objeto de determinar si los resultados de los
análisis cumplen con las especificaciones de desempeño del método. El analista
debe hacer una demostración inicial de su habilidad para generar una exactitud y
precisión aceptables por este método.
Cada vez que se realice una modificación al método o que se cambie el analista
responsable de llevar a cabo está determinación, el analista designado debe repetir la
validación del método, si el cambio va a afectar el límite de detección del método
(LDM), el laboratorio debe demostrar que el nuevo LDM determinado es igual o más
bajo que el anterior para los analitos de interés.
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No se permite el uso de técnicas determinativas alternativas y cambios que degraden
la ejecución del método. Si se utiliza una técnica analítica que no sea la especificada
en este método, dicha técnica debe tener especificaciones iguales o mejores que las
de la técnica descrita en este documento para los analitos de interés.
Es obligatorio para el laboratorio mantener los registros de las modificaciones hechas
a este método. Estos registros deben de incluir lo siguiente:
La justificación por escrito de la necesidad de realizar modificaciones al
método para ese analito.
Los nombres, títulos, direcciones y número de teléfono de los analistas que
ejecutaron los análisis y modificaciones y el encargado de control de
calidad que presenció y verificó los análisis y sus modificaciones.
Los resultados de todas las pruebas de CC del método modificado
comparadas con el método original, dichos datos deben de incluir todos los
parámetros mencionados en la sección de desempeño del método.
La información escrita en las bitácoras tanto del equipo como del analista,
deben incluir los siguientes datos:
a) Identificación de la muestra
b) Número del lote analítico en el cual se analizó la muestra
c) Fecha del análisis
d) Procedimiento cronológico utilizado
e) Cantidad de muestra utilizada
f) Número de muestras de control de calidad analizadas en el lote
g) Trazabilidad de las calibraciones de los instrumentos de medición
h) Registros de bitácoras, en cintas de respaldo o en otros respaldos de
información
i) Información cruda reportada por los equipos o por los analistas
j) Evidencia de la aceptación o rechazo de los resultados del lote analítico.
3.1.4.5.1 Verificación del equipo
El criterio de resolución es tal que la profundidad del valle entre dos picos
adyacentes en la mezcla de verificación de resolución debe ser mayor o igual
a 60.0% de la altura del pico más corto.
La verificación del detector de ECD se realiza según el instructivo del
fabricante.
Verificar que el flujo de los gases y condiciones cromatográficas sean las
adecuadas, según se menciona posteriormente.
Verificación de blanco electrónico: Se realiza una corrida con las condiciones
cromatográficas del método, pero sin inyectar nada. Si el cromatograma
presenta picos a cualquier tiempo de retención, se purga el sistema poniendo
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el horno a 300°C durante 15 minutos y se repite el análisis del blanco
electrónico.
La degradación tanto del DDT como del Endrín en la DVDA debe ser menor al
15% lo cual se calcula como a continuación se indica:
Ecuación 1:
Donde:
A = Área del DDE
B = Área del DDD
C = Área del DDT
Ecuación 2:
Donde:
A = Área del Endrin aldehído
B = Área del Endrin cetona
C = Área del Endrin
A B
% Degradación DDT x100 A B C
A B
% Degradación Endrin x100 A B C
Si la degradación del DDT o del endrin es mayor al 15%, se debe proceder a
cambiar el inserto de vidrio, limpieza del puerto de inyección, cambio del sello
de oro y de la precolumna que se conecta con el inyector y a las dos columnas
(30 cm).
3.1.4.5.2.Verificación de la calibración inicial.
La curva de la calibración inicial deberá realizarse inyectando los estándares
de calibración preparados y se considera lineal, si el por ciento de la
desviación estándar relativa (%RSD) de los factores de calibración (CF) es
menor o igual al 20%, los cálculos se realizan con las siguientes ecuaciones:
total de área
CF
masa inyectada en nanogramos
SDCF
% RSD x100 CF
Donde:
SDCF = Desviación estándar de los factores de calibración
CF = Promedio de los factores de calibración
La verificación de la calibración inicial puede también efectuarse mediante la
regresión por mínimos cuadrados, en la cual el criterio de aceptación es que el
factor de correlación "r 2 " sea mayor o igual a 0.997.
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Si los criterios para el % RSD o “r” no se cumplen se procede a la revisión del
sistema cromatográfico y la preparación de las disoluciones de calibración.
Posteriormente la curva de calibración será vigente, si el análisis de un punto
intermedio de la curva no presenta una variación de la concentración mayor al
15% y que será calculada de la siguiente manera.
CC CT
Diferencia de concentración
CT
Donde:
CC = concentración calculada
CT = concentración teórica
O si se utiliza el factor de calibración
Donde:
% D
x100
CFv CF
Diferencia porcentual
CF
%
x100
CFv = factor de calibración de cada compuesto en el estándar de
verificación.
CF = media del factor de calibración del compuesto de la calibración inicial.
Si el criterio de aceptación para la diferencia porcentual es mayor al 15% se
procederá a la revisión del sistema cromatográfico y a la preparación de la
solución estándar utilizada.
3.1.4.5.3 Verificación de contaminación de los reactivos.
Los blancos de reactivos no deben presentar ningún tipo de contaminante al
tiempo de retención de los plaguicidas medidos, por lo que es importante que
los reactivos utilizados cumplan con las especificaciones mencionadas.
Si los resultados de los blancos no cumplen con el criterio mencionado, se debe
localizar la fuente de contaminación, extraer y analizar nuevamente las muestras
asociadas al blanco contaminado.
Use también los blancos de reactivos para verificar la contaminación por arrastre de
muestras con altas concentraciones en análisis secuenciales
3.1.4.5.4 Verificación del lote analítico
Por cada lote analítico de muestras analice al menos una muestra sintética de
control de calidad o preferentemente un material de referencia certificado de la
misma matriz de las muestras analizadas en el lote analítico, calcule el % de
recuperación (%R) de cada analito y surrogados de la muestra control, los
cuales deberán estar dentro del rango de 80 a 120 %R. De no ser así se debe
revisar la preparación de la muestra control y el sistema cromatográfico.
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Realizar la corrección necesaria y reanalizar la muestra control, si el problema
persiste, se deben reanalizar todas las muestras del lote analítico.
3.1.4.5.5 Verificación de interferencias de matriz
La verificación de interferencias por parte de la muestra se lleva a cabo
mediante las muestras fortificadas (MF). El laboratorio debe realizar el análisis
de muestras fortificadas (MF) y muestras duplicadas (MD), fortifique una
muestra por cada lote analítico o preferentemente una muestra de cada tipo
de matriz analizada en el lote. Las muestras fortificadas se deben analizar
cuando por las características de la muestra se sospeche de interferencias de
matriz o cuando sean parte de un plan de aseguramiento de calidad de un
proyecto.
El efecto de la matriz se evalúa en el recobro del analito en muestras
fortificadas.. Calcule el porcentaje de recobro el cual deberá estar dentro del
intervalo de 80 a 120 %R.
Si los valores no cumplen con lo especificado, el sistema analítico está fuera
de control, determine las causas y corrija el problema, documente las
incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del resultado
analítico.
Efecto de la matriz en la precisión del analito – Precisión de la matriz
duplicada (MD): Analice una muestra duplicada por cada lote de muestra.
Calcule la diferencia porcentual relativa (DPR) entre la muestra y la duplicada
para cada analito con la siguiente ecuación:
Donde:
DPR
C1 C2200
C1
C2
C1 = concentración de la primera muestra
C2 = concentración de la segunda muestra (muestra duplicada)
La DPR de cada analito obtenido entre la muestra y la duplicada debe ser

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En cada lote analizado, si más de 20 muestras van a ser analizadas durante el
día, verifique la curva de calibración analizando un estándar de concentración
media del intervalo de trabajo al principio del lote y después de cada 20
muestras ó 12 horas de análisis continuo.
Calcule el factor de calibración o la concentración para cada plaguicida del
estándar de concentración media, y el por ciento de la diferencia (%D) con la
siguiente ecuación:
Donde:
FC1
FC2
Diferencia porcentual
x100
FC
1
FC1 = Factor de calibración promedio para cada plaguicida en la curva de
calibración, o la concentración nominal de del estándar de verificación.
FC2 = Factor de calibración promedio para cada plaguicida en el estándar de
concentración media, o la concentración calculada en el estándar de
verificación.
El valor obtenido del % de la diferencia (%D) deberá ser menor al 15%, de no
ser así verifique su vigencia, revisé también el sistema cromatográfico y
determine la causa de la falla y corrija, de no lograr corregir la falla, recalibre
nuevamente el sistema y en le caso de que la falla del estándar de verificación
sea en un lote mayor de 20 muestras reanalice las 10 muestras anteriores al
estándar de verificación que falló.
3.1.4.5.7 Verificación de estándares surrogados
Evalúe los datos de recobro de los surrogados de las muestras.
Calcule el % de recuperación de los estándares surrugados en blancos,
muestras control, muestras adicionadas (si se realizaron), muestras
duplicadas (si se realizaron) y muestras reales, con la siguiente ecuación:
C
Re cuperaciòn % R
C
1
2
100
Donde:
C1=Concentración calculada de surrugados en la muestra.
C2=Concentración nominal del surrugado adicionado a la muestra.
El %R debe estar entre el 70 y el 130 % de recuperación de no ser así
verifique la preparación de la muestra que fallo y el sistema cromatográfico,
determine la causa de la falla y corrija, de no encontrarla, repita la
extracción de la muestra y vuelva a analizar si el %R esta fuera del rango
de aceptación llene hoja de incidencia y reporte como interferencia de
matriz y los resultados obtenidos.
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Si los valores no cumplen con los especificados, determine las causas y
corrija el problema, documente las incidencias y acciones correctivas e
inclúyalas en el expediente del resultado analítico.
3.1.4.5.8 Verificación de estándares internos
Compare el área de el o los estándares internos de las muestras con el
área promedio de los estándares internos obtenidos de los puntos de
calibración, el valor obtenido en el o los estándares internos de la muestra
no deben ser menores a 50% ni mayores a 200% del valor promedio
obtenido en la curva de calibración para cada estándar interno.
Si los valores no cumplen con los especificados, el sistema analítico está
fuera de control, determine las causas y corrija el problema, documente las
incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del
resultado analítico.
3.1.4.5.9 Control de calidad estadístico
En esta sección se especifica como debe realizarse el control de calidad
estadístico obligatorio para este método:
3.1.4.5.9.1 Preparación de la Muestra de Control de Calidad (MCC) –
Prepare la MCC de la siguiente forma:
Se deberán preparar las MCC de una fuente externa al laboratorio o ser
preparada de una fuente diferente a la utilizada en la curva de calibración.
Prepare una disolución a una concentración que se encuentre dentro del
rango de trabajo.
NOTA: Se recomienda que el valor de las soluciones de MCC no sea
conocido por el analista con el objeto de asegurar la veracidad de la
medición
3.1.4.5.9.2 Graficas de control de Exactitud
El laboratorio debe elaborar y mantener actualizadas las gráficas de
control de exactitud para cada lote analizado a partir de la demostración
inicial de desempeño.
Cada valor de exactitud obtenido de las MCC de cada lote analizado deberá
graficarse y deberá estar dentro de los límites de control superior e inferior ( 3s)
Si un valor de exactitud es mayor a 3s, deberán rechazarse todos los resultados
del lote analítico, determine las causas y corrija los errores, documente
adecuadamente las incidencias y acciones correctivas, deberá repetirse el análisis
del lote en cuestión.
3.1.4.5.9.3 Graficas de control de Precisión
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El laboratorio debe elaborar y mantener actualizadas las gráficas de
control de precisión para cada lote analizado a partir de la demostración
inicial de desempeño
Determine los límites de control de la siguiente forma:
Donde:
Límite Superior de Control (LSC) = 3.27R
Límite Superior de Advertencia (LSA) = 2.51R
R = Promedio del DPR
Si un valor de precisión es mayor al LSC, deberán rechazarse todos los
resultados del lote analítico, determine las causas del problema y corrija
los errores, documente adecuadamente las incidencias y acciones
correctivas, deberá repetirse el análisis del lote en cuestión.
3.1.4.5.10 Validación de modificaciones del método o de métodos
alternos
Para validar las modificaciones que se efectúen a este método o para la
utilización de métodos alternos deberá seguirse el siguiente procedimiento:
Si se realizan modificaciones al presente método, deberán validarse.
Si se utiliza un método alterno cuya fuente sea un método estandarizado por
alguna Institución de carácter internacional o reconocida internacionalmente
(e. g. ASTM, USEPA, AOAC, Standard Methods, DIN, OMS Environment
Canada, etc.) también deberá ser validado.
Si se utiliza algún método no estandarizado, deberá evidenciarse, además
de los parámetros normales de la validación parcial, los parámetros de
Robustez, Reproducibilidad y Especificidad los cuales solo pueden evaluarse
mediante estudios interlaboratorio.
Verifique diariamente el desempeño de todo el sistema analítico utilizando
los datos recolectados de análisis de blancos reactivos, solución verificadora
del desempeño del laboratorio.
Si hay un coleado excesivo de algún analito a comparación de los
cromatogramas del método, éste deberá corregirse. Los problemas de
coleado generalmente pueden rastrearse a sitios activos en la columna
cromatográfica, problemas en la instalación de la columna o mala operación
del detector.
Verifique la precisión con réplicas del análisis. Una pobre precisión
generalmente puede deberse a fugas, especialmente en el puerto de
inyección. Si el sistema cromatográfico se está comportando aparentemente
bien, pero con baja sensibilidad, puede ser necesario generar una nueva
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curva o juego de factores de calibración para verificar las respuestas bajas
antes de buscar la fuente del problema.
3.1.4.5.11 Composición del lote analítico (para cada 25 muestras ó 12 horas de análisis
continuo)
1 Blanco electrónico
2 Muestra de verificación del Instrumento (DVDA)
3 Muestra de Verificación de la Calibración Continua
4 Blanco de Reactivos
5 Muestra de Control de Calidad 1 (MCC)
6 Muestra real No. 1
7 Muestra real No. 2
8 Muestras reales (hasta 20 o 12 horas de análisis continuo)
9 Muestra fortificada (si se realizo)
10 Muestra fortificada duplicada (si se realizo)
11 Blanco de Reactivos
12 Muestra de Verificación de la Calibración Continua.
13 Siguientes 20 muestras reales
3.1.4.5.12 Criterios de Aceptación y Rechazo
3.1.4.5.12.1 Verificación del Equipo
Punto de verificación Criterio
Equipo libre de interferencias (blanco
electrónico)
Puerto de inyección libre de suciedad y baja
degradación
3.1.4.5.12.2 Verificación de la Calibración Inicial
No deberá presenta picos a cualquier
tiempo de retención
Degradación del DDT y Endrin
menor al 15%
Punto de verificación Criterio
Evaluación del % Diferencia de la concentración
de la Mezcla de Verificación, punto intermedio de
la curva de calibración.
Menor al 15%
3.1.4.5.12.3 Verificación de Contaminación de Reactivos
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Punto de verificación Criterio
Blanco de reactivos
3.1.4.5.12.4 Verificación del Proceso Analítico
No deben presentar ningún tipo de
contaminante al tiempo de retención
de los plaguicidas medidos
Punto de verificación Criterio
Muestra de control de calidad % de Recuperación de 70 / 130
Evaluación de estándares Surrogados % de Recuperación de 70 / 130
Evaluación de muestras adicionadas duplicadas % DSR < 20%
3.1.4.5.12.5 Verificación de Interferencias de Matriz
Punto de verificación Criterio
Evaluación de muestras adicionadas % de Recuperación 70 / 130
3.1.4.5.12.6 Estabilidad de la Curva de Calibración
Punto de verificación Criterio
Evaluación de la Estándar de Verificación
(Intermedio)
3.1.4.6 Calibración
% de diferencia

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estándar de calibración por triplicado y al final realice un promedio de las tres curvas y
agréguelo a la tabla de calibración del método.
Si la DSR de cada plaguicida es 20%, entonces la respuesta del instrumento es
considerada lineal y el factor de calibración promedio FC puede utilizarse para la
cuantificación de los resultados de las muestras. Si la DSR es mayor que 20%, entonces
no puede asumirse linealidad y se debe repetir la curva de calibración.
Si se utiliza regresión lineal por mínimos cuadrados, deberá obtener el factor de
correlación “r 2 ” para cada analito, el cual deberá ser mayor o igual a 0.997 si “r” es menor
a este valor, la curva de calibración no es lineal y deberá verificarse la preparación de los
estándares de calibración y el sistema cromatográfico y repetir la calibración.
3.1.4.6.1 Calibración por Estándar Interno:
El analista debe seleccionar uno o más estándares internos que sean similares en
comportamiento analítico a los compuestos de interés. El analista debe además demostrar que
la medición del estándar interno no es afectada por el método o interferencias de la matriz.
Prepare los estándares de calibración a un mínimo de cinco concentraciones para cada analito
de interés por adición de volúmenes. Para cada estándar de calibración, adicione una cantidad
conocida constante de uno o más estándares internos y afore con un solvente apropiado. Uno
de los estándares debe estar a una concentración cercana, pero por arriba, del LPC. Las otras
concentraciones deben corresponder al rango de trabajo.
Inyecte cada estándar de calibración. Tabule la altura del pico o el área de respuesta contra la
concentración de cada compuesto y el estándar interno. Calcule el factor de respuesta (RF)
para cada compuesto como sigue:
Donde:
RF
AsCis
AisCs
As = Respuesta para el analito que será medido.
Ais = Respuesta del estándar interno.
Cis = Concentración del estándar interno, µg/L.
Cs = Concentración del analito a ser medido, µg/L.
Si el valor RF sobre el rango de trabajo es constante (< 20% RSD), el RF puede usarse para
cálculos. Alternativamente, los resultados pueden usarse para graficar una curva de
calibración de la relación de respuesta, As/Ais contra RF.
3.1.4.7 Procedimiento Analítico
3.1.4.7.1 Análisis de los extractos de las muestras
Condiciones cromatográficas:
Análisis por doble columna DB-35MS y DB-XLB
Gas acarreador Hidrógeno
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Presión en columna 15 psi
Temperatura inicial 140 °C
Tiempo inicial 2 min
Programa 1 10ºC/min
Temperatura final 1 240ºC
Programa 2 25ºC/min
Temperatura final 2 300ºC
Tiempo final 2 5 min
Temperatura del inyector 250ºC
Temperatura del detector 320ºC
Modo splitless 0.3 min
Flujo de split 20mL/min
Purga de septa 4mL/min
Inyecte un volumen de 2 L del extracto de la muestra o estándar en el
cromatógrafo de gases. Registre el volumen final del extracto y el área del
pico resultante.
3.1.4.7.2 Identificación de los analitos
Identifique los plaguicidas en la muestra comparando los tiempos de retención
de los picos en el cromatograma de muestra con los tiempos de retención de
los picos en los cromatogramas de los estándares tanto en la columna analítica
como en la columna confirmativa, este paso se debe hacer automáticamente
por el Sistema de Manejo de Datos de la Estación de Trabajo del Sistema
Cromatográfico, se deben seguir las instrucciones del fabricante del equipo.
En caso de que coincidan los Tr del pico sospechoso en las 2 columnas dentro
de una ventana de tiempo de 5 seg y que las áreas de los picos en las 2
columnas no difiere más del 50%, se puede asumir que el pico del plaguicida
está presente en las muestras, en caso contrario, no se trata del plaguicida
sospechoso.
Si la respuesta del pico sobrepasa el intervalo de concentración de la curva
patrón, diluya el extracto y analice nuevamente.
3.1.4.7.3 Cálculos
3.1.4.7.3.1 AIRE AMBIENTE
El volumen total de la muestra se calcula de las lecturas de flujo periódico
(Magnehelic) con la siguiente ecuación:
Donde:
V
Q Q ... Q
1 2
n
m
n 1000
T
50

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V (m) = volumen total de la muestra (m 3 ).
Q1, Q2,., Qn = flujos determinados al inicio, final y puntos intermedios durante el
tiempo muestreado (L/minuto).
n = número de datos promediados.
T= tiempo de muestreado (minutos).
El volumen de muestreado debe convertirse a condiciones estándar (760 mm Hg y
25ºC) con la siguiente ecuación.
Donde:
V
s V m A P
298
760
273
t
a
V(s)= volumen total de la muestra a 25ºC y 760 mm Hg (m 3 ).
V(m)= volumen total de flujo a condiciones ambientales (m 3 ).
P(A)= presión ambiental (mm Hg).
t(a)= temperatura ambiental (ºC).
La concentración del compuesto en la muestra se calcula con la siguiente ecuación:
Donde:
C
A A
V
* V E i* V s C(A)= concentración del analito en la muestra (µg/m 3 ).
A = cantidad calculada de material inyectado al cromatógrafo, basada en la curva de
calibración para estándares inyectados (nanogramos).
V(i) = volumen inyectado del extracto (µL).
V(E)= volumen final del extracto (mL).
V(s)= volumen total de la muestra de aire corregido a condiciones estándar (m 3 ).
Determine la concentración de compuestos individuales en la muestra.
Toxafeno – Los cálculos cuantitativos de toxafeno son difíciles, pero una
exactitud razonable puede obtenerse. Para calcular la cantidad de toxafeno en
GC/ECD lleve a cabo los siguientes pasos: (a) ajuste el tamaño de la muestra
tal que el pico mayor del toxafeno sea del 10 – 70% en la escala completa de
desviación (FSD); (b) inyecte un estándar de toxafeno que se estime esta
dentro de +10 ng de la muestra; (c) usando la cuantificación de los 5 picos
mayores o el área total del patrón de toxafenos.
Para medir el área total, construya la línea de base del estándar de toxafeno
entre sus extremos y construya la línea de base bajo la muestra, usando la
distancia de los picos a la línea de base en el estándar como una guía. Este
procedimiento se hace difícil por el hecho de la altura y amplitud relativa de los
picos en la muestra probablemente no será idéntica a los estándares.
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Una serie de residuos de toxafenos han sido calculados usando el área total de
los picos por comparación con el estándar y también usando sólo el área de
los últimos cuatro picos, tanto en las muestras como con los estándares. La
concordancia entre los resultados obtenidos por los dos métodos justifica el
uso del último método para calcular el toxafeno en una muestra donde la
porción que elude tempranamente del cromatograma de toxafeno muestra
interferencias de otras sustancias tales como DDT.
El clordano técnicamente es una mezcla de al menos 11 componentes
mayores y 30 ó más componentes menores. Trans y cis-clordano (alfa y
gama), respectivamente, son los dos mayores componentes técnicamente del
clordano. Sin embargo, el porcentaje exacto de cada uno en el material técnico
no está completamente definido y no es consistente de lote a lote.
El patrón de GC de un residuo de clordano puede diferir considerablemente de
aquel de la técnica estándar. Dependiendo del sustrato de la muestra y su
historia, los residuos de clordano pueden consistir de casi cualquier
combinación de: metabolitos animales y productos de degradación causados
por la exposición a factores ambientales tales como agua y luz solar.
Cuando los residuos de clordano no se parecen técnicamente al clordano, pero
en su lugar se identifica picos consiste principalmente, cuantifique los picos
alfa-clordano, gama-clordano y heptacloro separadamente contra los
materiales de referencia apropiados y reporte los residuos individuales.
Cuando los patrones de GC de los residuos se asemejan a aquellos del
clordano técnico, el analista puede cuantificar residuos de clordano
comparando el área total del cromatograma del clordano usando los cinco
picos mayores o el área total. Si el pico del heptacloro epóxido es
relativamente pequeño, incluya esto como parte del área del clordano total por
el cálculo de los residuos. Si el heptacloro y/o el heptacloro epóxido están muy
fuera de proporción, calcule estos por separado y sustraiga sus áreas del área
total para dar un área de clordano corregida.
NOTA: El octacloro epóxido, un metabolito del clordano, puede ser fácilmente
confundido con el heptacloro epóxido en una columna GC no polar.
Para medir el área total del cromatograma de clordano, proceda como se
indica en la sección de toxafeno. Inyecte una cantidad del estándar de
clordano el cual producirá un cromatograma en el cual los picos mayores son
aproximadamente del mismo tamaño como aquellos en el cromatograma de la
muestra.
Informe los resultados en µg/m 3 a condiciones STD.
Todos los datos de control de calidad obtenido deberán ser informados junto con los
resultados de la muestra.
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1.1.1.
3.1.4.7.3.2 AGUA
Identifique a los plaguicidas según el procedimiento mencionado anteriormente en la
parte cualitativa del método. Identifique los compuestos en la muestra
multicomponente usando todos los picos que sean característicos para los compuestos
específicos de cromatogramas para estándares individuales. Elija los picos más
sensibles y reproducibles para obtener una suma para fines de cálculo.
Utilice la curva de calibración (factor de calibración) para calcular directamente la
concentración no corregida (Ci) de cada analito en la muestra (por ejemplo factor de
calibración X respuesta).
Calcule la concentración como:
Volumen
final extracto
Concentracióng / L
C
i
Volumen de muestra
Ci = concentración obtenida del cromatograma
Hay software en los cuales es posible introducir el factor de corrección para obtener
el resultado expresado en muestra.
Toxafeno – Los cálculos cuantitativos de toxafeno son difíciles, pero una
exactitud razonable puede obtenerse. Para calcular la cantidad de toxafeno en
GC/ECD lleve a cabo los siguientes pasos: (a) ajuste el tamaño de la muestra
tal que el pico mayor del toxafeno sea del 10 – 70% en la escala completa de
desviación (FSD); (b) inyecte un estándar de toxafeno que se estime esta
dentro de +10 ng de la muestra; (c) usando la cuantificación de los 5 picos
mayores o el área total del patrón de toxafenos.
Para medir el área total, construya la línea de base del estándar de toxafeno
entre sus extremos y construya la línea de base bajo la muestra, usando la
distancia de los picos a la línea de base en el estándar como una guía. Este
procedimiento se hace difícil por el hecho de la altura y amplitud relativa de los
picos en la muestra probablemente no será idéntica a los estándares.
Una serie de residuos de toxafenos han sido calculados usando el área total de
los picos por comparación con el estándar y también usando sólo el área de
los últimos cuatro picos, tanto en las muestras como con los estándares. La
concordancia entre los resultados obtenidos por los dos métodos justifica el
uso del último método para calcular el toxafeno en una muestra donde la
porción que elude tempranamente del cromatograma de toxafeno muestra
interferencias de otras sustancias tales como DDT.
El clordano técnicamente es una mezcla de al menos 11 componentes
mayores y 30 ó más componentes menores. Trans y cis-clordano (alfa y
gama), respectivamente, son los dos mayores componentes técnicamente del
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clordano. Sin embargo, el porcentaje exacto de cada uno en el material técnico
no está completamente definido y no es consistente de lote a lote.
El patrón de GC de un residuo de clordano puede diferir considerablemente de
aquel de la técnica estándar. Dependiendo del sustrato de la muestra y su
historia, los residuos de clordano pueden consistir de casi cualquier
combinación de: metabolitos animales y productos de degradación causados
por la exposición a factores ambientales tales como agua y luz solar.
Cuando los residuos de clordano no se parecen técnicamente al clordano, pero
en su lugar se identifica picos consiste principalmente, cuantifique los picos
alfa-clordano, gama-clordano y heptacloro separadamente contra los
materiales de referencia apropiados y reporte los residuos individuales.
Cuando los patrones de GC de los residuos se asemejan a aquellos del
clordano técnico, el analista puede cuantificar residuos de clordano
comparando el área total del cromatograma del clordano usando los cinco
picos mayores o el área total. Si el pico del heptacloro epóxido es
relativamente pequeño, incluya esto como parte del área del clordano total por
el cálculo de los residuos. Si el heptacloro y/o el heptacloro epóxido están muy
fuera de proporción, calcule estos por separado y sustraiga sus áreas del área
total para dar un área de clordano corregida.
NOTA: El octacloro epóxido, un metabolito del clordano, puede ser fácilmente
confundido con el heptacloro epóxido en una columna GC no polar.
Para medir el área total del cromatograma de clordano, proceda como se
indica en la sección de toxafeno. Inyecte una cantidad del estándar de
clordano el cual producirá un cromatograma en el cual los picos mayores son
aproximadamente del mismo tamaño como aquellos en el cromatograma de la
muestra.
No reporte concentraciones por debajo del límite de detección.
Reporte todos los valores obtenidos de CC junto con los resultados del
análisis.
Los resultados deben reportarse con un número apropiado de cifras significativas. La
experiencia indica que tres cifras significativas pueden ser usadas para
concentraciones por arriba de 99 µg/L, dos cifras significativas para concentraciones
entre 1-99 µg/L y una cifra significativa para concentraciones menores a 1 µg/L.
3.1.4.7.3.3 SUELOS Y SEDIMENTOS
Lleve a cabo los cálculos como se indica a continuación:
La concentración se obtiene:
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Volumen
final extracto
Concentracióng / Kg
C
i
Peso de muestra
Ci = concentración obtenida del cromatograma en μg/L
Todos los factores de dilución o concentración deben ser considerados.
No reporte concentraciones por debajo del límite de detección.
Reporte todos los valores obtenidos de CC junto con los resultados del
análisis.
Reporte los resultados del análisis en µg/Kg con tres cifras significativas y
aclarando si son en Base Seca o Base Húmeda.
3.1.4.7.3.4 ALIMENTOS PROCESADOS, SIN PROCESAR TEJIDOS,
ORGANISMOS.
3.1.4.7.3.4.1 Cálculos para frutas y vegetales
F P
g S * *
T 100
Donde:
g = gramos de muestra pasados por columna de florisil
S = muestra extraída (g)
P = el volumen del extracto de éter de petroleo en mL
F = volumen filtrado del extracto de acetonitrilo
100 = mL de éter de petróleo en los cuales los residuos fueron particionados.
T = volumen total (mL agua en muestra (buscar en tablas el % humedad del
alimento) + mL acetonitrilo añadido - la corrección en mL de la contracción
del volumen)
Cuando se adicionan 50 mL de agua al acetonitrilo para la extracción de
productos con alto contenido de azúcar (3.1.3.3.5.3.1) el volumen total (T)
se incrementa en 45.
Para 25 g de huevo y 200 mL de acetonitrilo el valor del volumen total (T) es
215.
La concentración final se obtiene:
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Volumen final extracto
Concentracióng / Kg
C
i
Peso de muestra pasado x columna florisil
Peso de la mtra pasada xcolumna
Ci = concentración obtenida del cromatograma en μg/L
3.1.4.7.3.4.2 Cálculos para productos con baja humedad o secos
Calcule igual que para las frutas y vegetales, excepto T = volumen total (mL de
agua en la muestra + mL de 35% H20-CH3CN adicionado – corrección en mL
del volumen de contracción). Si el contenido de agua de la muestra es < 10%,
haga caso omiso y use el volumen de la mezcla de extracción como T.
3.1.4.7.3.4.3 Hígado y tejido graso
La concentración final se obtiene:
Volumen final extracto
Concentracióng / Kg
C
i
Peso de muestra pasado x columna florisil
Ci = concentración obtenida del cromatograma en μg
Peso de grasa para purificación
florisil
Peso
de la mtra original
Peso de la grasa extraída
Todos los factores de dilución o concentración deben ser considerados.
Toxafeno – Los cálculos cuantitativos de toxafeno son difíciles, pero una
exactitud razonable puede obtenerse. Para calcular la cantidad de toxafeno en
GC/ECD lleve a cabo los siguientes pasos: (a) ajuste el tamaño de la muestra
tal que el pico mayor del toxafeno sea del 10 – 70% en la escala completa de
desviación (FSD); (b) inyecte un estándar de toxafeno que se estime esta
dentro de +10 ng de la muestra; (c) usando la cuantificación de los 5 picos
mayores o el área total del patrón de toxafenos.
Para medir el área total, construya la línea de base del estándar de toxafeno
entre sus extremos y construya la línea de base bajo la muestra, usando la
distancia de los picos a la línea de base en el estándar como una guía. Este
procedimiento se hace difícil por el hecho de la altura y amplitud relativa de los
picos en la muestra probablemente no será idéntica a los estándares.
Una serie de residuos de toxafenos han sido calculados usando el área total de
los picos por comparación con el estándar y también usando sólo el área de
los últimos cuatro picos, tanto en las muestras como con los estándares. La
concordancia entre los resultados obtenidos por los dos métodos justifica el
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uso del último método para calcular el toxafeno en una muestra donde la
porción que elude tempranamente del cromatograma de toxafeno muestra
interferencias de otras sustancias tales como DDT.
El clordano técnicamente es una mezcla de al menos 11 componentes
mayores y 30 ó más componentes menores. Trans y cis-clordano (alfa y
gama), respectivamente, son los dos mayores componentes técnicamente del
clordano. Sin embargo, el porcentaje exacto de cada uno en el material técnico
no está completamente definido y no es consistente de lote a lote.
El patrón de GC de un residuo de clordano puede diferir considerablemente de
aquel de la técnica estándar. Dependiendo del sustrato de la muestra y su
historia, los residuos de clordano pueden consistir de casi cualquier
combinación de: metabolitos animales y productos de degradación causados
por la exposición a factores ambientales tales como agua y luz solar.
Cuando los residuos de clordano no se parecen técnicamente al clordano, pero
en su lugar se identifica picos consiste principalmente, cuantifique los picos
alfa-clordano, gama-clordano y heptacloro separadamente contra los
materiales de referencia apropiados y reporte los residuos individuales.
Cuando los patrones de GC de los residuos se asemejan a aquellos del
clordano técnico, el analista puede cuantificar residuos de clordano
comparando el área total del cromatograma del clordano usando los cinco
picos mayores o el área total. Si el pico del heptacloro epóxido es
relativamente pequeño, incluya esto como parte del área del clordano total por
el cálculo de los residuos. Si el heptacloro y/o el heptacloro epóxido están muy
fuera de proporción, calcule estos por separado y sustraiga sus áreas del área
total para dar un área de clordano corregida.
NOTA: El octacloro epóxido, un metabolito del clordano, puede ser fácilmente
confundido con el heptacloro epóxido en una columna GC no polar.
Para medir el área total del cromatograma de clordano, proceda como se
indica en la sección de toxafeno. Inyecte una cantidad del estándar de
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aproximadamente del mismo tamaño como aquellos en el cromatograma de la
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No reporte concentraciones por debajo del límite de detección.
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Reporte los resultados de análisis en µg/kg con tres cifras significativas.
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1.1.2. 3.1.4.8 Desempeño del Método
3.1.4.9 Tablas y Figuras
Los datos son los del método de referencia y los de un laboratorio nacional
con experiencia.
3.1.4.8.1 Límite de Detección: Ver Tabla 5.
3.1.4.8.2 Límite Práctico de Cuantificación: Ver Tabla 5
3.1.4.8.3 Intervalo de Trabajo: Ver Tabla 5
3.1.4.8.4 Precisión del Método: Ver Tabla 5
3.1.4.8.5 Exactitud del Método: Ver Tabla 5
TABLA.1 LÍMITES DE DETECCIÓN DEL MÉTODO FUENTE EPA 8081
Límite de Detección del Límite de Detección del
Parámetro
Método µg/L
Método µg/Kg
Agua Suelo
Aldrin 0.034 2.2
Clordano 0.008 -
4,4’-DDD 0.050 4.2
4,4’-DDE 0.058 2.5
4,4’-DDT 0.081 3.6
Dieldrin 0.044 -
Endrin 0.039 3.6
Endrin aldehído 0.050 1.6
Heptacloro 0.040 2.0
Heptacloro epóxido 0.032 2.1
Toxafeno NA NA
Hexaclorobenceno NA NA
NOTA: El límite de detección del método fue determinado a partir del análisis
de 7 replicas de cada matriz procesada a través del método analítico
completo.
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TABLA 2 %R MÉTODO USEPA TO-4
Compuesto Concentración en el
aire, ng/m3
% de recuperación
Aldrin 0.3-3.0 28
4,4’-DDE 0.6-6.0 89
4,4’-DDT 1.8-18 83
Clordano
Clorobifenilos
15-150 73
4,4’ Di-
2.0-20
62
2,4,5 Tri-
0.2-2.0
36
2,4’,5 Tri-
0.2-2.0
86
2,2’,5,5’ Tetra-
0.2-2.0
94
2.2’.4.5.5’ Penta-
0.2-2.0
92
2.2’.4.4’.5.5’ Hexa-
0.2-2.0
86
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TABLA 3 DATOS DE PRECISIÓN, EXACTITUD Y LÍMITES DE DETECCIÓN
PARA LOS ANALITOS EN AGUA GRADO REACTIVO, AGUA SUBTERRÁNEA Y CORRIENTE
Exactitud y datos de desviación estándar
Agua grado
reactivo
Agua subterránea Agua corriente
Analito LDM (b) Concentración* R(c) SR(d) R SR R SR
µg/L
µg/L
Aldrin 0.075 0.15 86 9.5 100 11.0 69 9.0
Aldrin 0.007 0.05 106 20.0 86 16.3 - -
alfa-clordano 0.006 0.06 95 3.5 83 4.4 85 7.1
0.35 86 17.0 94 10.2 91 2.4
gama-clordano 0.012 0.06 95 0.4 86 5.3 83 14.7
0.35 86 18.5 95 14.3 91 6.0
Clordano 0.14 0.17 NA 8.0 - - 105 12.4
3.4 NA 3.6 - - 95 9.6
Dieldrin 0.012 0.10 87 17.1 67 10.1 92 15.7
3.6 114 9.1 94 8.6 81 14.0
Endrin 0.063 0.10 119 29.8 94 20.2 106 14.0
3.6 99 6.5 100 11.3 85 12.4
Heptacloro 0.003 0.032 77 10.2 37 6.8 200 22.6
1.2 80 7.4 71 9.8 106 16.8
Heptacloroepóxido 0.004 0.04 100 15.6 90 14.2 112 5.9
1.4 115 6.6 103 6.9 81 15.6
Hexaclorobenceno 0.002 0.003 104 13.5 91 10.9 100 15.6
0.09 103 6.6 101 4.4 88 13.4
Lindano 0.003 0.03 91 6.5 88 7.7 103 8.1
1.2 111 5.0 109 3.4 93 18.4
Cis-nonacloro 0.027 0.06 110 15.2 101 7.2 9 14.3
0.45 82 21.3 93 18.3 87 5.4
Trans-nonacloro 0.011 0.06 95 9.6 83 7.1 73 4.1
0.35 86 21.8 94 17.2 86 5.1
Toxafeno 1.0 10 NA 12.6 - - 110 9.5
80 NA 15.3 - - 114 13.5
NA = No aplica. No se analizó por separado un juego de estándares acuosos, y el factor de respuesta para agua grado reactivo se
usó para calcular una recuperación para la matriz de agua corriente.
(a) Datos corregidos por cantidades detectadas en el blanco, representan la media de 5-8 muestras.
(b) MDL = µg/L; calculado de multiplicar la desviación estándar (S) por el valor de la t de Student apropiado para un nivel de
confianza de 99% y un estimado de desviación estándar con n-1 grados de libertad.
(c) R = Porcentaje de recuperación promedio.
(d) SR = Desviación estándar sobre el porcentaje de recuperación.
* Se refiere a las concentraciones usadas para generar R y SR para las matrices de los tres tipos de agua, no para las
determinaciones de MDL.
- No se realizó análisis.
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TABLA 4 PRECISIÓN Y EXACTITUD DEL MÉTODO EN FUNCIÓN A LA CONCENTRACIÓN
Parámetro Rango de trabajo
(µg/L)
AGUA GRADO REACTIVO
Exactitud como
recuperación X
(µg/L)
Precisión de un
analista SR
(µg/L)
Precisión total
(µg/L)
Hexaclorobenceno (0.01-0.37) 1.028C+0.00 0.108x+0.00 0.227x+0.00
Lindano (0.04-1.39) 1.009C+0.00 0.0577x+0.01 0.142x+0.00
Heptacloro (0.04-1.41) 1.002C+0.02 0.107x+0.01 0.211x+0.02
Aldrin (0.04-1.42) 1.066C+0.00 0.031x+0.02 0.264x+0.00
Heptacloroepóxido (0.04-1.42) 0.952C+0.00 0.032x+0.02 0.129x+0.02
Dieldrin (0.10-7.53) 1.027C+0.00 0.091x+0.01 0.198x+0.02
Endrin (0.10-7.50) 0.958C+0.01 0.116x+0.01 0.136x+0.02
Clordano (0.51-50.90) 1.037C+0.06 0.084x+0.06 0.125x+0.19
Toxafeno (5.63-70.40) 1.087C+0.24 0.131x-0.031 0.269x+0.69
61

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TABLA 5 DATOS DE VALIDACIÓN DE UN LABORATORIO MEXICANO
METODO FUENTE: EPA 8081A-1996 MATRIZ: AGUA
TECNICA: GC/ECD
PARÁMETRO
LDM
METODO
FUENTE
INTERVALO DE TRABAJO
DEL MÉTODO ABC
VALIDADO
VALIDACIÓN DE MÉTODO
LDM
OBTENIDO
ug/L ug/L ug/L ug/L ug/L % % %R %R
HEXACLOROBENCENO NE 0.0005 A 0.02 0.00006 0.0003 0.40 20.00 112.48 70-130
HEPTACLORO 0.56 0.0005 A 0.02 0.00005 0.0003 0.45 20.00 95.49 70-130
ALDRIN 0.83 0.0005 A 0.02 0.00007 0.0003 0.49 20.00 121.63 70-130
HEPTACLORO EPOXIDO 0.34 0.0005 A 0.02 0.00006 0.0003 0.50 20.00 100.58 70-130
4-4'-DDE 0.59 0.0005 A 0.02 0.00006 0.0003 0.59 20.00 108.45 70-130
DIELDRIN 0.49 0.0005 A 0.02 0.00008 0.0004 0.47 20.00 99.06 70-130
ENDRIN 0.82 0.0005 A 0.02 0.00008 0.0004 0.56 20.00 95.45 70-130
4-4'-DDD 0.85 0.0005 A 0.02 0.00005 0.0003 0.56 20.00 95.45 70-130
4-4'D-DDT 0.71 0.0005 A 0.02 0.00006 0.0003 0.70 20.00 92.33 70-130
ENDRIN ALDEHIDO 0.36 0.0005 A 0.02 0.0002 0.0008 1.63 20.00 101.65 70-130
CLORDANO 0.58 0.0005 A 0.02 0.0001 0.0005 0.55 20.00 96.89 70-130
TOXAFENO 0.1 0.05 A 1030 0.005 0.025 2.45 20.00 94.35 70-130
Datos de Laboratorios ABC Química Investigación y Análisis S.A. de C.V.
LPC
METODO
ABC
PRECISION
OBTENIDA
CRITERIO DE
PRECISION
DEL METODO
FUENTE
EXACTITUD
OBTENIDA
CRITERIO DE
EXACTITUD
DEL METODO
FUENTE
NOTA: El límite de detección del método fue determinado a partir del análisis de 7 replicas de cada matriz procesada a través del
método analítico completo, el LPC se obtuvo multiplicando el LDM * 5, los datos de precisión y exactitud se obtuvieron con 10 réplicas
de la concentración media de la curva de calibración.
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TABLA 6 LÍMITES DE DETECCIÓN Y DE CUANTIFICACIÓN.
COMPUESTO LDM
Liquido
(µg/L)
LDM
Sólido
(µg/Kg)
LPC
Líquido
(µg/L)
LPC
Sólido
µg/Kg
Aldrin 0.034 2.2 0.255 15.5
Alfa-Clordano 0.037 1.5 0.270 11.2
Gamma- 0.050 4.2 0.350 30.5
4’4’-DDD 0.058 2.5 0.410 15.6
4’4’-DDE 0.081 3.6 0.600 21.5
4’4’-DDT 0.044 NA 0.300 28.5
Dieldrin 0.030 2.1 0.225 15.2
Endrin 0.050 1.6 0.350 10.2
Aldehído de Endrin 0.040 2.0 0.275 14.5
Heptacloro 0.032 2.1 0.240 15.0
Epóxido de heptacloro 0.025 1.7 0.165 11.5
Toxafeno (MR) 0.150 9.5 1.250 90.5
Liquido = Agua reactivo libre de orgánicos
Sólido = Arena
MR = respuesta de picos múltiples
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TABLA 7 PATRONES DE ELUCIÓN Y PROMEDIO DE RECUPERACIÓN DE LOS
PLAGUICIDAS ORGANOCLORADOS CON PARTICIÓN DE SILICA GEL (EXTRACTO DE
RESIDUO LÍQUIDO).
Compuesto
Fracción I
Hexano (80
mL)
Recuperación promedio +/- SD (RSD) (a,b)
Fracción II
Hexano (50 mL)
Fracción III
Cloruro de
metileno
(15 mL)
Recuperación
Total
Heptacloro 90±11 (12) 90±11 (12)
Aldrin 92±9.2 (10) 92±9.2 (10)
Heptacloro epóxido 89±4.1 (4.6) 89±4.1 (4.6)
Alfa-clordano
Gama-clordano 85±7.2 (8.5) 10±9.2 (92) 95±8.0 (8.4)
4,4’-DDE 95±16 (17) 95±16 (17)
Dieldrin 82±4.3 (5.3) 82±4.3 (5.3)
Endrin 65±3.1 (4.7) 65±3.1 (4.7)
4,4’-DDD 33±4.0 (15) 43±16 (37) 76±16(21)
Endrin aldehído C C
4,4’-DDT 88±18 (21) 88±18 (21)
(a) Los valores dados representan el promedio del porcentaje de recuperación de 3
determinaciones replicadas ± una desviación estándar. El número entre paréntesis es la
desviación estándar relativa.
(b) Las cantidades adicionadas son 15,000 30,000 y 150,000 ng/2 mL de extracto por
columna de los plaguicidas organoclorados y Aroclor 1016/Aroclor 1260, respectivamente.
(c) Imposible de determinar la recuperación debido a las interferencias.
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3.2 BIFENILOS POLICLORADOS (PCBs)
El principio de este método se basa en la extracción, purificación y concentración del extracto
purificado con objeto de la medición de los PCBs presentes en el extracto orgánico purificado de la
muestra inyectando una alícuota de 2 µL en un cromatógrafo de gases acoplado a un detector
selectivo de masas que trabaja simultáneamente en los modos SIM y SCAN. La identificación de
los analitos se realiza por la comparación de los espectros de masas con los de la biblioteca
estandarizada de la estación de datos, las abundancias relativas de los iones cualificadotes y con
los tiempos de retención de los estándares certificados, su cuantificación se realiza por medio del
método de estándar interno.
NOTA: Este método está basado en su desempeño, se permite que el laboratorio omita cualquier
paso o modifique cualquier procedimiento, suponiendo que todos los requerimientos de
desempeño especificados se cumplan. Al laboratorio no se le permite omitir cualquier punto de
control de calidad, ni los parámetros que se especifiquen como “NO MODIFICABLES”. Los
términos “debe”, “puede” y “deberá” son mencionados a través de los métodos y están destinados
a ilustrar la importancia de los procedimientos para producir datos verificables en los rangos de
trabajo del método. El término “debe” es usado para indicar que los desarrolladores de este
método encontraron ciertos procedimientos esenciales en muestras analizadas exitosamente; de
todas maneras, estos procedimientos pueden ser modificados u omitidos si el laboratorio puede
demostrar fehacientemente que la calidad de los resultados no resulta afectada.
PARÁMETROS NO MODIFICABLES
Cromatógrafo de Gases (Columnas Capilares).
Detector Selectivo de Masas con capacidad de trabajo simultáneo en modos SIM y SCAN
3.2.1 Aplicación y Alcances
3.2.1.1 Propósito – Este es un método para el análisis de los Bifenilos Policlorados (PCBs)
como congéneres, el número de congéneres que se pueden identificar dependerá de la
resolución de la columna cromatográfica y de los materiales de referencia que se tengan, está
diseñado para ser altamente sensible y específico.
3.2.1.2 Analitos –El método es aplicable a los siguientes analitos:
PCBs totales
Los congéneres con los que se cuenten materiales de referencia y que puedan ser
separados adecuadamente por la columna cromatográfica.
3.2.1.3 Matrices – Este método es aplicable para el análisis de los PCBs mencionados en el
inciso anterior en las siguientes matrices ambientales:
Aire Ambiente
Suelos
Sedimentos Marinos
Sedimentos Epicontinentales
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Aguas Marinas
Aguas Estaurinas y de Lagunas Costeras
Aguas Superficiales Epicontinentales
Aguas Subterráneas
Alimentos procesados, sin procesar, Organismos y Tejidos animales
Sangre
Leche Materna
3.2.1.4 Limitaciones – Los límites de detección en las muestras reales dependerán de las
interferencias presentes en las mismas, por lo que es muy importante tener en cuenta que pueden
variar hasta en magnitudes de 10 a 1,000 veces (factores de concentración de las muestras e
interferencias presentes en el extracto purificado).
Este método está restringido para utilizarse sólo bajo la supervisión de analistas expertos en el uso de
cromatografía de gases y en la interpretación de sus resultados. Cada analista debe demostrar la
habilidad para generar resultados aceptables con este método.
3.2.2 Resumen
AIRE AMBIENTE
Se utiliza un muestreador alto volumen modificado (Hi-Vol), con un filtro de fibra de vidrio y
un cartucho absorbente con espuma de poliuretano (PUF). El muestreo se lleva a cabo a
una flujo de ~ 200-280 L/min durante 24 h.
El filtro y el cartucho PUF se colocan en contenedores limpios y sellados, para luego
trasladarse al laboratorio para su análisis. Los PCBs se recuperan por extracción Soxhlet
con éter al 5% en hexano.
El volumen de los extractos se reduce con la técnica Kuderna-Danish (K-D) y se someten a
una limpieza con ácido sulfúrico diseñado específicamente para este tipo de análisis.
Los extractos se someten a cromatografía de gases con detector selectivo de masas
(GC/MSD) en el modo SIM y SCAN simultáneamente para la detección y cuantificación de
PCBs totales y de los congéneres calibrados.
Generalmente se alcanzan límites de detección

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El tiempo total del análisis es de 30 a 50 minutos por muestra, dependiendo de los analitos
y las condiciones analíticas que se escojan.
Los límites de detección del método se encuentran entre 0.005 a 0.01 µg/L.
SUELOS Y SEDIMENTOS
Aproximadamente de 10 g de muestra se extraen con cloruro de metileno-acetona (1:1) con
ayuda un brazo ultrasónico. Distintos procedimientos de limpieza pueden aplicarse al
extracto, dependiendo de la naturaleza de las interferencias de la matriz coextraida y de los
analitos. Después de la limpieza, el extracto se analiza inyectando una alícuota de 2 µL en
el GC/MSD en modo SIM y SCAN simultáneamente.
Los límites de detección con este método varían de 1 a 10 µg/Kg BS según los
diferentes analitos en matrices libres de interferencias.
ORGANISMOS, TEJIDOS ANIMALES, ALIMENTOS PROCESADOS Y SIN PROCESAR
Una muestra de 20 a 25 g para tejidos, 50 a 100 g en alimentos sólidos y 100 mL de
alimentos líquidos se extrae utilizando la técnica de extracción apropiada.
Después de la limpieza, el extracto se analiza inyectando una alícuota de 2 µL en el
GC/MSD en modo SIM y SCAN simultáneamente.
SANGRE HUMANA
A 5 mL de muestra se agrega metanol y hexano-éter etílico, se mezclan y centrifugan. La
fase superior es concentrada con nitrógeno, se agrega hidróxido de potasio metanólico y se
reduce el volumen por evaporación. Mientras se enfría se agrega metanol-agua y cuando
llega a temperatura ambiente se agrega n-hexano y se agita vigorosamente. La muestra se
purifica con una columna cromatográfica.
LECHE MATERNA
Una alícuota de 10mL de leche se trata con una resina comercial y acido fórmico, los
analitos se extraen .
La limpieza de los extractos se lleva a cabo por cromatografía en columna.
Los compuestos organoclorados son analizados por GC-MS
3.2.3 Procedimientos de Extracción y Purificación de muestras
Antes de utilizar cualquier procedimiento de limpieza, el analista debe procesar una serie de estándares de
calibración por medio del procedimiento para validar los patrones de elusión y la ausencia de interferencias de los
reactivos.
3.2.3.1 Interferencias generales
Las interferencias del método pueden originarse por la presencia de contaminantes en los
solventes, reactivos, material de vidrio o cualquier otro material durante el procesamiento
de la muestra (contaminación cruzada).
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El material de vidrio debe lavarse escrupulosamente. Lave el material de vidrio
enjuagándolo profusamente con el último disolvente utilizado en él. Después lávelo con
agua caliente y detergente y enjuáguelo con agua corriente y grado reactivo. Escúrralo,
séquelo y enjuáguelo con acetona. Después de secarlo y enfriarlo, selle el material de vidrio
y guárdelo en un ambiente limpio para evitar acumulación de polvo u otros contaminantes.
Guarde el material invertido o tapado con papel aluminio.
El uso de reactivos y disolventes de alta pureza ayuda a eliminar los problemas de
interferencias. Puede ser necesario purificar los disolventes por destilación en material de
vidrio. PRECAUCIÓN: Al purificar un disolvente se eliminan los estabilizadores, lo que
puede hacerlo peligroso. También pueden eliminarse conservadores, reduciéndose su vida
de anaquel.
Puede existir interferencia cuando se analiza una muestra con concentraciones bajas de los
analitos después de una muestra con concentraciones altas. Para evitar esto, después de
una muestra con concentraciones altas, debe inyectarse una o varias veces hexano para
asegurar que se obtengan valores precisos en la siguiente muestra.
Es importante que las muestras y los estándares de trabajo se encuentren en el mismo
disolvente. El disolvente de trabajo para los estándares debe ser el mismo que el disolvente
final utilizado en la preparación de la muestra. De no ser este el caso, puede afectarse la
comparación cromatográfica entre los estándares y la muestra.
3.2.3.2 Seguridad general
La carcinogenidad y toxicidad de los químicos utilizados en este método no ha sido
determinadas con precisión; de todas maneras; cada sustancia química debe ser tratada
como potencial peligro a la salud. La exposición a estas sustancias químicas debe ser
reducida al menor nivel posible. Se sugiere que el laboratorio realice monitoreos de higiene
ocupacional de cada reactivo a los que pueda estar expuesto el analista y que dichos
resultados estén disponibles para los analistas.
PRECAUCIÓN: Al purificar un disolvente se eliminan estabilizadores, lo que puede hacerlo
peligroso.
Este método puede no mencionar todas las precauciones de seguridad asociadas con su
uso. El laboratorio es responsable de mantener un ambiente de trabajo seguro y un archivo
de las normas de seguridad respecto a la exposición y manejo seguro de las sustancias
químicas especificadas en este método. Debe tenerse un archivo de referencias de las
hojas de información de seguridad el cual debe estar disponible a todo el personal
involucrado en estos análisis.
3.2.3.3 Matrices
3.2.3.3.1 Aire Ambiente
3.2.3.3.1.1 Equipo y Materiales
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
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3.2.3.3.1.2 Reactivos y Materiales de Referencia
3.2.3.3.1.2.1 Reactivos
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.2.3.3.1.2.2 Materiales de referencia
Estándares de calibración de congéneres de PCBs
Si los resultados son para determinar congéneres individuales de PCBs,
entonces deben preparase estándares para congéneres puros. Los
siguientes congéneres son los más comunes y se pueden conseguir como
mezclas certificadas. Este procedimiento puede ser apropiado también para
otros congéneres.
Compuestos No. CAS # IUPAC
2-Clorobifenilo 2051-60-7 1
2,3-Diclorobifenilo 16605-91-7 5
2,2’,5-Triclorobifenilo 37680-65-2 18
2,4’,5-Triclorobifenilo 16606-02-3 31
2,2’,3,5’-Tetraclorobifenilo 41464-39-5 44
2,2’,5,5’-Tetraclorobifenilo 35693-99-3 52
2,3’,4,4’-Tetraclorobifenilo 32598-10-0 66
2,2’3,4,5’-Pentaclorobifenilo 38380-02-8 87
2,2’,4,5,5’-Pentaclorobifenilo 37680-73-2 101
2,3,3’,4’,6-Pentaclorobifenilo 38380-03-9 110
2,2’,3,4,4’,5-Hexaclorobifeilo 35065-28-2 138
2,2’,3,4,5,5’-Hexaclorobifenilo 52712-04-6 141
2,2,3,5,5’,6-Hexaclorobifenilo 52663-63-5 151
2,2’,4,4’,5,5’-Hexaclorobifenilo 35065-27-1 153
2,2’,3,3’,4,4’,5-Heptaclorobifenilo 35065-30-6 170
2,2’,3,4,4’,5,5’-Heptaclorobifenilo 35065-29-3 180
2,2’,3,4,4’,5’,6-Heptaclorobifenilo 52663-69-1 183
2,2’,3,4’,5,5’,6-Heptaclorobifenilo 52663-68-0 187
2,2’,3,3’,4,4’,5,5’,6-Nonaclorobifenilo 40186-72-9 206
Estándares Internos
Se debe utilizar como estándar interno el decaclorobifenilo, adicionado en
cada muestra extraída antes del análisis e incluido en cada estándar inicial
de calibración.
Estándares surrogados
Cuando sean determinados los congéneres de PCBs, se utiliza el
tetracloro-meta-xileno como un surrogado.
3.2.3.3.1.3 Procedimiento de Extracción
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VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.2.3.3.1.4 Procedimiento de Purificación de Muestras
De la extracción se obtiene de 1 a 2 mL de extracto, estos se transfieren a un
tubo con tapón de rosca que contiene aproximadamente 5 mL de Ácido
Sulfúrico concentrado.
Se agita vigorosamente el tubo durante 2 min y posteriormente se centrífuga
para separar las fases.
Se transfiere cuantitativamente la fase orgánica a un tubo limpio y se
concentra con flujo de nitrógeno hasta un volumen menor a 1 mL.
Debe tenerse especial cuidado al hacer la transferencia del extracto limpio
de no tomar la parte del Ácido (fase inferior) ya que este podría dañar la
columna cromatográfica durante el análisis.
Con una pipeta pasteur, se transfiere el extracto limpio a un vial de 2 mL y se
afora a 1 mL, se cierra el vial y se envía para el análisis cromatográfico.
3.2.3.3.2 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras, superficiales
epicontinentales y subterráneas)
3.2.3.3.2.1 Equipo y Materiales
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.2.3.3.2.2 Reactivos y Materiales de Referencia
VER REACTIVOS PARA PLAGUICIDAS CLORADOS Y EN 3.2.3.3.1.2.
3.2.3.3.2.3 Procedimiento de Extracción
VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.2.3.3.2.4 Procedimiento de Purificación de Muestras
3.2.3.3.3 Suelos
3.2.3.3.3.1 Equipo y Materiales
VER PROCEDIMIENTO 3.2.3.3.1.4
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.2.3.3.3.2 Reactivos y Materiales de Referencia
VER REACTIVOS PARA PLAGUICIDAS CLORADOS Y EN 3.2.3.3.1.2
3.2.3.3.3.3 Procedimiento de Extracción
VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
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3.2.3.3.3.4 Procedimiento de Purificación de las muestras
Seguir procedimiento como en 3.2.3.3.1.4 y posteriormente al extracto
adicionar 2 g de cobre metálico en gránulos (limpio) y agitar vigorosamente
durante 1 minuto.
3.2.3.3.4 Sedimentos (marinos y epicontinentales)
3.2.3.3.4.1 Equipo y Materiales
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.2.3.3.4.2 Reactivos y Materiales de Referencia
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.2.3.3.4.3 Procedimientos de Extracción
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.2.3.3.4.4 Procedimientos de Purificación de Muestras
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.2.3.3.5 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos, y Tejidos
animales,
3.2.3.3.5.1 Tejidos y alimentos con grasa (≥ 2% GRASA)
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final a 1 mL)
3.2.3.3.5.1.1 LECHE
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final a 1 mL)
3.2.3.3.5.1.2 QUESO, YEMA DE HUEVO O HUEVO
DESHIDRATADO
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final a 1 mL)
3.2.3.3.5.1.3 MANTEQUILLA
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final a 1 mL)
3.2.3.3.5.1.4 HIGADO
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final a 1 mL)
3.2.3.3.5.1.5 TEJIDO GRASO
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VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final a 1 mL)
3.2.3.3.5.2 ALIMENTOS CON BAJO CONTENIDO DE GRASA
3.2.3.3.5.2.1 Alta humedad y azucares bajos ( > 75% agua < 5% azucares)
3.2.3.3.5.2.1.1 Lechugas, biota vegetal
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final a 1 mL)
3.2.3.3.5.2.1.2 Huevo entero
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final a 1 mL)
3.2.3.3.5.2.2 Alta humedad azucares intermedios ( > 75% agua y 5-15% de
azucares)
3.2.3.3.6 Sangre Humana
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final a 1 mL)
3.2.3.3.5.2.3 Alta humedad azucares altos ( > 75% agua < 15-30% azucares)
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final a 1 mL)
3.2.3.3.5.2.4 Alimentos secos con baja humedad (≤ 75% agua)
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final a 1 mL)
3.2.3.3.6.1 Equipo y Materiales
Sólo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este método
analítico.
Columna de cromatografía 7 mm ID x 200 mm, de 50 mL con llave.
Columna Micro-Synder
Tubos de ensayo de 16 x 150 mm con tapas de rosca.
Tubos concentradores kuderna de 25 mL
Microjeringas de 10 μL
3.2.3.3.6.2 Reactivos y Materiales de Referencia
Los disolventes que requiere el método deben ser grado pesticida, a menos que otra cosa se
indique.
Metanol
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Hexano
éter etílico
Acetona
Hidróxido de potasio
Silica gel
Sulfato de sodio anhidro
Hidróxido de sodio 2% en metanol
3.2.3.3.6.3 Procedimiento de Extracción
La muestra de sangre se centrifuga para separar el suero, este es aislado y congelado hasta su uso.
En un tubo de ensayo colocar 4 mL de metanol y 5 mL de suero, mezclar durante 4 minutos, agregar
5mL de una mezcla de hexano-éter etílico (1:1) agitar durante 15 minutos y centrifugar por 5 minutos
a 2000 rpm.
Transferir la fase superior a un tubo concentrador Kuderna-Danish y repetir los pasos anteriores dos
veces más combinando los extractos en el concentrador.
Concentrar los extractos a 0,5mL bajo una corriente suave de nitrógeno, agregar 2mL de hidróxido de
potasio metanólico en al concentrador y agregar una piedra de ebullición. Colocar una columna
Micro-Synder, llevar el contenido a ebullición suave y reducir el volumen a 0,3 mL.
NOTA: Si se forma un precipitado, agregar unas gotas de hidróxido de potasio
metabólico y calentar suavemente hasta que se disuelva.
Dejar enfriar y agregar 2 mL de una mezcla metanol-agua (1:1), cuando llegue a temperatura
ambiente, agregar 2 mL de n-hexano, tapar y agitar el tubo vigorosamente.
3.2.3.3.6.4 Procedimiento de Purificación de las muestras
En una columna cromatográfica de 7 mm DI x 200 mm, de 50 mL con llave, colocar un
tapón de fibra de vidrio en el fondo de la columna. Vaciar una suspensión de 3 g de silica gel
en 50 mL de hexano, dejar que la suspensión se asiente y agregar de 5 a 7 g de sulfato de
sodio. Enjuague la columna preparada con 20 mL de hexano. Cuando llegue al nivel de la
cama de sulfato de sodio, agregar la muestra y colocar una probeta graduada debajo de la
columna; cuando el extracto este entre a la fase de sulfato de sodio enjuagar el tubo
concentrador y la columna Micro-Synder con 1 mL de hexano, cuando estos lleguen a la fase
de sulfato de sodio agregar 25 mL de hexano. Colectar el eluyente de la columna en la
probeta graduada. Enjuagar las paredes de la probeta con 2 mL de hexano y concentrar a 1
mL bajo una corriente suave de nitrógeno.
3.2.3.3.7 Leche Materna
3.2.3.3.7.1 Equipo y Materiales
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.2.3.3.7.2 Reactivos y Materiales de Referencia.
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3.2.3.3.7.3 Procedimiento de Extracción
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.2.3.3.7.4 Procedimiento de Purificación de las muestras
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.2.4 MÉTODO DE IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN INSTRUMENTAL
3.2.4.1 Aplicación y Alcances
3.2.4.1.1 Matrices – Este método es aplicable para el análisis de PCBs en los extractos
purificados de aguas naturales, residuales municipales e industriales, así como
suelo, residuos, sedimentos, organismos, tejidos y alimentos, los extractos y su
purificación depende de la matriz analizada, se deben seguir los procedimientos de
extracción y purificación adecuados para cada matriz.
3.2.4.1.2 Limitaciones – Los límites de detección en las muestras reales dependerán de las
interferencias presentes en las mismas, por lo que es muy importante tener en cuenta que
pueden variar hasta en magnitudes de 10 a 1,000 veces (factores de concentración de las
muestras e interferencias presentes en el extracto purificado).
3.2.4.2 Resumen
3.2.4.3 Equipos y Materiales
Este método está restringido para utilizarse sólo bajo la supervisión de analistas expertos en
el uso de cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas y en la interpretación
de sus resultados. Cada analista debe demostrar la habilidad para generar resultados
aceptables con este método.
El extracto purificado y concentrado se analiza en un Sistema de Cromatografía de
Gases acoplado a espectrometría de masas con la capacidad de trabajar en los modos
SIM y SCAN simultáneamente, en caso de que se detecte algún PCB mediante los
tiempos de retención (Tr) coincidentes con los de los estándares respectivos y por el
espectro de masas en modo SCAN coincidente con el de la biblioteca estandarizada
del sistema de manejo de datos y con el ion cuantitativo y los 2 iones cualificadores
con sus respectivas áreas proporcionales obtenidas de los estándares de la curva de
calibración en el modo SIM, se cuantifica mediante el método de estándar interno, en
caso de que se cumplan los Tr pero no exista coincidencia entre las proporciones de
los iones cualificadores se debe tomar como tentativa la identificación, en caso de
que no se cumpla con los Tr o con el ion cuantitativo, entonces se trata de algún pico
interferente y no se reportan los resultados como positivos a PCBs.
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3.2.4.3.1 Equipo
3.2.4.3.2 Materiales
Cromatógrafo de gases – Sistema analítico completo con cromatógrafo de
gases con programación de temperatura para técnica de inyección splitsplitless
con control electrónico de presión (Agilent 7890 o equivalente).
Espectrómetro de masas capaz de realizar barridos de 35 a 500 uma por
segundo o menor, usando una fuente de ionización de impacto electrónico
con energía de 70 electrón volts. El espectrómetro debe ser capaz de
producir una espectro de masas (al inyectar 1 L de la disolución de
decafluorotrifenilfosfina DFTPP), el cual cumpla con los criterios
mencionados en la sección de control de calidad (Agilent 5975 o
equivalente).
Sistema de manejo de datos el cual se encuentra acoplado al GC/MS, Este
sistema debe ser capaz de tener una adquisición y almacenamiento
continuo de todos los espectros de masas generados durante el programa
cromatográfico y poder analizar en modo SCAN y SIM las señales de los
compuestos eluídos de la columna capilar del GC (agilent Chemsation).
Balanza analítica con precisión de 0.0001 g
Columna capilar de sílica fundida HP-5MS (Crosslinked 5% fenil metil
siloxano) de 30 m de longitud, 0.25 mm de diámetro y 0.25 m de película
de espesor o equivalente.
Microjeringa de 10 L, marca Hamilton 701N, No. parte 9301-0021 o
equivalente.
Microjeringa de 25 L, marca Hamilton 702N, No. parte 9301-0022 o
equivalente.
Microjeringa de 500 L, marca Hamilton 750N, No. parte 9301-0034 o
equivalente.
Matraces volumétricos aforados de 1,5 y 10 mL con tapón esmerilado.
Viales de vidrio con tapa de politetrafluoroetileno (PTFE) de rosca marca
Agilent o equivalente.
Insertos de vidrio para puerto de inyección marca Agilent o equivalente.
Septa color gris para bajo flujo, marca Agilent o equivalente.
O-ring de vespel marca Agilent o equivalente.
3.2.4.4 Reactivos y Materiales de Referencia
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3.2.4.4.1 Reactivos y disoluciones
Hexano, C6H14 grado optima, plaguicida o equivalente
Cloruro de Metileno CH2Cl2 grado óptima, plaguicida o equivalente
3.2.4.4.1.3 Materiales de referencia
Congéneres de PCBs
Los patrones pueden ser estándares puros o adquirirse como disoluciones
certificadas (patrones de referencia).
Si los resultados son para determinar congéneres individuales de PCBs,
entonces deben preparase estándares para congéneres puros. Los
siguientes congéneres son los más comunes y se pueden conseguir como
mezclas certificadas. Este procedimiento puede ser apropiado también para
otros congéneres.
Compuestos No. CAS # IUPAC
2-Clorobifenilo 2051-60-7 1
2,3-Diclorobifenilo 16605-91-7 5
2,2’,5-Triclorobifenilo 37680-65-2 18
2,4’,5-Triclorobifenilo 16606-02-3 31
2,2’,3,5’-Tetraclorobifenilo 41464-39-5 44
2,2’,5,5’-Tetraclorobifenilo 35693-99-3 52
2,3’,4,4’-Tetraclorobifenilo 32598-10-0 66
2,2’3,4,5’-Pentaclorobifenilo 38380-02-8 87
2,2’,4,5,5’-Pentaclorobifenilo 37680-73-2 101
2,3,3’,4’,6-Pentaclorobifenilo 38380-03-9 110
2,2’,3,4,4’,5-Hexaclorobifeilo 35065-28-2 138
2,2’,3,4,5,5’-Hexaclorobifenilo 52712-04-6 141
2,2,3,5,5’,6-Hexaclorobifenilo 52663-63-5 151
2,2’,4,4’,5,5’-Hexaclorobifenilo 35065-27-1 153
2,2’,3,3’,4,4’,5-Heptaclorobifenilo 35065-30-6 170
2,2’,3,4,4’,5,5’-Heptaclorobifenilo 35065-29-3 180
2,2’,3,4,4’,5’,6-Heptaclorobifenilo 52663-69-1 183
2,2’,3,4’,5,5’,6-Heptaclorobifenilo 52663-68-0 187
2,2’,3,3’,4,4’,5,5’,6-Nonaclorobifenilo 40186-72-9 206
Disolución Patrón
Preparar a partir de 3.2.4.4.1.3 una mezcla de congéneres de PCBs en una
concentración de 10 mg/L, se deben incluir el decaclorobifenilo como estándar
interno y el tetracloro-m-xileno como surrogado. El disolvente es hexano..
Disolución intermedia de 1 mg/L
A partir de la disolución de 10 mg/L, tome 500 µL con una microjeringa en un
matraz aforado de 5 mL y afore a la marca con hexano y agite para
homogenizar. Guarde la disolución en viales de 2 mL.
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Disoluciones de calibración
Prepare 5 niveles como mínimo de diferente concentración de las
disoluciones estándar para cada analito de interés en matraces volumétricos.
El punto de concentración más bajo de la curva de calibración debe ser 3 a 10
veces mayor que el valor del LDM. Las otras concentraciones corresponden
al intervalo esperado de las concentraciones encontradas en las muestras
reales o bien estarán definidas por el intervalo lineal del detector.
Estándar de calibración de 0.05 mg/L.- En un matraz aforado de 1 ml ponga
50 µL de la solución de 1 mg/L y afore a la marca con Hexano. Guarde esta
disolución en viales de 2 ml y rotule con etiqueta que contenga método, fecha
de preparación, concentración, solvente utilizado, persona que lo preparó
Estándar de calibración de 0.1 mg/L.- En un matraz de 1 ml ponga 100 µl de
la solución de 1 mg/L y afore a la marca con Hexano. Guarde esta disolución
en viales de 2 ml y etiquete.
Estándar de calibración de 0.005 mg/L.-. En un matraz de 1 ml ponga 100 µL
de la solución de 0.05 mg/L y afore a la marca con hexano, guarde esta
disolución en viales de 2 ml y etiquete..
Estándar de calibración de 0.25 mg/L.-. En un matraz aforado 1 mL ponga
250 µL de la solución de 1 mg/L y afore a la marca con hexano y guarde esta
disolución en viales de 2 mL y etiquete.
Estándar de calibración de 0.5 mg/L.-. En un matraz aforado de 1 ml ponga
500 µL de la solución de 0.05 mg/L y afore a la marca con hexano, guarde la
disolución en viales de 2ml y etiquete.
3.2.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptación y rechazo
Cada laboratorio que utilice este método está obligado a operar un programa de control de calidad
(CC) formal. Los requerimientos mínimos de este programa consisten en una demostración inicial
de la capacidad del laboratorio para cumplir con las especificaciones de desempeño del método,
además realizar análisis continuos de muestras de control de calidad (MCC) para demostrar la
precisión y exactitud continuas y el análisis de blancos. El desempeño del laboratorio debe
compararse con los criterios aquí establecidos, con objeto de determinar si los resultados de los
análisis cumplen con las especificaciones de desempeño del método. El analista debe hacer una
demostración inicial de su habilidad para generar una exactitud y precisión aceptables por este
método.
Cada vez que se realice una modificación al método o que se cambie el analista responsable de
llevar a cabo está determinación, el analista designado debe repetir la validación del método, si el
cambio va a afectar el límite de detección del método (LDM), el laboratorio debe demostrar que el
nuevo LDM determinado es igual o más bajo que el anterior para los analitos de interés.
No se permite el uso de técnicas determinativas alternativas y cambios que degraden la ejecución
del método. Si se utiliza una técnica analítica que no sea la especificada en este método, dicha
técnica debe tener especificaciones iguales o mejores que las de las técnicas descritas en este
documento para el analito de interés.
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Es obligatorio para el laboratorio mantener los registros de las modificaciones hechas a este
método. Estos registros deben de incluir lo siguiente:
- La justificación por escrito de la necesidad de realizar modificaciones al método para ese
analito.
- Los nombres, títulos, direcciones y número de teléfono de los analistas que ejecutaron los
análisis y modificaciones y el encargado de control de calidad que presenció y verificó los
análisis y sus modificaciones.
- Los resultados de todas las pruebas de CC del método modificado comparadas con el
método original, dichos datos deben de incluir todos los parámetros mencionados en la
sección de desempeño del método.
- La información escrita en las bitácoras tanto del equipo como del analista, deben incluir
los siguientes datos:
Identificación de la muestra
Número del lote analítico en el cual se analizó la muestra
Fecha del análisis
Procedimiento cronológico utilizado
Cantidad de muestra utilizada
Número de muestras de control de calidad analizadas en el lote
Trazabilidad de las calibraciones de los instrumentos de medición
Registros de bitácoras, en cintas de respaldo o en otros respaldos de
información
Información cruda reportada por los equipos o por los analistas
Evidencia de la aceptación o rechazo de los resultados del lote analítico.
3.2.4.5.1 Verificación del equipo
3.2.4.5.1.1 Verificación de la sintonía del espectrómetro de masas
(Autotune)
Realice una autosintonía (autotune y DFTPP tune), siguiendo las
actividades descritas en el instructivo de la calibración del
espectrómetro de masas correspondiente. Esta es una autosintonía
(autotune) que hace el instrumento con respecto a una sustancia de
referencia llamada Perfluorotributilamina PFTBA
Si no se cumple con las especificaciones siguientes, determine las
causas y corrija el problema, de acuerdo al instructivo de
mantenimiento preventivo del instrumento, documente las incidencias
y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del sistema
GC/MS.
Especificaciones para el autotune
Masa Especificación
69 100%
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219 30% respecto a la masa 69
502 1% respecto a la mas 69
3.2.4.5.1.2 Verificación del Sistema (sintonía del MS con DFTPP) de
acuerdo a las especificaciones el método.
Inyecte 2 L de la disolución de DFTPP según las condiciones
instrumentales anexas, y obtenga el espectro de la DFTPP.
Verifique que el espectro cumpla con los siguientes criterios
ION MASICO CRITERIO DE ABUNDANCIA RELATIVA DE IONES
MASICOS DE LA DFTPP
51 30 A 60% de la masa 198
68 < 2% DE LA MASA 69
70 < 2 % DE LA MASA 69
127 40 A 60 % DE LA MASA 198
197 A 1 % DE LA MASA 198
441 PRESENTE PERO MENOR QUE LA MASA 443
442 > 40% DE LA MASA 198
443 17 A 23 % DE LA MASA 442
Si el espectro obtenido de DFTPP no cumpliera con las condiciones
anteriores será necesario que revise los parámetros de sintonía del
espectrómetro, repita nuevamente la sintonía (autotune y DFTPP
tune) e inyecte nuevamente la disolución de DFTPP.
Verifique que el sistema GC/MS esté libre de contaminación (nivel
señal-ruido)
Realice un blanco electrónico bajo las condiciones instrumentales
del método. El blanco electrónico como su nombre lo dice es una
corrida electrónica exclusivamente (sin inyección alguna), y éste
debe estar libre de picos o en su defecto éstos deberán ser no
mayores a 5 veces el ruido.
En caso de no cumplir con lo mencionado en la sección anterior,
eleve las temperaturas tanto de la columna a 300 ºC, del puerto de
inyección a 280 ºC y del detector a 300 ºC, mantenga el sistema
bajo éstas condiciones de temperatura por 30 min y realice
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nuevamente el blanco electrónico. En caso de persistir el problema
lleve a cabo las acciones de limpieza del instrumento mencionadas
en el instructivo de mantenimiento preventivo correspondiente.
Verifique que los flujo de gases y condiciones cromatográficas sean
las adecuadas, según se menciona posteriormente.
3.2.4.5.1.3 Verificación del Funcionamiento del Sistema GC/MS
(SPCCs)
De la misma corrida del punto del DFTTP tune, verifique la
degradación del DDT (compuesto incluido en la disolución SPCCs)
a DDE y DDD, la suma de las respuestas del DDE y DDD no deben
exceder del 20% con respecto a la respuesta del DDT.
La bencidina y el pentaclorofenol deben presentarse en sus
respuestas normales (más menos 50%) y como picos bien definidos
y sin coleo. Si la degradación es excesiva y/o dan pobre respuesta
cromatográfica, revise el puerto de inyección y límpielo, cambie el
liner, sello dorado y si es necesario que corte los primeros 5 a 10 cm
de la columna capilar en el extremo que conecta al puerto de
inyección.
3.2.4.5.2 Verificación de la calibración inicial.
La curva de la calibración inicial deberá realizarse inyectando los estándares
de calibración preparados y se considera lineal, si el por ciento de la
desviación estándar relativa (%RSD) de los factores de calibración (CF) es
menor o igual al 20%, los cálculos se realizan con las siguientes ecuaciones:
total de área
CF
masa inyectada en nanogramos
SDCF
% RSD x100
CF
Donde:
SDCF= Desviación estándar de los factores de calibración
CF = Promedio de los factores de calibración
La verificación de la calibración inicial puede también efectuarse mediante la
regresión por mínimos cuadrados, en la cual el criterio de aceptación es que
el factor de correlación "r 2 " sea mayor o igual a 0.997.
Si los criterios para el % RSD o r no se cumplen se procede a la revisión del
sistema cromatográfico y la preparación de las disoluciones de calibración.
Posteriormente la curva de calibración será vigente, si el análisis de un punto
intermedio de la curva no presenta una variación de la concentración mayor
al 15% y que será calculada de la siguiente manera.
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Diferencia de
Donde
CC= concentración calculada
CT= concentración teórica
concentración
O si se utiliza el factor de calibración
Diferencia
porcentual
CC CT
CT
% D
x100
CFv CF
CF
% x100
Donde:
CFv= Es el factor de calibración de cada compuesto en el estándar de
verificación.
CF = Es la media del factor de calibración del compuesto de la calibración
inicial.
Si el criterio de aceptación para la diferencia porcentual es mayor al 15% se
procederá a la revisión del sistema cromatográfico y a la preparación de la
solución estándar utilizada.
3.2.4.5.3 Verificación de contaminación de los reactivos.
Los blancos de reactivos no deben presentar ningún tipo de contaminante al
tiempo de retención de los analitos, por lo que es importante que los
reactivos utilizados cumplan con las especificaciones mencionadas.
Si los resultados de los blancos no cumplen con el criterio mencionado, se debe
localizar la fuente de contaminación y extraer y analizar nuevamente las muestras
asociadas al blanco contaminado
Use también los blancos de reactivos para verificar la contaminación por arrastre de
muestras con altas concentraciones en análisis secuenciales
3.2.4.5.4 Verificación del lote analítico
Por cada lote analítico de muestras analice al menos una muestra sintética
de control de calidad o preferentemente un material de referencia certificado
de la misma matriz de las muestras analizadas en el lote analítico, calcule el
% de recuperación de cada analito y surrogados de la muestra control, los
cuales deberán estar dentro del rango de 80 120 %R, de no ser así se debe
revisar la preparación de la muestra control y el sistema cromatográfico.
Realizar la corrección necesaria y reanalizar la muestra control, si el
problema persiste, se deben reanalizar todas las muestras del lote analítico.
3.2.4.5.5 Verificación de interferencias de matriz
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La verificación de interferencias por parte de la muestra se lleva a cabo
mediante las muestras fortificadas (MF). El laboratorio debe realizar el
análisis de muestras fortificadas (MF) y muestras duplicadas (MD), fortifique
una muestra por cada lote analítico o preferentemente una muestra de cada
tipo de matriz analizada en el lote. Las muestras fortificadas se deben
analizar cuando por las características de la muestra se sospeche de
interferencias de matriz o cuando sean parte de un plan de aseguramiento
de calidad de un proyecto.
Efecto de la matriz en el recobro del analito – Muestras fortificadas (MF):
Analice las muestras fortificadas:
Calcule el por ciento de recobro
El % de Recobro debe estar dentro 80 a 120 %R
Si los valores no cumplen con lo especificado, el sistema analítico está fuera
de control, determine las causas y corrija el problema, documente las
incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del resultado
analítico.
Efecto de la matriz en la precisión del analito – Precisión de la matriz
duplicada (MD): Analice una muestra duplicada por cada lote de muestra.
Calcule la diferencia porcentual relativa (DPR) entre la muestra y la
duplicada para cada analito, con la siguiente ecuación:
Donde:
DPR
C1 C2
* 200
C1
C2
C1 Concentración de la primera muestra
C2 concentración de la segunda muestra (muestra duplicada)
La DPR de cada analito obtenido entre la muestra y la duplicada debe
ser:

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concentración media del intervalo de trabajo al principio del lote y después
de cada 20 muestras ó 12 horas de análisis continuo.
Calcule el factor de calibración o la concentración para cada analito del
estándar de concentración media, y el por ciento de la diferencia (%D) con la
siguiente ecuación:
Donde:
FC1
FC2
Diferencia porcentual
x100
FC
1
FC1 = Factor de calibración promedio para cada plaguicida en la curva de
calibración, o la concentración nominal de del estándar de verificación.
FC2 = Factor de calibración promedio para cada plaguicida en el estándar de
concentración media, o la concentración calculada en el estándar de
verificación.
El valor obtenido del % de la diferencia (%D) deberá ser menor al 15%, de
no ser así verifique su vigencia, revisé también el sistema cromatográfico y
determine la causa de la falla y corrija, de no lograr corregir la falla, recalibre
nuevamente el sistema y en le caso de que la falla del estándar de
verificación sea en un lote mayor de 20 muestras reanalice las 10 muestras
anteriores al estándar de verificación que falló.
3.2.4.5.7 Verificación de estándares surrogados.
Evalúe los datos de recobro de los surrogados de las muestras.
Calcule el % de recuperación de los estándares surrugados en blancos,
muestras control, muestras adicionadas (si se realizaron), muestras
duplicadas (si se realizaron) y muestras reales, con la siguiente ecuación:
Donde:
muestra.
la muestra.
C
Re cuperación % R
C
1 x
2
100
C1=Concentración calculada de surrugados en la
C2=Concentración nominal del surrugado adicionado a
El %R debe estar entre el 70 y el 130 % de recuperación de no ser así
verifique la preparación de la muestra que fallo y el sistema cromatográfico,
determine la causa de la falla y corrija, de no encontrarla, repita la extracción
de la muestra y vuelva a analizar si el %R esta fuera del rango de aceptación
llene hoja de incidencia y reporte como interferencia de matriz y los
resultados obtenidos.
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Si los valores no cumplen con los especificados, determine las causas y
corrija el problema, documente las incidencias y acciones correctivas e
inclúyalas en el expediente del resultado analítico.
3.2.4.5.8 Verificación de estándares internos.
Compare el área de el o los estándares internos de las muestras con el área
promedio de los estándares internos obtenidos de los puntos de calibración,
el valor obtenido en el o los estándares internos de la muestra no deben ser
menores a 50% ni mayores a 200% del valor promedio obtenido en la curva
de calibración para cada estándar interno.
Si los valores no cumplen con los especificados, el sistema analítico está
fuera de control, determine las causas y corrija el problema, documente las
incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del resultado
analítico.
3.2.4.5.9 Control de Calidad Estadístico – En esta sección se especifica
como debe realizarse el control de calidad estadístico obligatorio para este
método:
3.2.4.5.9.1 Preparación de las Muestras de Control de Calidad (MCC)
Prepare la MCC de la siguiente forma:
Se deberá preparar la MCC de una fuente externa al laboratorio o ser
preparada de una fuente diferente a la utilizada en la curva de
calibración.
Prepare una disolución a una concentración que corresponda al
rango de trabajo del método.
NOTA: Se recomienda que el valor de las soluciones de MCC no sea
conocido por el analista con el objeto de asegurar la veracidad de la
medición
3.2.4.5.9.2 Gráficas de Control de Exactitud – El laboratorio debe
elaborar y mantener actualizadas las gráficas de control de exactitud
para cada lote analizado a partir de la demostración inicial de
desempeño.
Cada valor de exactitud obtenido de las MCC de cada lote analizado deberá
graficarse y deberá estar dentro de los límites de control superior e inferior (
3s).
Si un valor de exactitud es mayor a 3s, deberán rechazarse todos los
resultados del lote analítico, determine las causas y corrija los errores,
documente adecuadamente las incidencias y acciones correctivas, deberá
repetirse el análisis del lote en cuestión.
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3.2.4.4.9.3 Gráficas de Control de Precisión – El laboratorio debe
elaborar y mantener actualizadas las gráficas de control de precisión
para cada lote analizado a partir de la demostración inicial de
desempeño
Determine los límites de control de la siguiente forma:
Límite Superior de Control (LSC) = 3.27R
Límite Superior de Advertencia (LSA) = 2.51R
Donde:
R = Promedio del DPR
Si un valor de precisión es mayor al LSC, deberán rechazarse todos
los resultados del lote analítico, determine las causas del problema y
corrija los errores, documente adecuadamente las incidencias y
acciones correctivas, deberá repetirse el análisis del lote en cuestión.
3.2.4.5.10 Validación de modificaciones del método o de métodos alternos
Para validar las modificaciones que se efectúen a este método o para la
utilización de métodos alternos deberá seguirse el siguiente procedimiento:
Si se realizan modificaciones al presente método, deberán validarse
parcialmente.
Si se utiliza un método alterno cuya fuente sea un método estandarizado por
alguna Institución de carácter internacional o reconocida internacionalmente
(e. g. ASTM, USEPA, AOAC, Standard Methods, DIN, OMS Environment
Canada, etc.) también deberá validarse parcialmente.
Si se utiliza algún método no estandarizado, deberá evidenciarse, además
de los parámetros de validación parcial, los parámetros de Robustez,
Reproducibilidad y Especificidad los cuales solo pueden evaluarse mediante
estudios interlaboratorio.
Verifique diariamente el desempeño de todo el sistema analítico utilizando
los datos recolectados de análisis de blancos reactivos, solución verificadora
del desempeño del laboratorio.
Si hay un coleado excesivo de algún analito a comparación de los
cromatogramas del método, éste deberá corregirse. Los problemas de
coleado generalmente pueden rastrearse a sitios activos en la columna
cromatográfica, problemas en la instalación de la columna o mala operación
del detector.
Verifique la precisión con réplicas del análisis. Una pobre precisión
generalmente puede deberse a fugas, especialmente en el puerto de
inyección. Si el sistema cromatográfico se está comportando aparentemente
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bien, pero con baja sensibilidad, puede ser necesario generar una nueva
curva o juego de factores de calibración para verificar las respuestas bajas
antes de buscar la fuente del problema.
3.2.4.5.11 Composición del lote analítico (para cada 25 muestras ó 12 horas de
análisis continuo)
1 Calibración con PFTBA (Autotune)
2 Calibración con PFTBA (DFTPP)
3 Análisis de DFTPP (Tuning Standard Mixture)
4 Blanco electrónico
5 Mezcla de Verificación
6 Blanco de Reactivos
7 Muestra de Control de Calidad 1 (MCC)
8 Muestra real No. 1
9 Muestra real No. 2
10 Muestras reales (hasta 20 o 12 horas de análisis continuo)
11 Muestra fortificada (si se realizo)
12 Muestra fortificada duplicada (si se realizo)
13 Muestra de Verificación de la Calibración Continua.
14 Siguientes 20 muestras reales
3.2.4.5.12 Criterios de Aceptación y Rechazo
Verificación del Equipo
Punto de verificación Criterio
Equipo libre de interferencias (blanco
electrónico)
Autotune
DFTTP tune
Puerto de inyección libre de suciedad y baja
degradación
Verificación de la Calibración Inicial
No deberá presenta picos a cualquier
tiempo de retención
Cumple con especificaciones del
fabricante
Cumple con abundancias
especificadas en el método
Degradación del DDT menor al 15%,
no coleo de Bencidina y PCP
Punto de verificación Criterio
Evaluación del % Diferencia de la concentración
de la Mezcla de Verificación, punto intermedio de
la curva de calibración.
Menor al 15%
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Verificación de Contaminación de Reactivos
Punto de verificación Criterio
Blanco de reactivos
Verificación del Proceso Analítico
No deben presentar ningún tipo de
contaminante al tiempo de retención
de los analitos medidos
Punto de verificación Criterio
Muestra de control de calidad % de Recuperación de 70 / 130
Evaluación de estándares Surrogados % de Recuperación de 70 / 130
Evaluación de muestras adicionadas duplicadas % DSR < 20%
3.2.4.6 Calibración
Verificación de Interferencias de Matriz
Punto de verificación Criterio
Evaluación de muestras adicionadas % de Recuperación 70 / 130
Estabilidad de la Curva de Calibración
Punto de verificación Criterio
Evaluación de la Estándar de Verificación
(Intermedio)
% de diferencia menor al 15%
Se necesitan al menos 5 estándares de calibración. Uno debe contener analitos a una
concentración cercana, pero superior a la del límite práctico de cuantificación para cada analito;
los otros deben estar a concentraciones que cubran el intervalo esperado en las muestras. Por
ejemplo, si el LDM es 0.01µg/L y el LPC es de 0.05 µg/L, se espera que la muestra contenga
concentraciones mayores de 0.05 µg/L.
Una vez establecidas las condiciones de operación inyecte un volumen adecuado (2 L) de cada estándar de
calibración por triplicado y al final realice un promedio de las tres curvas y agréguelo a la tabla de
calibración del método.
Si la DSR de cada PCB es 20%, entonces la respuesta del instrumento es considerada lineal y el
factor de calibración promedio FC puede utilizarse para la cuantificación de los resultados de las
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muestras. Si la DSR es mayor que 20%, entonces no puede asumirse linealidad y se debe repetir la
curva de calibración.
Si se utiliza regresión lineal por mínimos cuadrados, deberá obtener el factor de correlación “r 2 ” para
cada analito, el cual deberá ser mayor o igual a 0.997 si “r” es menor a este valor, la curva de
calibración no es lineal y deberá verificarse la preparación de los estándares de calibración y el
sistema cromatográfico y repetir la calibración.
3.2.4.6.1 Calibración por Estándar Interno:
Donde:
3.2.4.7 Procedimiento Analítico
El analista debe seleccionar uno o más estándares internos que sean similares en
comportamiento analítico a los compuestos de interés. El analista debe además
demostrar que la medición del estándar interno no es afectada por el método o
interferencias de la matriz.
Prepare los estándares de calibración a un mínimo de cinco concentraciones para
cada analito de interés por adición de volúmenes. Para cada estándar de calibración,
adicione una cantidad conocida constante de uno o más estándares internos y afore
con un solvente apropiado. Uno de los estándares debe estar a una concentración
cercana, pero por arriba, del LPC. Las otras concentraciones deben corresponder al
rango de trabajo.
Inyecte cada estándar de calibración. Tabule la altura del pico o el área de respuesta
contra la concentración de cada compuesto y el estándar interno. Calcule el factor de
respuesta (RF) para cada compuesto como sigue:
As*
Cis
RF
Ais*
Cs
As = Respuesta para el analito que será medido.
Ais = Respuesta del estándar interno.
Cis = Concentración del estándar interno, µg/L.
Cs = Concentración del analito a ser medido, µg/L.
Si el valor RF sobre el rango de trabajo es constante (< 20% RSD), el RF puede
usarse para cálculos. Alternativamente, los resultados pueden usarse para graficar una
curva de calibración de la relación de respuesta, As/Ais contra RF.
3.2.4.7.1 Análisis de los extractos de las muestras
Condiciones cromatográficas:
Gas acarreador Helio
Temperatura inicial 100 °C
Tiempo inicial 5 min
Programa 1 10ºC/min
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Temperatura final 1 200ºC
Programa 2 15ºC/min
Temperatura final 2 300ºC 1 min
Temperatura del inyector 250ºC
Temperatura del detector 300ºC
Modo splitless
Flujo de split 50 mL/min
Purga de septa 3 mL/min
Adicione un volumen de la mezcla de estándares internos, de manera que la concentración
de estos en el vial sea igual a la concentración que se utilizo en la preparación de la curva
de calibración.
Elabore la secuencia de análisis de acuerdo a lo indicado en el punto de composición del
lote analítico.
Inicie el análisis.
Inyecte un volumen de 2 L del extracto de la muestra o estándar en el cromatógrafo de
gases. Registre el volumen final del extracto.
Verifique que se cumple con lo especificado en el inciso de control de calidad y criterios de
aceptación y rechazo.
Si la respuesta de cualquier ion cuantitativo excede la respuesta del intervalo de
calibración, diluya el extracto y reanalice.
3.2.4.7.2 Identificación de los analitos
La determinación cualitativa de cada compuesto determinado por este método está basada
en la comparación del tiempo de retención y de los espectros de masas de las muestras,
con los tiempos y iones característicos de los espectros de masas de los estándares de
referencia en modo SCAN. Los espectros de masas de referencia en modo SIM están
definidos por tres iones de mayor intensidad relativa (mayor al 30% de intensidad). Los
compuestos son identificados como presentes cuando cumplen con los siguientes criterios:
El tiempo de retención relativo TRR del compuesto detectado es 0.5 unidades del TRR del
estándar de referencia.
La intensidad relativa de los iones cualificadores en modo SIM se encuentren dentro del
30% de las intensidades relativas de estos iones en el espectro de referencia (ejemplo:
para un ion con abundancia del 50% en el espectro de referencia, la abundancia en el
espectro de la muestra debe encontrarse en el intervalo de 20% y 80%)
Los iones que estén presentes en el espectro de la muestra y que no estén en el espectro
del estándar deben ser revisados cuidadosamente, ya que puede tratarse de contaminación
de fondo o coelusión de otros compuestos.
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Si hay iones que estén presentes en el espectro del estándar y no estén presentes en la
muestra, debe someterlo a revisión ya que éstos pueden haberse perdido por posibles
sustracciones en el momento de limpiar los espectros
Para muestras que contienen componentes que no están asociados con los estándares de
calibración, realice una búsqueda por librería para obtener una identificación y a partir de
los estándares internos, obtener una concentración estimada.
3.2.4.7.3 Cálculos
1.1.3.
3.2.4.7.3.1 AIRE AMBIENTE
3.2.4.7.3.2 AGUA
VER PLAGUICIDAS CLORADOS
VER PLAGUICIDAS CLORADOS
3.2.4.7.3.3 SUELOS Y SEDIMENTOS
VER PLAGUICIDAS CLORADOS
3.2.4.7.3.4 ALIMENTOS PROCESADOS, SIN PROCESAR, TEJIDOS Y
ALIMENTOS
1.1.4. 3.2.4.8 Desempeño del Método
VER PLAGUICIDAS CLORADOS
Los datos son los del método de referencia y los de un laboratorio nacional con experiencia.
3.2.4.8.1 Límite de Detección: Ver Tabla 5.
3.2.4.8.2 Límite Práctico de Cuantificación: Ver Tabla 5
3.2.4.8.3 Intervalo de Trabajo: Ver Tabla 5
3.2.4.8.4 Precisión del Método: Ver Tabla 5
3.2.4.8.5 Exactitud del Método: Ver Tabla 5
3.2.4.9 Tablas y Figuras
TABLA 1 CANTIDADES DE MUESTRA SUGERIDAS PARA ANALIZAR VARIAS MATRICES (1)
Matriz de la
muestra (2)
Ejemplo
Por ciento de
sólidos
Fase
Cantidad
extraída
Acuosa
Muestras Monofásicas
Agua Potable
Agua subterránea
Aguas tratadas
20 Solida 10 g
90

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Organica
Cenizas
Solventes residuales
Aceites gastados
Organic polymer

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TABLA 2
CONGENERES ESPECIFICOS QUE SON COMPONENTES MAYORES DE LOS
AROCLORES COMUNES
Congénere
Número
IUPAC
1016 1221 1232
Aroclor
1242 1248 1254 1260
Bifenilo X
2-CB 1 X X X X
2,3-DCB 5 X X X X X
3,4-DCB 12 X X X X
2,4,4'-TCB 28* X X X X X
2,2',3,5'-TCB 44 X X X X X
2,3',4,4'-TCB 66* X X X
2,3,3',4',6-PCB 110 X
2,3',4,4',5-PCB 118* X X
2,2',4,4',5,5'-HCB 153 X
2,2',3,4,4',5'-HCB 138 X
2,2',3,4,4',5,5'-HpCB 180 X
2,2',3,3',4,4',5-HpCB 170 X
*Coelución aparente del 28 con el 31 (2,4',5-triclorobifenilo
* Coelución aparente del 66 con el 95 95 (2,2',3,5',6-pentaclorobifenilo
*Coelución aparente del 118 con el 149 (2,2',3,4',5',6-hexaclorobifenilo
Esta tabla no tiene la intención de ilustrar todos los congéneres que pueden estar presente en un Aroclor dado, solo
cuales son los componentes mayores
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TABLA 3 IDENTIFICACION DE TODOS LOS CONGENERES DE PCBs Y SUS ANALOGOS
MARCADOS
CONGENERE No. CAS ANALOGO MARCADO No. CAS
2-MoCB 1 2051-60-7 13C12-2-MoCB2 1L 234432-85-0
3-MoCB 2 2051-61-8
4-MoCB 3 2051-62-9 13C12-4-MoCB2 3L 208263-77-8
2,2'-DiCB 4 13029-08-8 13C12-2,2'-DiCB2 4L 234432-86-1
2,3-DiCB 5 16605-91-7
2,3'-DiCB 6 25569-80-6
2,4-DiCB 7 33284-50-3
2,4'-DiCB3 8 34883-43-7
2,5-DiCB 9 34883-39-1 13C12-2,5-DiCB4 9L 250694-89-4
2,6-DiCB 10 33146-45-1
3,3'-DiCB 11 2050-67-1
3,4-DiCB 12 2974-92-7
3,4'-DiCB 13 2974-90-5
3,5-DiCB 14 34883-41-5
4,4'-DiCB 15 2050-68-2 13C12-4,4'-DiCB2 15L 208263-67-6
2,2',3-TrCB 16 38444-78-9
2,2',4-TrCB 17 37680-66-3
2,2',5-TrCB3 18 37680-65-2
2,2',6-TrCB 19 38444-73-4 13C12-2,2',6-TrCB2 19L 234432-87-2
2,3,3'-TrCB 20 38444-84-7
2,3,4-TrCB 21 55702-46-0
2,3,4'-TrCB 22 38444-85-8
2,3,5-TrCB 23 55720-44-0
2,3,6-TrCB 24 55702-45-9
2,3',4-TrCB 25 55712-37-3
2,3',5-TrCB 26 38444-81-4
2,3',6-TrCB 27 38444-76-7
2,4,4'-TrCB3 28 7012-37-5 13C12-2,4,4'-TriCB5 28L 208263-76-7
2,4,5-TrCB 29 15862-07-4
2,4,6-TrCB 30 35693-92-6
2,4',5-TrCB 31 16606-02-3
2,4',6-TrCB 32 38444-77-8
2',3,4-TrCB 33 38444-86-9
2',3,5-TrCB 34 37680-68-5
3,3',4-TrCB 35 37680-69-6
3,3',5-TrCB 36 38444-87-0
3,4,4'-TrCB 37 38444-90-5 13C12-3,4,4'-TrCB2 37L 208263-79-0
3,4,5-TrCB 38 53555-66-1
3,4',5-TrCB 39 38444-88-1
2,2',3,3'-TeCB 40 38444-93-8
2,2',3,4-TeCB 41 52663-59-9
2,2',3,4'-TeCB 42 36559-22-5
2,2',3,5-TeCB 43 70362-46-8
2,2',3,5'-TeCB3 44 41464-39-5
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2,2',3,6-TeCB 45 70362-45-7
2,2',3,6'-TeCB 46 41464-47-5
2,2',4,4'-TeCB 47 2437-79-8
2,2',4,5-TeCB 48 70362-47-9
2,2',4,5'-TeCB 49 41464-40-8
2,2',4,6-TeCB 50 62796-65-0
2,2',4,6'-TeCB 51 68194-04-7
2,2',5,5'-TeCB3 52 35693-99-3 13C12-2,2',5,5'-TeCB4 52L 208263-80-3
2,2',5,6'-TeCB 53 41464-41-9
2,2',6,6'-TeCB 54 15968-05-5 13C12-2,2',6,6'-TeCB2 54L 234432-88-3
2,3,3',4'-TeCB 55 74338-24-2
2,3,3',4'-TeCB 56 41464-43-1
2,3,3',5-TeCB 57 70424-67-8
2,3,3',5'-TeCB 58 41464-49-7
2,3,3',6-TeCB 59 74472-33-6
2,3,4,4'-TeCB 60 33025-41-1
2,3,4,5-TeCB 61 33284-53-6
2,3,4,6-TeCB 62 54230-22-7
2,3,4',5-TeCB 63 74472-34-7
2,3,4',6-TeCB 64 52663-58-8
2,3,5,6-TeCB 65 33284-54-7
2,3',4,4'-TeCB3 66 32598-10-0
2,3',4,5-TeCB 67 73575-53-8
2,3',4,5'-TeCB 68 73575-52-7
2,3',4,6-TeCB 69 60233-24-1
2,3',4',5-TeCB 70 32598-11-1
2,3',4',6-TeCB 71 41464-46-4
2,3',5,5'-TeCB 72 41464-42-0
2,3',5',6-TeCB 73 74338-23-1
2,4,4',5-TeCB 74 32690-93-0
2,4,4',6-TeCB 75 32598-12-2
2',3,4,5-TeCB 76 70362-48-0
3,3',4,4'-TeCB3,6 77 32598-13-3 13C12-3,3',4,4'-TeCB2,7 77L 105600-23-5
3,3',4,5-TeCB 78 70362-49-1
3,3',4,5'-TeCB 79 41464-48-6
3,3',5,5'-TeCB 80 33284-52-5
3,4,4',5-TeCB6 81 70362-50-4 13C12-3,4,4',5-TeCB7 81L 208461-24-9
2,2',3,3',4-PeCB 82 52663-62-4
2,2',3,3',5-PeCB 83 60145-20-2
2,2',3,3',6-PeCB 84 52663-60-2
2,2',3,4,4'-PeCB 85 65510-45-4
2,2',3,4,5-PeCB 86 55312-69-1
2,2',3,4,5'-PeCB 87 38380-02-8
2,2',3,4,6-PeCB 88 55215-17-3
2,2',3,4,6'-PeCB 89 73575-57-2
2,2',3,4',5-PeCB 90 68194-07-0
2,2',3,4',6-PeCB 91 68194-05-8
2,2',3,5,5'-PeCB 92 52663-61-3
2,2',3,5,6-PeCB 93 73575-56-1
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2,2',3,5,6'-PeCB 94 73575-55-0
2,2',3,5',6-PeCB 95 38379-99-6
2,2',3,6,6'-PeCB 96 73575-54-9
2,2',3',4,5-PeCB 97 41464-51-1
2,2',3',4,6-PeCB 98 60233-25-2
2,2',4,4',5-PeCB 99 38380-01-7
2,2',4,4',6-PeCB 100 39485-83-1
2,2',4,5,5'-PeCB3 101 37680-73-2 13C12-2,2',4,5,5'-PeCB4 101L 104130-39-4
2,2',4,5,6'-PeCB 102 68194-06-9
2,2',4,5,'6-PeCB 103 60145-21-3
2,2',4,6,6'-PeCB 104 56558-16-8 13C12-2,2',4,6,6'-PeCB2 104L 234432-89-4
2,3,3',4,4'-PeCB3,6 105 32598-14-4 13C12-2,3,3',4,4'-PeCB7 105L 208263-62-1
2,3,3',4,5-PeCB 106 70424-69-0
2,3,3',4',5-PeCB 107 70424-68-9
2,3,3',4,5'-PeCB 108 70362-41-3
2,3,3',4,6-PeCB 109 74472-35-8
2,3,3',4',6-PeCB 110 38380-03-9
2,3,3',5,5'-PeCB 111 39635-32-0 13C12-2,3,3',5,5'-PeCB5
111
L
235416-29-2
2,3,3',5,6-PeCB 112 74472-36-9
2,3,3',5',6-PeCB 113 68194-10-5
2,3,4,4',5-PeCB6 114 74472-37-0 13C12-2,3,4,4',5-PeCB7
114
L
208263-63-2
2,3,4,4',6-PeCB 115 74472-38-1
2,3,4,5,6-PeCB 116 18259-05-7
2,3,4',5,6-PeCB 117 68194-11-6
2,3',4,4',5-PeCB3,6 118 31508-00-6 13C12-2,3',4,4',5-PeCB7
118
L
104130-40-7
2,3',4,4',6-PeCB 119 56558-17-9
2,3',4,5,5'-PeCB 120 68194-12-7
2,3',4,5,'6-PeCB 121 56558-18-0
2',3,3',4,5-PeCB 122 76842-07-4
2',3,4,4',5-PeCB6 123 65510-44-3 13C12-2',3,4,4',5-PeCB7 123L 208263-64-3
2',3,4,5,5'-PeCB 124 70424-70-3
2',3,4,5,6'-PeCB 125 74472-39-2
3,3',4,4',5-PeCB3,6 126 57465-28-8 13C12-3,3',4,4',5-PeCB2,7 126L 208263-65-4
3,3',4,5,5'-PeCB 127 39635-33-1
2,2',3,3',4,4'-HxCB3 128 38380-07-3
2,2',3,3',4,5-HxCB 129 55215-18-4
2,2',3,3',4,5'-HxCB 130 52663-66-8
2,2',3,3',4,6-HxCB 131 61798-70-7
2,2',3,3',4,6'-HxCB 132 38380-05-1
2,2',3,3',5,5'-HxCB 133 35694-04-3
2,2',3,3',5,6-HxCB 134 52704-70-8
2,2',3,3',5,6'-HxCB 135 52744-13-5
2,2',3,3',6,6'-HxCB 136 38411-22-2
2,2',3,4,4',5-HxCB 137 35694-06-5
2,2',3,4,4',5'-HxCB3 138 35065-28-2 13C12-2,2',3,4,4',5'-HxCB4 138L 208263-66-5
2,2',3,4,4',6-HxCB 139 56030-56-9
2,2',3,4,4',6'-HxCB 140 59291-64-4
95

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2,2',3,4,5,5'-HxCB 141 52712-04-6
2,2',3,4,5,6-HxCB 142 41411-61-4
2,2',3,4,5,6'-HxCB 143 68194-15-0
2,2',3,4,5',6-HxCB 144 68194-14-9
2,2',3,4,6,6'-HxCB 145 74472-40-5
2,2',3,4',5,5'-HxCB 146 51908-16-8
2,2',3,4',5,6-HxCB 147 68194-13-8
2,2',3,4',5,6'-HxCB 148 74472-41-6
2,2',3,4',5',6-HxCB 149 38380-04-0
2,2',3,4',6,6'-HxCB 150 68194-08-1
2,2',3,5,5',6-HxCB 151 52663-63-5
2,2',3,5,6,6'-HxCB 152 68194-09-2
2,2',4,4',5,5'-HxCB3 153 35065-27-1
2,2',4,4',5',6-HxCB 154 60145-22-4
2,2',4,4',6,6'-HxCB 155 33979-03-2 13C12-2,2',4,4',6,6'-HxCB2 155L 234432-90-7
2,3,3',4,4',5-HxCB6 156 38380-08-4 13C12-2,3,3',4,4',5-HxCB7 156L 208263-68-7
2,3,3',4,4',5'-HxCB6 157 69782-90-7 13C12-2,3,3',4,4',5'-HxCB7 157L 235416-30-5
2,3,3',4,4',6-HxCB 158 74472-42-7
2,3,3',4,5,5'-HxCB 159 39635-35-3
2,3,3',4,5,6-HxCB 160 41411-62-5
2,3,3',4,5',6-HxCB 161 74472-43-8
2,3,3',4',5,5'-HxCB 162 39635-34-2
2,3,3',4',5,6-HxCB 163 74472-44-9
2,3,3',4',5',6-HxCB 164 74472-45-0
2,3,3',5,5',6-HxCB 165 74472-46-1
2,3,4,4',5,6-HxCB 166 41411-63-6
2,3',4,4',5,5'-HxCB6 167 52663-72-6 13C12-2,3',4,4',5,5'-HxCB7 167L 208263-69-8
2,3',4,4',5',6-HxCB 168 59291-65-5
3,3',4,4',5,5'-HxCB3,6 169 32774-16-6 13C12-3,3',4,4',5,5'-HxCB2,7 169L 208263-70-1
2,2',3,3',4,4',5-HpCB3 170 35065-30-6 13C12-2,2',3,3',4,4',5-HpCB 170L 160901-80-4
2,2'3,3',4,4',6-HpCB 171 52663-71-5
2,2',3,3',4,5,5'-HpCB 172 52663-74-8
2,2',3,3',4,5,6-HpCB 173 68194-16-1
2,2',3,3',4,5,6'-HpCB 174 38411-25-5
2,2',3,3',4,5',6-HpCB 175 40186-70-7
2,2',3,3',4,6,6'-HpCB 176 52663-65-7
2,2',3,3',4',5,6-HpCB 177 52663-70-4
2,2',3,3',5,5',6-HpCB 178 52663-67-9 13C12-2,2',3,3',5,5',6-HpCB5 178L 232919-67-4
2,2',3,3',5,6,6'-HpCB 179 52663-64-6
2,2',3,4,4',5,5'-HpCB3 180 35065-29-3 13C12-2,2',3,4,4',5,5'-HpCB 180L 160901-82-6
2,2',3,4,4',5,6-HpCB 181 74472-47-2
2,2',3,4,4',5,6'-HpCB 182 60145-23-5
2,2',3,4,4',5',6-HpCB 183 52663-69-1
2,2',3,4,4',6,6'-HpCB 184 74472-48-3
2,2',3,4,5,5',6-HpCB 185 52712-05-7
2,2',3,4,5,6,6'-HpCB 186 74472-49-4
2,2',3,4',5,5',6-HpCB3 187 52663-68-0
2,2',3,4',5,6,6'-HpCB 188 74487-85-7 13C12-2,2',3,4',5,6,6'-HpCB2 188L 234432-91-8
2,3,3',4,4',5,5'-HpCB6 189 39635-31-9 13C12-2,3,3',4,4',5,5'-HpCB2,7 189L 208263-73-4
96

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2,3,3',4,4',5,6-HpCB 190 41411-64-7
2,3,3',4,4',5',6-HpCB 191 74472-50-7
2,3,3',4,5,5',6-HpCB 192 74472-51-8
2,3,3',4',5,5',6-HpCB 193 69782-91-8
2,2',3,3',4,4',5,5'-OcCB 194 35694-08-7 13C12-2,2',3,3',4,4',5,5'-OcCB4 194L 208263-74-5
2,2',3,3',4,4',5,6-OcCB3 195 52663-78-2
2,2',3,3',4,4',5,6'-OcCB 196 42740-50-1
2,2',3,3',4,4',6,6'-OcCB 197 33091-17-7
2,2',3,3',4,5,5',6-OcCB 198 68194-17-2
2,2',3,3',4,5,5',6'-OcCB 199 52663-75-9
2,2',3,3',4,5,6,6'-OcCB 200 52663-73-7
2,2',3,3',4,5',6,6'-OcCB 201 40186-71-8
2,2',3,3',5,5',6,6'-OcCB 202 2136-99-4 13C12-2,2',3,3',5,5',6,6'-OcCB2 202L 105600-26-8
2,2',3,4,4',5,5',6-OcCB 203 52663-76-0
2,2',3,4,4',5,6,6'-OcCB 204 74472-52-9
2,3,3',4,4',5,5',6-OcCB 205 74472-53-0 13C12-2,3,3',4,4',5,5',6-OcCB2 205L 234446-64-1
2,2',3,3',4,4',5,5',6-NoCB3 206 40186-72-9
13C12-2,2',3,3',4,4',5,5',6-
NoCB2
206L 208263-75-6
2,2',3,3',4,4',5,6,6'-NoCB 207 52663-79-3
2,2',3,3',4,5,5',6,6'-NoCB 208 52663-77-1
13C12-2,2',3,3',4,5,5',6,6'-
NoCB2
208L 234432-92-9
DeCB3 209 2051-24-3 C12-DeCB2 209L 105600-27-9
1. Abreviaciones para los niveles de cloración:
MoCB monoclorobifenilos
DiCB diclorobifenilos
TrCB triclorobifenilos
TeCB tetraclorobifenilos
PeCB pentaclorobifenilos
HxCB hexaclorobifenilos
HpCB heptaclorobifenilos
OcCB octaclorobifenilos
NoCB nonaclorobifenilos
DeCB decaclorobifenilos
2. Congénere marcado que define el Nivel de cloración
3. Congénere de interés para la National Oceanic and Atmospheric Administration (NOAA)
4. Estándar interno marcado
5. Estándar marcado de limpieza
6. Congénere considerado tóxico para la OMS
7. Congénere marcado de los considerados tóxicos por la OMS
97

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TABLA 4 COMPOSICIÓN DE CONGÉNERES INDIVIDUALES EN SOLUCIONES DE CALIBRACIÓN
COMERCIALES1
Identificación de la Solución de Accu-Standard
A2 B2 C2 D2 E2
No. de parte de Accu-Standard
M-1668A-1 M-1668A-2 M-1668A-3 M-1668A-4 M-1668A-5
2 7 13 25 1
10 5 17 21 3
9 12 29 69 4
6 18 20 47 15
8 24 46 42 19
14 23 65 64 16
11 28 59 70 37
30 22 40 102 54
27 39 67 97 43
32 53 76 115 44
34 51 80 123 74
26 73 93 134 56
31 48 84 131 77
33 62 101 163 104
36 71 112 180 98
38 68 86 125
35 58 116 110
50 61 107 126
45 55 154 155
52 60 147 138
49 94 140 169
75 100 146 188
41 91 141 189
72 121 164 202
57 90 158 205
63 99 182 208
66 109 174 206
79 117 173 209
78 111 193
81 108
96 118
103 114
95 150
88 145
89 135
92 149
113 139
83 132
119 165
87 168
85 137
82 160
120 128
124 162
106 157
122 184
105 186
98

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127 187
152 185
136 181
148 192
151 197
144 199
143
142
133
161
153
130
129
166
159
167
156
179
176
178
175
183
177
171
172
191
170
190
200
204
201
198
196
195
194
207
203
83 54
No. Total de congéneres
29 15 28
1. Congéneres presentes en cada solución estándar se listan en orden de elusión para cada nivel de cloración identificada
por su número IUPAC.
99

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TABLA 5 LÍMITES DE DETECCIÓN ESTIMADOS Y LÍMITES PRÁCTICOS DE CUANTIFICACIÓN
ESTIMADOS
Congénere No.
IUPAC
LDM = Limite de detección estimado
LPC = Limite Práctico de Cuantificación
USEPA METHOD 1668 MOD.
Límites de Detección por Matriz
Agua (pg/L) Sólidos (ng/kg)
Extractos
(pg/μL)
LDM LPC LDM LPC LPC
1 820 2000 80 200 100
5 110 500 100 500 200
31 1520 5000 150 500 200
52 1910 5000 190 500 200
44 1950 5000 190 500 200
66 1620 5000 160 500 200
81 1770 5000 180 500 200
77 1690 5000 170 500 200
101 2410 10000 240 1000 500
87 1490 5000 150 500 200
110 2430 10000 240 1000 500
118 1930 5000 190 500 200
114 1200 5000 120 500 200
105 1090 2000 110 200 100
126 1360 5000 140 500 200
151 1120 5000 110 500 200
141 930 2000 90 200 100
138 2110 5000 210 500 200
167 1150 5000 110 500 200
156 1320 5000 130 500 200
183 4010 10000 400 1000 500
180 1360 5000 140 500 200
170 1620 5000 160 500 200
206 4510 10000 450 1000 500
100

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3.3 HIDROCARBUROS POLIAROMÁTICOS (HPAs), CLORDECON Y
PENTACLOROBENCENO
El principio de este método se basa en la extracción, purificación y concentración del extracto
purificado con objeto de la medición de los HPAs, Clordecone y Pentaclorobenceno presentes en
el extracto orgánico purificado de la muestra inyectando una alícuota de 2 µL en un cromatógrafo
de gases acoplado a un detector selectivo de masas que trabaja simultáneamente en los modos
SIM y SCAN. La identificación de los analitos se realiza por la comparación de los espectros de
masas con los de la biblioteca estandarizada de la estación de datos, las abundancias relativas de
los iones cualificadores y con los tiempos de retención de los estándares certificados, su
cuantificación se realiza por medio del método de estándar interno.
NOTA: Este método está basado en su desempeño, se permite que el laboratorio omita cualquier
paso o modifique cualquier procedimiento, suponiendo que todos los requerimientos de
desempeño especificados se cumplan. Al laboratorio no se le permite omitir cualquier punto de
control de calidad, ni los parámetros que se especifiquen como “NO MODIFICABLES”. Los
términos “debe”, “puede” y “deberá” son mencionados a través de los métodos y están destinados
a ilustrar la importancia de los procedimientos para producir datos verificables en los rangos de
trabajo del método. El término “debe” es usado para indicar que los desarrolladores de este
método encontraron ciertos procedimientos esenciales en muestras analizadas exitosamente; de
todas maneras, estos procedimientos pueden ser modificados u omitidos si el laboratorio puede
demostrar fehacientemente que la calidad de los resultados no resulta afectada.
PARÁMETROS NO MODIFICABLES
Cromatógrafo de Gases (Columnas Capilares).
Detector Selectivo de Masas con capacidad de trabajo simultáneo en modos SIM y SCAN.
3.3.1 Aplicación y Alcances
3.3.1.1 Propósito.- Este método se aplica para la identificación y cuantificación de los 16
HPAs, está diseñado para ser altamente sensible y específico.
3.3.1.2 Analitos.- Los Hidrocarburos Poliaromáticos que pueden ser determinados por este
método son:
Acenafteno
Acenaftileno
Antraceno
Benzo(a)antraceno
Benzo(a)pireno
Benzo(b)fluoranteno
Benzo(ghi)perileno
Benzo(k)fluoranteno
Criseno
Dibenzo(a,h)antraceno
Fenantreno
101

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Fluoranteno
Fluoreno
Indeno(1,2,3-cd)pireno
Naftaleno
Pireno
Clordecone
Pentaclorobenceno
3.3.1.3 Matrices – Este método es aplicable para el análisis de los Hidrocarburos
Poliaromáticos mencionados en el inciso anterior en las siguientes matrices ambientales:
Aire Ambiente
Suelos
Sedimentos Marinos
Sedimentos Epicontinentales
Aguas Marinas
Aguas Estaurinas y de Lagunas Costeras
Aguas Superficiales Epicontinentales
Aguas Subterráneas
Alimentos procesados, sin procesar, organismos y tejidos animales
Sangre
Leche Materna
3.3.1.4 Limitaciones – Los límites de detección en las muestras reales dependerán de las
interferencias presentes en las mismas, por lo que es muy importante tener en cuenta que pueden
variar hasta en magnitudes de 10 a 1,000 veces (factores de concentración de las muestras e
interferencias presentes en el extracto purificado).
Este método está restringido para utilizarse sólo bajo la supervisión de analistas expertos en el uso de
cromatografía de gases y en la interpretación de sus resultados. Cada analista debe demostrar la
habilidad para generar resultados aceptables con este método.
3.3.2 Resumen
AIRE AMBIENTE
Se utiliza un muestreador alto volumen modificado (Hi-Vol), con un filtro de fibra de vidrio y
un cartucho absorbente con espuma de poliuretano (PUF). El muestreo se lleva a cabo a
una flujo de ~ 200-280 L/min durante 24 h.
El filtro y el cartucho PUF se colocan en contenedores limpios y sellados, para luego
trasladarse al laboratorio para su análisis. Los HPAs se recuperan por extracción Soxhlet
con éter al 5% en hexano.
El volumen de los extractos se reduce con la técnica Kuderna-Danish (K-D) y se someten a
una limpieza con ácido sulfúrico diseñado específicamente para este tipo de análisis.
Los extractos se someten a cromatografía de gases con detector selectivo de masas
(GC/MSD) en el modo SIM y SCAN simultáneamente para la detección y cuantificación de
HPAs, Clordecone y Pentaclorobenceno.
102

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Generalmente se alcanzan límites de detección

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se evapora el disolvente y se pasa a un vial para su análisis por GC/MS SIM/SCAN
simultáneamente.
LECHE MATERNA
Una alícuota de 10g de leche se extrae con una mezcla de metanol, cloruro de sodio y
cloroformo.
La limpieza de los extractos se lleva a cabo por cromatografía de exclusión molecular.
Los compuestos se determinan por GC-MSD en modo SIM y SCAN simultáneamente.
3.3.3 Procedimientos de Extracción y Purificación de muestras
Antes de utilizar cualquier procedimiento de limpieza, el analista debe procesar una serie de estándares de
calibración por medio del procedimiento para validar los patrones de elusión y la ausencia de interferencias de los
reactivos.
3.3.3.1 Interferencias generales
Las interferencias del método pueden originarse por la presencia de contaminantes en los
solventes, reactivos, material de vidrio o cualquier otro material durante el procesamiento
de la muestra (contaminación cruzada).
El material de vidrio debe lavarse escrupulosamente. Lave el material de vidrio
enjuagándolo profundamente con el último disolvente utilizado en él. Después lávelo con
agua caliente y detergente y enjuáguelo con agua corriente y grado reactivo. Escúrralo,
séquelo y enjuáguelo con acetona. Después de secarlo y enfriarlo, selle el material de vidrio
y guárdelo en un ambiente limpio para evitar acumulación de polvo u otros contaminantes.
Guarde el material invertido o tapado con papel aluminio.
El uso de reactivos y disolventes de alta pureza ayuda a eliminar los problemas de
interferencias. Puede ser necesario purificar los disolventes por destilación en material de
vidrio. PRECAUCIÓN: Al purificar un disolvente se eliminan los estabilizadores, lo que
puede hacerlo peligroso. También pueden eliminarse conservadores, reduciéndose su vida
de anaquel.
Puede existir interferencia cuando se analiza una muestra con concentraciones bajas de los
analitos después de una muestra con concentraciones altas. Para evitar esto, después de
una muestra con concentraciones altas, debe inyectarse una o varias veces hexano para
asegurar que se obtengan valores precisos en la siguiente muestra.
Es importante que las muestras y los estándares de trabajo se encuentren en el mismo
disolvente. El disolvente de trabajo para los estándares debe ser el mismo que el disolvente
final utilizado en la preparación de la muestra. De no ser este el caso, puede afectarse la
comparación cromatográfica entre los estándares y la muestra.
3.3.3.2 Seguridad general
La carcinogenidad y toxicidad de los químicos utilizados en este método no ha sido
determinadas con precisión; de todas maneras; cada sustancia química debe ser tratada
como potencial peligro a la salud. La exposición a estas sustancias químicas debe ser
reducida al menor nivel posible. Se sugiere que el laboratorio realice monitoreos de higiene
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ocupacional de cada reactivo a los que pueda estar expuesto el analista y que dichos
resultados estén disponibles para los analistas.
PRECAUCIÓN: Al purificar un disolvente se eliminan estabilizadores, lo que puede hacerlo
peligroso.
Este método puede no mencionar todas las precauciones de seguridad asociadas con su
uso. El laboratorio es responsable de mantener un ambiente de trabajo seguro y un archivo
de las normas de seguridad respecto a la exposición y manejo seguro de las sustancias
químicas especificadas en este método. Debe tenerse un archivo de referencias de las
hojas de información de seguridad el cual debe estar disponible a todo el personal
involucrado en estos análisis.
3.3.3.3 Matrices
3.3.3.3.1 Aire Ambiente
3.3.3.3.1.1Equipo y Materiales
3.3.3.3.1.1.1 Equipos
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.3.3.3.1.2 Reactivos y Materiales de Referencia
3.3.3.3.1.2.1 Reactivos
Silica Gel malla 100/120 (Davison Chemical grado 923 o equivalente),
active la sílica gel durante 16 horas a 130ºC antes de su uso.
Ciclohexano grado pesticida o equivalente
Pentano grado pesticida o equivalente
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.3.3.3.1.2.2 Materiales de referencia
3.3.3.3.1.2.2.1 Estándares de calibración de HPAs, Pentaclorobenceno y Clordecone
Los HPAs son los más comunes y se pueden conseguir como mezclas certificadas. El
pentaclorobenceno y Clordecone se pueden encontrar puro o en disoluciones
certificadas.
Compuesto CAS
Acenafteno 83-32-9
Acenaftileno 208-96-8
Antraceno 120-12-7
Benzo(a)antraceno 56-55-3
Benzo(a)pireno 50-32-8
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Benzo(b)fluoranteno 200-99-2
Benzo(ghi)perileno 191-24-2
Benzo(k)fluoranteno 207-08-9
Criseno 218-01-9
Dibenzo(a,h)antraceno 53-70-3
Fenantreno 85-07-8
Fluoranteno 206-44-0
Fluoreno 86-73-7
Indeno(1,2,3-cd)pireno 193-39-5
Naftaleno 91-20-3
Pireno 129-00-0
Pentaclorobenceno 608-93-5
Clordecone (Kepone) 143-50-0
Los estándares deben utilizarse para preparar un mínimo de cinco
concentraciones por dilución con hexano. Las concentraciones deben
corresponder al intervalo esperado de concentraciones que se
encontrarán en las muestras reales y deben ajustarse al rango linear del
detector.
Estándares internos
Se deben utilizar como estándares internos: Naftaleno-d5, Acenfteno-d10,
Fenantreno-d10, Criseno-d12 y Perileno-d12.
Estándares surrogados
Se deben utilizar el como estándar surrogado: p-terfenilo-d14
3.3.3.3.1.3 Procedimiento de Extracción
VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.3.3.3.1.4 Procedimiento de Purificación de Muestras
La silica gel (ácido silícico) es un adsorbente de silica regenerable con propiedades
ligeramente ácidas se puede activar con calentamiento o desactivar con la adición
de agua.
Al extracto obtenido en la extracción se debe intercambiar el hexano por
ciclohexano; para ello en un micro KD agregue 4 mL de ciclohexano y concentre a
1-2 mL (NOTA: No deje que el volumen de ciclohexano disminuya a menos de 1 mL
o se perderán los HPAs de bajo peso molecular).
Prepare una masa con 10 g de silica gel y cloruro de metileno y colóquelo en la
columna, asiente con algunos pequeños golpes el relleno y agregue 1 o 2 cm de
sulfato de sodio anhidro en la parte superior de la columna.
Pre-eluya la columna con 40 mL de pentano a un flujo de 2 mL/min. Descarte el
eluato y justo antes de que quede expuesta la capa de sulfato de sodio, transfiera
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cuantitativamente el extracto de la muestra a la columna, enjuague el tubo del
extracto con 2 mL de ciclohexano.
Antes de que quede expuesta la capa de sulfato de sodio, lave la columna con 25
mL de pentano, deseche el eluato.
Eluya la columna con 25 mL de cloruro de metileno/pentano (2:3 v/v) y colecte el
eluato en un matraz de 50 mL.
Concentre el eluato identificado en el concentrador a 1 mL (NOTA: No deje que el
volumen de solvente disminuya a menos de 1 mL o se perderán los HPAs de bajo
peso molecular).
3.3.3.3.2 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras, superficiales
epicontinentales y subterráneas)
3.3.3.3.2.1 Equipo y Materiales
VER PARA AIRE AMBIENTE Y PLAGUICIDAS CLORADOS
3.3.3.3.2.2 Reactivos y Materiales de Referencia
VER REACTIVOS PARA PLAGUICIDAS CLORADOS Y EN 3.3.3.3.1.2.2
3.3.3.3.2.3 Procedimientos de Extracción
VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.3.3.3.2.4 Procedimientos de Purificación de Muestras
3.3.3.3.3 Suelos
3.3.3.3.3.1 Equipo y Materiales
VER PROCEDIMIENTO EN 3.3.3.3.1.4
VER PARA AIRE AMBIENTE Y PLAGUICIDAD CLORADOS
3.3.3.3.3.2 Reactivos y Materiales de Referencia
VER REACTIVOS PARA PLAGUICIDAS CLORADOS Y EN 3.3.3.3.1.2.2
3.3.3.3.3.3 Procedimientos de Extracción
VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.3.3.3.3.4 Procedimientos de Purificación de Muestras
VER PROCEDIMIENTO EN 3.3.3.3.1.4
3.3.3.3.4 Sedimentos (marinos y epicontinentales)
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3.3.3.3.4.1 Equipo y Materiales
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.3.3.3.4.2 Reactivos y Materiales de Referencia
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.3.3.3.4.3 Procedimientos de Extracción
VER PARA PLAGUICIDAS CLORADOS
3.3.3.3.4.4 Procedimientos de Purificación de Muestras
VER PROCEDIMIENTO EN 3.3.3.3.1.4
3.3.3.3.5 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos, y Tejidos
animales,
3.3.3.3.5.1 Tejidos y alimentos con grasa (≥ 2% GRASA)
3.3.3.3.5.1.1 LECHE
VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final es
de 1 mL)
3.3.3.3.5.1.2 QUESO, YEMA DE HUEVO O HUEVO
DESHIDRATADO
VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final es
de 1 mL)
3.3.3.3.5.1.3 MANTEQUILLA
VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final es
de 1 mL)
3.3.3.3.5.1.4 HIGADO
Se toman 10 g de muestra y se adicionan de 20 a 50 g de sulfato de
sodio anhidro, se mezcla perfectamente hasta que se tenga la
apariencia de un polvo uniforme sin la presencia de grumos.
El brazo sonicador debe lavarse con agua, metanol y cloruro de
metileno por 3 minutos en ese orden.
A la muestra se le adiciona 100 mL de cloruro de metileno, colocar la
muestra en el brazo sonicador y extraer durante 3 minutos.
El extracto de la muestra se decanta y se filtra atraves de un embudo
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que contiene 10 g de sulfato de sodio (previamente humedecido con
cloruro de metileno).
La extracción se repite 2 veces mas con alicuatas de 100 mL de
cloruro de metileno durante 3 minutos. Los extractos obtenidos se
hacen pasar por el embudo con sulfato de sodio y se mezclan.
Se lleva a cabo una reduccion de volumen en un matraz KD a un
volumen de aproximadamente 2mL a una temperatura de 70ºC, en
ese momento se le adiciona 2 mL de hexano, seguir concentrando
hasta un volumen aparente de 2 mL.
3.3.3.5.1.4.1 Procedimeinto de purificación de muestras
Una columna cromatografica de 30 cm x 1,1 cm ID se enjuaga tres
veces con aproximadamente 5 mL de metanol, seguido de 3
enjuagues de aproximadamente 5 mL de cloruro de metileno. Se
taponea la punta de la columna con una pequeña cantidad de fibra de
vidrio y se adiciona 30 mL de cloruro de metileno posteriormente se
adiciona 2 cm de arena calcinada (400ºC por 4 horas).
La alumina (oxido de aluminio) grado cromatografico calcinada
(400ºC por 4 horas y a 120ºC antes de su uso) es desactivada con
agua (10 g de alumina se le adiciona 0.1 mL de agua desionizada y
se agita por lo menos 1 hora).
Silica 100/200 (170ºC 24 horas antes de su uso) se desactiva con
agua a 20 g de silica se le adiciona 1 mL de agua desionizada y se
agita por lo menos una hora.
Para la preparación de la columna se adiciona lentamente la alumina
dando ligeros golpes en la columna de vidrio para asegurar su
empacado. A la silica después de su desactivacion se adiciona
cloruro de metileno hasta formar una mezcla homonea tipo gel,
adicionar lentamente e ir drenando el cloruro de metileno.
En la parte superior de la silica se adicionan aproximadamente 2 cm
de sulfato de sodio, se eluye el cloruro de metileno y se adicionan los
2 mL del extracto antes de que se seque el sulfato de sodio. Se hace
pasar una mezcla de pentano-cloruro de metileno 50:50 v/v (200 mL)
y se concentra en KD a un volumen final de 1 mL a 60-65ºC.
3.3.3.3.5.1.5 TEJIDO GRASO
VER PROCEDIMIENTO DE 3.3.3.3.5.1.4
3.3.3.3.5.2 ALIMENTOS CON BAJO CONTENIDO DE GRASA
3.3.3.3.5.2.1 Alta humedad y azucares bajos ( > 75% agua < 5% azucares)
3.3.3.3.5.2.1.1 Lechugas, biota vegetal, etc.
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VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo
final es de 1 mL)
3.3.3.3.5.2.1.2 Huevo entero
VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo
final es de 1 mL)
3.3.3.3.5.2.2 Alta humedad, azucares intermedios ( > 75% agua y 5-15% de
azucares)
3.3.3.3.6 Sangre Humana
VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo
final es de 1 mL)
3.3.3.3.5.2.3 Alta humedad azucares altos ( > 75% agua < 15-30% azucares)
VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo
final es de 1 mL)
3.3.3.3.5.2.4 Alimentos secos con baja humedad (≤ 75% agua)
VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS CLORADOS (aforo final
es de 1 mL)
3.3.3.3.6.1 Equipos y Materiales
Columna de cromatografía 7 mm ID x 200 mm, de 50 mL con llave
Tubos concentradores kuderna de 25 mL
Embudo de separación
Vasos de precipitados
3.3.3.3.6.2 Reactivos y Materiales de Referencia
Los disolventes que requiere el método deben ser de alta pureza, a menos que otra cosa se
indique.
Silica Gel malla 100/120 (Davison Chemical grado 923 o equivalente),
active la sílica gel durante 16 horas a 130ºC antes de su uso.
Diclorometano
Sulfato de sodio
Ciclohexano grado pesticida o equivalente
Pentano grado pesticida o equivalente
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3.3.3.3.6.3 Procedimientos de Extracción
A 5 mL de sangre se le agrega un anticoagulante y se congela hasta su uso.
En un embudo de separación se colocan 5 mL de sangre y se le realizan 3 extracciones
con cloruro de metileno. Los extractos se unen homogenizándolos y posteriormente se
hacen pasar por una columna que tenga 10 cm de sulfato de sodio anhidro y este es
transferido a un Kuderna-Danish, se añaden piedras de ebullición y se concentran los
extractos en un baño maria a una temperatura de 60-65 ºC. hasta que se tenga un
volumen aparente de 1 mL. Después se añaden 4 mL de ciclohexano seguido de una
reducción de volumen de 1-2 mL en el Kuderna-Danish (NOTA: No deje que el volumen
de solvente disminuya a menos de 1 mL o se perderán los HPAs de bajo peso
molecular).
3.3.3.3.6.4 Procedimientos de Purificación de las Muestras
Prepare una masa con 10 g de silica gel y cloruro de metileno y colóquelo en la
columna, asiente con algunos pequeños golpes el relleno y agregue 1 o 2 cm de sulfato
de sodio anhidro en la parte superior de la columna.
Pre-eluya la columna con 40 mL de pentano a un flujo de 2 mL/min. Descarte el eluato
y justo antes de que quede expuesta la capa de sulfato de sodio, transfiera
cuantitativamente el extracto de la muestra a la columna, enjuague el tubo del extracto
con 2 mL de ciclohexano.
Antes de que quede expuesta la capa de sulfato de sodio, lave la columna con 25 mL
de pentano, deseche el eluato.
Eluya la columna con 25 mL de cloruro de metileno/pentano (2:3 v/v) y colecte el eluato
en un matraz de 50 mL.
Concentre el eluato identificado en el concentrador a 1 mL (NOTA: No deje que el
volumen de solvente disminuya a menos de 1 mL o se perderán los HPAs de bajo peso
molecular).
3.3.3.3.7 Leche Materna
3.3.3.3.7.1 Equipo y Materiales
Resina Bio-Beads ® S-X3. Se utiliza para la separación de polímeros
lipofílicos y compuestos hidrofóbicos de bajo peso molecular, mediante
cromatografía de permeación en gel.
3.3.3.3.7.2 Reactivos y Materiales de Referencia
Cloruro de sodio grado analítico
Sulfato de sodio anhidro grado analítico
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Agua grado HPLC
Cloruro de metileno grado HPLC
3.3.3.3.7.3 Procedimientos de Extracción
En un embudo de separación se adiciona 10g de leche y la mezcla de estándares
internos, se extrae, una vez con 42mL de CHCl3/CH3OH/NaCl al 0.7% 2:1:0.5 (v/v/v) y
dos veces con 12 mL de CHCl3. Los extractos obtenidos en cada ocasión son
mezclados y tratados con 100mL de una disolución acuosa de NaCl al 0.7%, y
posteriormente se pasan por una columna de sulfato de sodio anhidro.
La fase orgánica se evapora hasta la obtención de la grasas.
3.3.3.3.7.4 Procedimientos de Purificación de las Muestras
Las grasas son disueltas en 4mL de CH2Cl2 y sometidas a cromatografía de exclusión
molecular en una resina Bio-Beads S-X3 utilizando cloruro de metileno como eluyente,
a una velocidad de 5mL/min.
fracción obtenida se evapora en rotavapor hasta un volumen de 5mL y posteriormente
se lleva hasta 100µL bajo una de nitrógeno.
El extracto se analiza por GC/MSD SIM y SCAN simultaneo.
3.3.4 MÉTODO DE IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN INSTRUMENTAL
3.3.4.1 Aplicación y Alcances
3.3.4.1.1 Matrices – Este método es aplicable para el análisis de HPAs, Clordecone y
Pentaclorobenceno en los extractos purificados de aguas naturales, residuales
municipales e industriales, así como suelo, residuos, sedimentos, organismos,
tejidos y alimentos, los extractos y su purificación depende de la matriz analizada,
se deben seguir los procedimientos de extracción y purificación adecuados para
cada matriz.
3.3.4.1.2 Limitaciones – Los límites de detección en las muestras reales dependerán de las
interferencias presentes en las mismas, por lo que es muy importante tener en cuenta que
pueden variar hasta en magnitudes de 10 a 1,000 veces (factores de concentración de las
muestras e interferencias presentes en el extracto purificado).
3.3.4.2 Resumen
Este método está restringido para utilizarse sólo bajo la supervisión de analistas expertos en
el uso de cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas y en la interpretación
de sus resultados. Cada analista debe demostrar la habilidad para generar resultados
aceptables con este método.
El extracto purificado y concentrado se analiza en un Sistema de Cromatografía de Gases acoplado a
espectrometría de masas con la capacidad de trabajar en los modos SIM y SCAN simultáneamente, en caso
de que se detecte algún HAP, Clordecone y Pentaclorobenceno mediante los tiempos de retención (Tr)
coincidentes con los de los estándares respectivos y por el espectro de masas en modo SCAN coincidente con
el de la biblioteca estandarizada del sistema de manejo de datos y con el ion cuantitativo y los 2 iones
cualificadores con sus respectivas áreas proporcionales obtenidas de los estándares de la curva de calibración
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en el modo SIM, se cuantifica mediante el método de estándar interno, en caso de que se cumplan los Tr pero
no exista coincidencia entre las proporciones de los iones cualificadores se debe tomar como tentativa la
identificación, en caso de que no se cumpla con los Tr o con el ion cuantitativo, entonces se trata de algún
pico interferente y no se reportan los resultados como positivos a HPAs, Pentaclorobenceno o Clordecone.
3.3.4.3 Equipos y Materiales
3.3.4.3.1 Equipo
3.3.4.3.2 Materiales
Cromatógrafo de gases – Sistema analítico completo con cromatógrafo de
gases con programación de temperatura para técnica de inyección splitsplitless
con control electrónico de presión (Agilent 7890 o equivalente).
Espectrómetro de masas capaz de realizar barridos de 35 a 500 uma por
segundo o menor, usando una fuente de ionización de impacto electrónico
con energía de 70 electrón volts. El espectrómetro debe ser capaz de
producir una espectro de masas (al inyectar 1 L de la disolución de
decafluorotrifenilfosfina DFTPP), el cual cumpla con los criterios
mencionados en la sección de control de calidad (Agilent 5975 o
equivalente).
Sistema de manejo de datos el cual se encuentra acoplado al GC/MS, Este
sistema debe ser capaz de tener una adquisición y almacenamiento
continuo de todos los espectros de masas generados durante el programa
cromatográfico y poder analizar en modo SCAN y SIM las señales de los
compuestos eluídos de la columna capilar del GC
Balanza analítica con precisión de 0.0001 g.
Columna capilar de sílica fundida HP-5MS (Crosslinked 5% fenil metil
siloxano) de 30 m de longitud, 0.25 mm de diámetro y 0.25 m de película
de espesor o equivalente.
Microjeringa de 10 L, marca Hamilton 701N, No. parte 9301-0021 o
equivalente.
Microjeringa de 25 L, marca Hamilton 702N, No. parte 9301-0022 o
equivalente.
Microjeringa de 500 L, marca Hamilton 750N, No. parte 9301-0034 o
equivalente.
Matraces volumétricos aforados de 1,5 y 10 mL con tapón esmerilado.
Viales de vidrio con tapa de politetrafluoroetileno (PTFE) de rosca marca
Agilent o equivalente.
Insertos de vidrio para puerto de inyección marca Agilent o equivalente.
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Septa color gris para bajo flujo, marca Agilent o equivalente.
O-ring de vespel marca Agilent o equivalente.
3.3.4.4 Reactivos y Materiales de Referencia
3.3.4.4.1 Reactivos y disoluciones
VER PROCEDIMIENTO PARA BIFENILOS POLICLORADOS
3.3.4.4.2 Materiales de referencia
Los patrones pueden ser estándares puros o adquirirse como disoluciones certificadas
(patrones de referencia).
3.3.4.4.2.1 Disoluciones
Disolución patrón (50 mg/L)
A la disolución de los HPAs, Pentaclorobenceno y Clordecone se deben
incluir el Naftaleno-d5, Acenfteno-d10, Fenantreno-d10, Criseno-d12 y
Perileno-d12. como estándares internos y el p-terfenilo-d14 como estándar
surrogado.
Disoluciones de calibración
Prepare 5 niveles como mínimo de diferente concentración de las
disoluciones estándar para cada analito de interés en matraces volumétricos.
Para cada disolución estándar de calibración, adicione una cantidad conocida
de los compuestos a analizar y lleve al aforo con el solvente apropiado. El
punto de concentración más bajo de la curva de calibración debe ser 3 a 10
veces mayor que el valor del LDM. Las otras concentraciones corresponden
al intervalo esperado de las concentraciones encontradas en las muestras
reales o bien estarán definidas por el intervalo lineal del detector.
Estándar de calibración de 0.5 mg/L. En un matraz aforado de 1 ml ponga 10
µL de la solución de mg 50 mg/L y afore a la marca con Hexano. Guarde esta
disolución en viales de 2 mL y rotule con etiqueta que contenga método,
fecha de preparación, concentración, solvente utilizado, persona que lo
preparó.
Estándar de calibración de 1,0 mg/L. En un matraz de 1 mL ponga 20 µL de
la solución de 50 mg/L y afore a la marca con Hexano. Guarde esta disolución
en viales de 2 ml y ponga etiquetelos.
Estándar de calibración de 2,5 mg/L. En un matraz de 1 mL ponga 50 µL de
la solución de 50 mg/L y afore a la marca con hexano, guarde esta disolución
en viales de 2 ml y ponga etiquetelos.
Estándar de calibración de 5 mg/L. En un matraz aforado 1 mL ponga 100 µL
de la solución de 50mg/L y afore a la marca con hexano y guarde esta
disolución en viales de 2 mL y ponga etiquetelos.
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Estándar de calibración de 10 mg/L. En un matraz aforado de 1 ml ponga 200
µL de la solución de 50 mg/L y afore a la marca con hexano, guarde la
disolución en viales de 2mL y ponga etiquetelos.
3.3.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptación y rechazo
Cada laboratorio que utilice este método está obligado a operar un programa de control de
calidad (CC) formal. Los requerimientos mínimos de este programa consisten en una
demostración inicial de la capacidad del laboratorio para cumplir con las especificaciones de
desempeño del método, además realizar análisis continuos de muestras de control de calidad
(MCC) para demostrar la precisión y exactitud continuas y el análisis de blancos. El desempeño
del laboratorio debe compararse con los criterios aquí establecidos, con objeto de determinar si
los resultados de los análisis cumplen con las especificaciones de desempeño del método. El
analista debe hacer una demostración inicial de su habilidad para generar una exactitud y
precisión aceptables por este método.
Cada vez que se realice una modificación al método o que se cambie el analista responsable de
llevar a cabo está determinación, el analista designado debe repetir la validación del método, si el
cambio va a afectar el límite de detección del método (LDM), el laboratorio debe demostrar que el
nuevo LDM determinado es igual o más bajo que el anterior para los analitos de interés.
No se permite el uso de técnicas determinativas alternativas y cambios que degraden la
ejecución del método. Si se utiliza una técnica analítica que no sea la especificada en este
método, dicha técnica debe tener especificaciones iguales o mejores que las de la técnica
descrita en este documento para el analito de interés.
Es obligatorio para el laboratorio mantener los registros de las modificaciones hechas a este
método. Estos registros deben de incluir lo siguiente:
- La justificación por escrito de la necesidad de realizar modificaciones al método para ese
analito.
- Los nombres, títulos, direcciones y número de teléfono de los analistas que ejecutaron los
análisis y modificaciones y el encargado de control de calidad que presenció y verificó los
análisis y sus modificaciones.
- Los resultados de todas las pruebas de CC del método modificado comparadas con el
método original, dichos datos deben de incluir todos los parámetros mencionados en la
sección de desempeño del método.
- La información escrita en las bitácoras tanto del equipo como del analista, deben incluir
los siguientes datos:
Identificación de la muestra
Número del lote analítico en el cual se analizó la muestra
Fecha del análisis
Procedimiento cronológico utilizado
Cantidad de muestra utilizada
Número de muestras de control de calidad analizadas en el lote
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Trazabilidad de las calibraciones de los instrumentos de medición
Registros de bitácoras, en cintas de respaldo o en otros respaldos de
información
Información cruda reportada por los equipos o por los analistas
Evidencia de la aceptación o rechazo de los resultados del lote analítico.
3.3.4.5.1 Verificación del equipo
El criterio de resolución es tal que la profundidad del valle entre dos picos adyacentes en la
mezcla de verificación de resolución debe ser mayor o igual a 60.0% de la altura del pico
más corto.
3.3.4.5.1.1 Verificación de la sintonía del espectrómetro de masas (Autotune)
Realice una autosintonía (autotune y DFTPP tune), siguiendo las actividades
descritas en el instructivo de la calibración del espectrómetro de masas
correspondiente. Esta es una autosintonía (autotune) que hace el instrumento
con respecto a una sustancia de referencia llamada Perfluorotributilamina PFTBA
Si no se cumple con las especificaciones siguientes, determine las causas y corrija
el problema, de acuerdo al instructivo de mantenimiento preventivo del
instrumento, documente las incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el
expediente del sistema GC/MS.
Especificaciones para el autotune
Masa Especificación
69 100%
219 30% respecto a la masa 69
502 1% respecto a la mas 69
3.3.4.5.1.2 Verificación del Sistema (sintonía del MS con DFTPP) de acuerdo a
las especificaciones el método.
Inyecte 2 L de la disolución de DFTPP según las condiciones instrumentales
anexas, y obtenga el espectro de la DFTPP.
Verifique que el espectro cumpla con los siguientes criterios
ION MASICO CRITERIO DE ABUNDANCIA RELATIVA DE IONES
MASICOS DE LA DFTPP
51 30 A 60% de la masa 198
68 < 2% DE LA MASA 69
70 < 2 % DE LA MASA 69
127 40 A 60 % DE LA MASA 198
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199 5 A 9% DE LA MASA 198
275 10 A 30 % DE LA MASA 198
365 > A 1 % DE LA MASA 198
441 PRESENTE PERO MENOR QUE LA MASA 443
442 > 40% DE LA MASA 198
443 17 A 23 % DE LA MASA 442
Si el espectro obtenido de DFTPP no cumpliera con las condiciones anteriores
será necesario que revise los parámetros de sintonía del espectrómetro, repita
nuevamente la sintonía (autotune y DFTPP tune ) e inyecte nuevamente la
disolución de DFTPP.
Verifique que el sistema GC/MS esté libre de contaminación (nivel señal-ruido)
Realice un blanco electrónico bajo las condiciones instrumentales del método. El
blanco electrónico como su nombre lo dice es una corrida electrónica
exclusivamente (sin inyección alguna), y éste debe estar libre de picos o en su
defecto éstos deberán ser no mayores a 5 veces el ruido.
En caso de no cumplir con lo mencionado en la sección anterior, eleve las
temperaturas tanto de la columna a 300 ºC, del puerto de inyección a 280 ºC y
del detector a 300 ºC, mantenga el sistema bajo éstas condiciones de
temperatura por 30 min y realice nuevamente el blanco electrónico. En caso de
persistir el problema lleve a cabo las acciones de limpieza del instrumento
mencionadas en el instructivo de mantenimiento preventivo correspondiente.
Verifique que los flujo de gases y condiciones cromatográficas sean las
adecuadas, según se menciona posteriormente.
3.3.4.5.1.3 Verificación del Funcionamiento del Sistema GC/MS (SPCCs)
De la misma corrida del punto del DFTTP tune, verifique la degradación del DDT
(compuesto incluido en la disolución SPCCs) a DDE y DDD, la suma de las
respuestas del DDE y DDD no deben exceder del 20% con respecto a la
respuesta del DDT.
La bencidina y el pentaclorofenol deben presentarse en sus respuestas normales
(más menos 50%) y como picos bien definidos y sin coleo. Si la degradación es
excesiva y/o dan pobre respuesta cromatográfica, revise el puerto de inyección y
límpielo, cambie el liner, sello dorado y si es necesario que corte los primeros 5 a
10 cm de la columna capilar en el extremo que conecta al puerto de inyección.
3.3.4.5.2 Verificación de la calibración inicial.
La curva de la calibración inicial deberá realizarse inyectando los estándares de calibración
preparados y se considera lineal, si el por ciento de la desviación estándar relativa (%RSD)
de los factores de calibración (CF) es menor o igual al 20%, los cálculos se realizan con las
siguientes ecuaciones:
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Total de àrea
CF
Masa inyectada en nanogramos
SDCF
% RSD x100
CF
Donde:
SDCF= Desviación estándar de los factores de calibración
CF = Promedio de los factores de calibración
La verificación de la calibración inicial puede también efectuarse mediante la regresión por
mínimos cuadrados, en la cual el criterio de aceptación es que el factor de correlación "r 2 "
sea mayor o igual a 0.997.
Si los criterios para el % RSD o r no se cumplen se procede a la revisión del sistema
cromatográfico y la preparación de las disoluciones de calibración.
Posteriormente la curva de calibración será vigente, si el análisis de un punto intermedio de
la curva no presenta una variación de la concentración mayor al 15% y que será calculada
de la siguiente manera.
Diferencia de concentraciones
Donde
CC= concentración calculada
CT= concentración teórica
O si se utiliza el factor de calibración
Diferencia porcentual
CFv CF
CF
% x100
CC CT
CT
% D
x100
Donde:
CFv= Es el factor de calibración de cada compuesto en el estándar de
verificación.
CF = Es la media del factor de calibración del compuesto de la calibración
inicial.
Si el criterio de aceptación para la diferencia porcentual es mayor al 15% se procederá a la
revisión del sistema cromatográfico y a la preparación de la solución estándar utilizada.
3.3.4.5.3 Verificación de contaminación de los reactivos.
Los blancos de reactivos no deben presentar ningún tipo de contaminante al tiempo de
retención de los analitos medidos, por lo que es importante que los reactivos utilizados
cumplan con las especificaciones mencionadas.
Si los resultados de los blancos no cumplen con el criterio mencionado, se debe localizar la fuente de
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contaminación y extraer y analizar nuevamente las muestras asociadas al blanco contaminado
Use también los blancos de reactivos para verificar la contaminación por arrastre de muestras con
altas concentraciones en análisis secuenciales
3.3.4.5.4 Verificación del lote analítico
Por cada lote analítico de muestras analice al menos una muestra sintética de control de
calidad o preferentemente un material de referencia certificado de la misma matriz de las
muestras analizadas en el lote analítico, calcule el % de recuperación de cada analito y
surrogados de la muestra control, los cuales deberán estar dentro del 80 a 120 %R. De no
ser así se debe revisar la preparación de la muestra control y el sistema cromatográfico.
Realizar la corrección necesaria y reanalizar la muestra control, si el problema persiste, se
deben reanalizar todas las muestras del lote analítico.
3.3.4.5.5 Verificación de interferencias de matriz
La verificación de interferencias por parte de la muestra se lleva a cabo mediante las
muestras fortificadas (MF). El laboratorio debe realizar el análisis de muestras fortificadas
(MF) y muestras duplicadas (MD), fortifique una muestra por cada lote analítico o
preferentemente una muestra de cada tipo de matriz analizada en el lote. Las muestras
fortificadas se deben analizar cuando por las características de la muestra se sospeche de
interferencias de matriz o cuando sean parte de un plan de aseguramiento de calidad de un
proyecto.
Efecto de la matriz en el recobro del analito – Muestras fortificadas (MF): Analice las
muestras fortificadas:
Calcule el por ciento de recobro
El % de Recobro debe estar dentro de 70 a 130 %R.
Si los valores no cumplen con lo especificado, el sistema analítico está fuera de
control, determine las causas y corrija el problema, documente las incidencias y
acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del resultado analítico.
Efecto de la matriz en la precisión del analito – Precisión de la matriz duplicada (MD):
Analice una muestra duplicada por cada lote de muestra.
Calcule la diferencia porcentual relativa (DPR) entre la muestra y la duplicada para
cada analito, con la siguiente ecuación:
Donde:
C1
C2
DPR x200
C1
C2
C1= Concentración de la primera muestra
C2= Concentración de la segunda muestra (muestra duplicada)
La DPR de cada analito obtenido entre la muestra y la duplicada debe ser:

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Si los valores no cumplen con los especificados, el sistema analítico está fuera de
control, determine las causas y corrija el problema, documente las incidencias y
acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del resultado analítico.
Repita el análisis del lote asociado con la muestra y la duplicada que provocó que
la prueba del DPR fallara.
3.3.4.5.6 Verificación de la estabilidad de la curva de calibración
En cada lote analizado, si más de 20 muestras van a ser analizadas durante el día,
verifique la curva de calibración analizando un estándar de concentración media del
intervalo de trabajo al principio del lote y después de cada 20 muestras ó 12 horas de
análisis continuo.
Calcule el factor de calibración o la concentración para cada analito del estándar de
concentración media, y el por ciento de la diferencia (%D) con la siguiente ecuación:
Donde:
FC1
FC2
Diferencia porcentual
x100
FC
FC1 = Factor de calibración promedio para cada plaguicida en la curva de
calibración, o la concentración nominal de del estándar de verificación.
FC2 = Factor de calibración promedio para cada plaguicida en el estándar de
concentración media, o la concentración calculada en el estándar de
verificación.
El valor obtenido del % de la diferencia (%D) deberá ser menor al 15%, de no ser así
verifique su vigencia, revisé también el sistema cromatográfico y determine la causa de la
falla y corrija, de no lograr corregir la falla, recalibre nuevamente el sistema y en le caso de
que la falla del estándar de verificación sea en un lote mayor de 20 muestras reanalice las
10 muestras anteriores al estándar de verificación que falló.
3.3.4.5.7 Verificación de estándares surrogados.
Evalúe los datos de recobro de los surrogados de las muestras.
Calcule el % de recuperación de los estándares surrugados en blancos, muestras control,
muestras adicionadas (si se realizaron), muestras duplicadas (si se realizaron) y muestras
reales, con la siguiente ecuación:
C
Re cuperacón
C
1 % R
x100
Donde:
C1=Concentración calculada de surrugados en la muestra.
C2=Concentración nominal del surrugado adicionado a la muestra.
El %R debe estar entre el 70 y el 130 % de recuperación de no ser así verifique la
preparación de la muestra que fallo y el sistema cromatográfico, determine la causa de la
2
1
120

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falla y corrija, de no encontrarla, repita la extracción de la muestra y vuelva a analizar si el
%R esta fuera del rango de aceptación llene hoja de incidencia y reporte como interferencia
de matriz y los resultados obtenidos.
Si los valores no cumplen con los especificados, determine las causas y corrija el problema,
documente las incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del
resultado analítico.
3.3.4.5.8 Verificación de estándares internos.
Compare el área de el o los estándares internos de las muestras con el área promedio de
los estándares internos obtenidos de los puntos de calibración, el valor obtenido en el o los
estándares internos de la muestra no deben ser menores a 50% ni mayores a 200% del
valor promedio obtenido en la curva de calibración para cada estándar interno.
Si los valores no cumplen con los especificados, el sistema analítico está fuera de control,
determine las causas y corrija el problema, documente las incidencias y acciones
correctivas e inclúyalas en el expediente del resultado analítico.
3.3.4.5.9 Control de Calidad Estadístico – En esta sección se especifica como debe
realizarse el control de calidad estadístico obligatorio para este método:
3.3.4.5.9.1 Preparación de las Muestra de Control de Calidad (MCC) – Prepare las
MCC de la siguiente forma:
Se deberá preparar la MCC de una fuente diferente a la utilizada en la curva de
calibración.
Prepare una disolución a una concentración que corresponda al rango de trabajo
del método.
.
NOTA: Se recomienda que el valor de las soluciones de MCC no sea conocido por
el analista con el objeto de asegurar la veracidad de la medición
3.3.4.5.9.2 Gráficas de Control de Exactitud – El laboratorio debe elaborar y
mantener actualizadas las gráficas de control de exactitud para cada lote analizado
a partir de la demostración inicial de desempeño.
Cada valor de exactitud obtenido de las MCC de cada lote analizado deberá graficarse y
deberá estar dentro de los límites de control superior e inferior ( 3s).
Si un valor de exactitud es mayor a 3s, deberán rechazarse todos los resultados del lote
analítico, determine las causas y corrija los errores, documente adecuadamente las
incidencias y acciones correctivas, deberá repetirse el análisis del lote en cuestión.
3.3.4.5.9.3 Gráficas de Control de Precisión – El laboratorio debe elaborar y
mantener actualizadas las gráficas de control de precisión para cada lote analizado
a partir de la demostración inicial de desempeño
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Determine los límites de control de la siguiente forma:
Límite Superior de Control (LSC) = 3.27R
Límite Superior de Advertencia (LSA) = 2.51R
Donde:
R = Promedio del DPR
Si un valor de precisión es mayor al LSC, deberán rechazarse todos los resultados
del lote analítico, determine las causas del problema y corrija los errores,
documente adecuadamente las incidencias y acciones correctivas, deberá
repetirse el análisis del lote en cuestión.
3.3.4.5.10 Validación de modificaciones del método o de métodos alternos.
Para validar las modificaciones que se efectúen a este método o para la utilización de
métodos alternos deberá seguirse el siguiente procedimiento:
Si se realizan modificaciones al presente método, deberán validarse.
Si se utiliza un método alterno cuya fuente sea un método estandarizado por alguna
Institución de carácter internacional o reconocida internacionalmente (e. g. ASTM, USEPA,
AOAC, Standard Methods, DIN, OMS Environment Canada, etc.) también deberá validarse
parcialmente.
Si se utiliza algún método no estandarizado, deberá evidenciarse, además de los
parámetros de la validación parcial, los parámetros de Robustez, Reproducibilidad y
Especificidad los cuales solo pueden evaluarse mediante estudios interlaboratorio.
Verifique diariamente el desempeño de todo el sistema analítico utilizando los datos
recolectados de análisis de blancos reactivos, solución verificadora del desempeño del
laboratorio.
Si hay un coleado excesivo de algún analito a comparación de los cromatogramas del
método, éste deberá corregirse. Los problemas de coleado generalmente pueden
rastrearse a sitios activos en la columna cromatográfica, problemas en la instalación de la
columna o mala operación del detector.
Verifique la precisión con réplicas del análisis. Una pobre precisión generalmente puede
deberse a fugas, especialmente en el puerto de inyección. Si el sistema cromatográfico se
está comportando aparentemente bien, pero con baja sensibilidad, puede ser necesario
generar una nueva curva o juego de factores de calibración para verificar las respuestas
bajas antes de buscar la fuente del problema.
3.3.4.5.11 Composición del lote analítico (para cada 25 muestras ó 12 horas de análisis
continuo)
1 Calibración con PFTBA (Autotune)
2 Calibración con PFTBA (DFTPP)
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3 análisis de DFTPP (Tuning Standard Mixture)
4 Blanco electrónico
5 Mezcla de Verificación
6 Blanco de Reactivos
7 Muestra de Control de Calidad 1 (MCC)
8 Muestra real No. 1
9 Muestra real No. 2
10 Muestras reales (hasta 20 o 12 horas de análisis continuo)
11 Muestra fortificada (si se realizo)
12 Muestra fortificada duplicada (si se realizo)
13 Muestra de Verificación de la Calibración Continua.
14 Siguientes 20 muestras reales
3.3.4.5.12 Criterios de Aceptación y Rechazo
Verificación del Equipo
Punto de verificación Criterio
Equipo libre de interferencias (blanco
electrónico)
Autotune
DFTTP tune
Puerto de inyección libre de suciedad y baja
degradación
Verificación de la Calibración Inicial
No deberá presenta picos a cualquier
tiempo de retención
Cumple con especificaciones del
fabricante
Cumple con abundancias
especificadas en el método
Degradación del DDT menor al 15%,
no coleo de Bencidina y PCP
Punto de verificación Criterio
Evaluación del % Diferencia de la concentración
de la Mezcla de Verificación, punto intermedio de
la curva de calibración.
Verificación de Contaminación de Reactivos
Menor al 15%
Punto de verificación Criterio
Blanco de reactivos
Verificación del Proceso Analítico
No deben presentar ningún tipo de
contaminante al tiempo de retención
de los analitos medidos
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Punto de verificación Criterio
Muestra de control de calidad % de Recuperación de 70 / 130
Evaluación de estándares Surrogados % de Recuperación de 70 / 130
Evaluación de muestras adicionadas duplicadas % DSR < 20%
3.3.4.6 Calibración
Verificación de Interferencias de Matriz
Punto de verificación Criterio
Evaluación de muestras adicionadas % de Recuperación 70 / 130
Estabilidad de la Curva de Calibración
Punto de verificación Criterio
Evaluación de la Estándar de Verificación
(Intermedio)
% de diferencia menor al 15%
Se necesitan al menos 5 estándares de calibración. Uno debe contener analitos a una
concentración cercana, pero superior a la del límite práctico de cuantificación para cada analito;
los otros deben estar a concentraciones que cubran el intervalo esperado en las muestras. Por
ejemplo, si el LDM es 0.01µg/L y el LPC es de 0.05 µg/L, se espera que la muestra contenga
concentraciones mayores de 0.05 µg/L.
Una vez establecidas las condiciones de operación inyecte un volumen adecuado (2 L) de cada estándar de
calibración por triplicado y al final realice un promedio de las tres curvas y agréguelo a la tabla de
calibración del método.
Si la DSR de cada HAP es 20%, entonces la respuesta del instrumento es considerada lineal y el
factor de calibración promedio FC puede utilizarse para la cuantificación de los resultados de las
muestras. Si la DSR es mayor que 20%, entonces no puede asumirse linealidad y se debe repetir la
curva de calibración.
Si se utiliza regresión lineal por mínimos cuadrados, deberá obtener el factor de correlación “r 2 ” para
cada analito, el cual deberá ser mayor o igual a 0.997 si “r” es menor a este valor, la curva de
calibración no es lineal y deberá verificarse la preparación de los estándares de calibración y el
sistema cromatográfico y repetir la calibración.
3.3.4.6.1 Calibración por Estándar Interno:
El analista debe seleccionar uno o más estándares internos que sean similares en
comportamiento analítico a los compuestos de interés. El analista debe además
demostrar que la medición del estándar interno no es afectada por el método o
interferencias de la matriz.
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Donde:
3.3.4.7 Procedimiento Analítico
Prepare los estándares de calibración a un mínimo de cinco concentraciones para
cada analito de interés por adición de volúmenes. Para cada estándar de calibración,
adicione una cantidad conocida constante de uno o más estándares internos y afore
con un solvente apropiado. Uno de los estándares debe estar a una concentración
cercana, pero por arriba, del LPC. Las otras concentraciones deben corresponder al
rango de trabajo.
Inyecte cada estándar de calibración. Tabule la altura del pico o el área de respuesta
contra la concentración de cada compuesto y el estándar interno. Calcule el factor de
respuesta (RF) para cada compuesto como sigue:
As*
Cis
RF
Ais*
Cs
As = Respuesta para el analito que será medido.
Ais = Respuesta del estándar interno.
Cis = Concentración del estándar interno, µg/L.
Cs = Concentración del analito a ser medido, µg/L.
Si el valor RF sobre el rango de trabajo es constante (< 20% RSD), el RF puede
usarse para cálculos. Alternativamente, los resultados pueden usarse para graficar una
curva de calibración de la relación de respuesta, As/Ais contra RF.
3.3.4.7.1 Análisis de los extractos de las muestras
Condiciones cromatográficas:
Gas acarreador Helio
Temperatura inicial 50 °C
Tiempo inicial 3 min
Programa 1 8ºC/min
Temperatura final 1 180ºC
Programa 2 15ºC/min
Temperatura final 2 300ºC 6 minutos
Temperatura del inyector 250ºC
Temperatura del detector 300ºC
Modo splitless 0.3 min
Flujo de split 20 mL/min
Purga de septa 2 mL/min
Adicione un volumen de la mezcla de estándares internos, de manera que la concentración
de estos en el vial sea igual a la concentración que se utilizo en la preparación de la curva
de calibración.
Elabore la secuencia de análisis de acuerdo a lo indicado en el punto de composición del
lote analítico.
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Inicie el análisis.
Inyecte un volumen de 2 L del extracto de la muestra o estándar en el cromatógrafo de
gases. Registre el volumen final del extracto.
Verifique que se cumple con lo especificado en el inciso de control de calidad y criterios de
aceptación y rechazo.
Si la respuesta de cualquier ion cuantitativo excede la respuesta del intervalo de
calibración, diluya el extracto y reanalice.
3.3.4.7.2 Identificación de los analitos
La determinación cualitativa de cada compuesto determinado por este método está basada
en la comparación del tiempo de retención y de los espectros de masas de las muestras,
con los tiempos y iones característicos de los espectros de masas de los estándares de
referencia en modo SCAN. Los espectros de masas de referencia en modo SIM están
definidos por tres iones de mayor intensidad relativa (mayor al 30% de intensidad). Los
compuestos son identificados como presentes cuando cumplen con los siguientes criterios:
El tiempo de retención relativo TRR del compuesto detectado es 0.5 unidades del TRR del
estándar de referencia.
La intensidad relativa de los iones cualificadores en modo SIM se encuentren dentro del
30% de las intensidades relativas de estos iones en el espectro de referencia (ejemplo:
para un ion con abundancia del 50% en el espectro de referencia, la abundancia en el
espectro de la muestra debe encontrarse en el intervalo de 20% y 80%)
Los iones que estén presentes en el espectro de la muestra y que no estén en el espectro
del estándar deben ser revisados cuidadosamente, ya que puede tratarse de contaminación
de fondo o coelusión de otros compuestos.
Si hay iones que estén presentes en el espectro del estándar y no estén presentes en la
muestra, debe someterlo a revisión ya que éstos pueden haberse perdido por posibles
sustracciones en el momento de limpiar los espectros
Para muestras que contienen componentes que no están asociados con los estándares de
calibración, realice una búsqueda por librería para obtener una identificación y a partir de
los estándares internos, obtener una concentración estimada.
3.3.4.7.3 Cálculos
AIRE AMBIENTE
1.1.5. VER PARA PLAGUICIDAS ORGANOCLORADOS
AGUA
SUELOS Y SEDIMENTOS
VER PARA PLAGUICIDAS ORGANOCLORADOS
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1.1.6. VER PARA PLAGUICIDAS ORGANOCLORADOS
TEJIDOS, ORGANISMOS, ALIMENTOS PROCESADOS Y SIN PROCESAR
1.1.7. VER PARA PLAGUICIDAS ORGANOCLORADOS
1.1.8. 3.3.4.8 Desempeño del Método
Los datos son los del método de referencia y los de un laboratorio nacional con experiencia.
3.3.4.8.1 Límite de Detección: Ver Tablas 3 y 4.
3.3.4.8.2 Límite Práctico de Cuantificación: Ver Tablas 3 y 4
3.3.4.8.3 Intervalo de Trabajo: Ver Tablas 3 y 4
3.3.4.8.4 Precisión del Método: Ver Tablas 3 y 4
3.3.4.8.5 Exactitud del Método: Ver Tablas 3 y 4
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3.3.4.9 Tablas y Figuras
TABLA 1
MASAS DE LOS IONES PRIMARIOS Y SECUNDARIOS DE LOS
COMPUESTOS ANALIZADOS
Parámetro
Ion principal del
espectro de
masas
Iones secundarios
del espectro de
masas (SIM)
Naftaleno d-5 136 108,54
Naftaleno 128 129,127
Acenafteno d-10 164 162,160
2-Fluorobifenilo 172 171,170
Acenaftileno 152 151,153
Acenafteno 153 154,152
Fluoreno 166 165
Fenantreno d-10 188 187,184
Fenantreno 178 176,179
Antraceno 178 176,179
Fluoranteno 202 200,203
Criseno d-10 240 236,120
Pireno 202 200,203
p-Terfenilo d-14 244 243,245
Benzo (a) antraceno 228 226,229
Criseno 228 226,229
Pireno d-12 264 260,132
Benzo (b) fluoranteno 252 250,253
Benzo (k) fluoranteno 252 250,253
Benzo (a) pireno 252 250,253
Indeno (1, 2, 3cd)pireno 276 138,277
Dibenzo (a, h) perileno 278 276,279
Benzo (g, h, i) perileno 276 138,277
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Naftaleno
Fenatreno
Antraceno
Fluorantreno
Acenaftileno
Fluoreno
TABLA 2
ESTANDARES INTERNOS ASIGNADOS PARA LA
CUANTIFICACION DE LOS ANALITOS
Pireno
p-Terfenilo d-14
Benzo (a) antraceno
Criseno
Benzo (b) fluoranteno
Benzo (k) fluoranteno
Benzo (a) pireno
Indeno (1, 2, 3cd) pireno
Dibenzo (a, h) antraceno
Benzo (g, h, i)perileno
NAFTALENO d-5
FENANTRENO d-10
ACENAFTENO d10
CRISENO d-12
PIRENO d-12
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TABLA 3 DATOS DE LA VALIDACIÓN DEL MÉTODO EN UN LABORATORIO MEXICANO
EN AGUA
METODO FUENTE: EPA 8270D 1998
TECNICA: HRGC/MS
PARÁMETRO
LDM
METODO
FUENTE
****
INTERVALO
DE TRABAJO
DEL MÉTODO
ABC
VALIDADO
Unidades µg/L µg/L µg/L µg/L % % %R %R
Naftaleno 1.0 0.1-25 0.025 0.025 0.074
Datos de Laboratorios ABC Química Investigación y Análisis S.A. de C.V.
VALIDACIÓN DE MÉTODO
LDM
OBTENIDO
LDM
METODO
ABC
VALIDADO
LPC
METODO
ABC
VALIDADO
Acenaftileno 1.0 0.1-25 0.017 0.017 0.052
Acenafteno 1.0 0.1-25 0.011 0.011 0.033
Fluoreno 1.0 0.1-25 0.015 0.015 0.046
Fenantreno 1.0 0.1-25 0.014 0.014 0.042
Antraceno 1.0 0.1-25 0.013 0.013 0.038
Fluoranteno 1.0 0.25-25 0.012 0.012 0.036
Pireno 1.0 0.25-25 0.023 0.023 0.069
Benzo(a)antraceno 1.0 0.1-25 0.028 0.028 0.085
Criseno 1.0 0.25-25 0.024 0.024 0.072
Benzo(b)fluoranteno 1.0 0.1-25 0.025 0.025 0.076
Benzo(k)fluoranteno 1.0 0.25-25 0.020 0.020 0.059
Benzo(a)pireno 1.0 0.1-25 0.027 0.027 0.080
Indeno(1,2,3cd)pireno 1.0 0.25-25 0.020 0.020 0.061
Dibenzo(a,h)antraceno 1.0 0.25-25 0.016 0.016 0.047
Benzo(g,h,i)perileno 1.0 0.25-25 0.014 0.014 0.042
PRECISION
OBTENIDA
CRITERIO DE
PRECISION EXACTITUD
DEL METODO OBTENIDA
FUENTE
2.18

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TABLA 4 DATOS DE LA VALIDACIÓN DEL MÉTODO EN UN LABORATORIO MEXICANO
EN AGUA
METODO FUENTE: EPA 8270D 1998 MATRIZ: SUELO
TECNICA: GC/MS
PARÁMETRO
INTERVALO
DE TRABAJO
DEL MÉTODO
VALIDADO
Unidades mg/Kg mg/Kg mg/Kg % % %R %R
Naftaleno 0.02-5 0.0049 0.015
Datos de Laboratorios ABC Química Investigación y Análisis S.A. de C.V.
VALIDACIÓN DE MÉTODO
LDM
OBTENIDO
LPC
METODO
ABC
VALIDADO
Acenaftileno 0.02-5 0.0035 0.010
Acenafteno 0.02-5 0.0022 0.007
4-Nitrofenol 0.05-5 0.0056 0.017
Fluoreno 0.02-5 0.0031 0.009
Fenantreno 0.02-5 0.0028 0.008
Antraceno 0.02-5 0.0026 0.008
Fluoranteno 0.05-5 0.0024 0.007
Pireno 0.05-5 0.0046 0.014
Bencidina 0.05-5 0.0091 0.027
Benzo(a)antraceno 0.02-5 0.0057 0.017
Criseno 0.05-5 0.0048 0.014
Benzo(b)fluoranteno 0.02-5 0.0050 0.015
Benzo(k)fluoranteno 0.05-5 0.0039 0.012
Benzo(a)pireno 0.02-5 0.0054 0.016
Indeno(1,2,3cd)pireno 0.05-5 0.0041 0.012
Dibenzo(a,h)antraceno 0.05-5 0.0031 0.009
Benzo(g,h,i)perileno 0.05-5 0.0028 0.008
PRECISION
OBTENIDA
CRITERIO DE
PRECISION
DEL METODO
FUENTE
EXACTITUD
OBTENIDA
2.18

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3.4 BIFENILOS POLIBROMADOS y (PBBs) BIFENILOS POLIBROMADOS
ETER (PBDEs)
El principio de este método se basa en la extracción, purificación y concentración del extracto
purificado con objeto de la medición de los PBBs y PBDEs presentes en el extracto orgánico
purificado de la muestra inyectando una alícuota de 2 µL en un cromatógrafo de gases acoplado a
un detector selectivo de masas que trabaja simultáneamente en los modos SIM y SCAN. La
identificación de los analitos se realiza por la comparación de los espectros de masas con los de la
biblioteca estandarizada de la estación de datos, las abundancias relativas de los iones
cualificadores y con los tiempos de retención de los estándares certificados, su cuantificación se
realiza por medio del método de estándar interno.
NOTA: Este método está basado en su desempeño, se permite que el laboratorio omita cualquier
paso o modifique cualquier procedimiento, suponiendo que todos los requerimientos de
desempeño especificados se cumplan. Al laboratorio no se le permite omitir cualquier punto de
control de calidad, ni los parámetros que se especifiquen como “NO MODIFICABLES”. Los
términos “debe”, “puede” y “deberá” son mencionados a través de los métodos y están destinados
a ilustrar la importancia de los procedimientos para producir datos verificables en los rangos de
trabajo del método. El término “debe” es usado para indicar que los desarrolladores de este
método encontraron ciertos procedimientos esenciales en muestras analizadas exitosamente; de
todas maneras, estos procedimientos pueden ser modificados u omitidos si el laboratorio puede
demostrar fehacientemente que la calidad de los resultados no resulta afectada.
PARÁMETROS NO MODIFICABLES
Cromatógrafo de Gases (Columnas Capilares).
Detector Selectivo de Masas con capacidad de trabajo simultáneo en modos SIM y SCAN
3.4.1 Aplicación y Alcances
3.4.1.1 Propósito – Este es un método para el análisis de los Bifenilos polibromados
(PBBs) y Bifenilos policromados éter (PBDEs) por cromatografía de gases acoplado a
espectrometría de masas (GC/MS).
3.4.1.2 Analitos –El método es aplicable a los siguientes analitos:
PBBs
PBDEs
De estos grupos de compuestos sólo son de interés:
2,2,4,4,5,5-Hexabromobifenil
2,2',4,4'-Tetrabromobifenil éter (PBDE 47)
2,2',4,4',5-Pentabromobifenil éter (PBDE 99)
2,2',4,4',5,5'-Hexabromobifenil éter (PBDE 153)
2,2',4,4',5,6'-Hexabromobifenil éter (PBDE 154)
2,2',3,3',4,5',6-Heptabromobifenil éter (PBDE 175)
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2,2',3,4,4',5',6-Heptabromobifenil éter (PBDE 183)
3.4.1.3 Matrices – Este método es aplicable para el análisis de los PBBs y
PBDEs mencionados en el inciso anterior en las siguientes matrices ambientales:
3.4.1.4 Limitaciones
Aguas Marinas
Aguas Estaurinas y de Lagunas Costeras
Aguas Superficiales Epicontinentales
Aguas Subterráneas
Suelos
Sedimentos Marinos
Sedimentos Epicontinentales
Alimentos procesados, sin procesar, Organismos y Tejidos animales
Los límites de detección en las muestras reales dependerán de las interferencias presentes en las
mismas, por lo que es muy importante tener en cuenta que pueden variar hasta en magnitudes de 10 a
1,000 veces (factores de concentración de las muestras e interferencias presentes en el extracto
purificado).
Este método está restringido para utilizarse sólo bajo la supervisión de analistas expertos en el uso de
cromatografía de gases y en la interpretación de sus resultados. Cada analista debe demostrar la
habilidad para generar resultados aceptables con este método.
3.4.2 Resumen
AGUAS (Marinas, Costeras, Estaurinas, Lagunas Costeras, Superficiales Epicontinentales
y Subterráneas)
Este método está diseñado para muestras de agua sin contaminación aparente (no
aplica para aguas residuales o aguas naturales altamente contaminadas con materia
orgánica, principalmente grasas y aceites).
Los analitos se extraen en 1 L de muestra a través de una extracción liquido-liquido. El
volumen de los extractos se reduce con la técnica Kuderna-Danish (K-D). Los extractos
para el análisis de PBBs y PBDEs se someten a una limpieza ácida con ácido sulfúrico
Se inyectan 2 µL de fase orgánica al GC/MSD en modo SIM y SCAN simultáneamente.
El tiempo total del análisis es de 30 a 50 minutos por muestra, dependiendo de los
analitos y las condiciones analíticas que se escojan.
Los límites de detección del método se encuentran entre 0.005 a 0.01 µg/L.
SUELOS Y SEDIMENTOS
Aproximadamente de 10 g de muestra se extraen con cloruro de metileno-acetona (1:1)
con ayuda un brazo ultrasónico. Distintos procedimientos de limpieza pueden aplicarse
al extracto, dependiendo de la naturaleza de las interferencias de la matriz coextraida y
de los analitos. Después de la limpieza, el extracto se analiza inyectando una alícuota de
2 µL en el GC/MSD en modo SIM y SCAN simultáneamente.
133

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Los límites de detección con este método varían de 1 a 10 µg/Kg BS según los diferentes analitos
en matrices libres de interferencias.
ORGANISMOS, TEJIDOS ANIMALES, ALIMENTOS PROCESADOS Y SIN PROCESAR
Una muestra de 20 a 25 g para tejidos, 50 a 100 g en alimentos sólidos y 100 mL de
alimentos líquidos se extrae utilizando la técnica de extracción apropiada.
Después de la limpieza, el extracto se analiza inyectando una alícuota de 2 µL en el
GC/MSD en modo SIM y SCAN simultáneamente.
3.4.3 Procedimientos de Extracción y Purificación de muestras
Antes de utilizar cualquier procedimiento de limpieza, el analista debe procesar una
serie de estándares de calibración por medio del procedimiento para validar los patrones
de elusión y la ausencia de interferencias de los reactivos.
3.4.3.1 Interferencias generales
Las interferencias del método pueden originarse por la presencia de contaminantes
en los solventes, reactivos, material de vidrio o cualquier otro material durante el
procesamiento de la muestra (contaminación cruzada).
El material de vidrio debe lavarse escrupulosamente. Lave el material de vidrio
enjuagándolo profusamente con el último disolvente utilizado en él. Después lávelo
con agua caliente y detergente y enjuáguelo con agua corriente y grado reactivo.
Escúrralo, séquelo y enjuáguelo con acetona. Después de secarlo y enfriarlo, selle el
material de vidrio y guárdelo en un ambiente limpio para evitar acumulación de polvo
u otros contaminantes. Guarde el material invertido o tapado con papel aluminio.
El uso de reactivos y disolventes de alta pureza ayuda a eliminar los problemas de
interferencias. Puede ser necesario purificar los disolventes por destilación en
material de vidrio. PRECAUCIÓN: Al purificar un disolvente se eliminan los
estabilizadores, lo que puede hacerlo peligroso. También pueden eliminarse
conservadores, reduciéndose su vida de anaquel.
Puede existir interferencia cuando se analiza una muestra con concentraciones bajas
de los analitos después de una muestra con concentraciones altas. Para evitar esto,
después de una muestra con concentraciones altas, debe inyectarse una o varias
veces hexano para asegurar que se obtengan valores precisos en la siguiente
muestra.
Es importante que las muestras y los estándares de trabajo se encuentren en el
mismo disolvente. El disolvente de trabajo para los estándares debe ser el mismo que
el disolvente final utilizado en la preparación de la muestra. De no ser este el caso,
puede afectarse la comparación cromatográfica entre los estándares y la muestra.
3.4.3.2 Seguridad general
La carcinogenidad y toxicidad de los químicos utilizados en este método no han sido
determinadas con precisión; de todas maneras; cada sustancia química debe ser
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tratada como potencial peligro a la salud. La exposición a estas sustancias químicas
debe ser reducida al menor nivel posible. Se sugiere que el laboratorio realice
monitoreos de higiene ocupacional de cada reactivo a los que pueda estar expuesto
el analista y que dichos resultados estén disponibles para los analistas.
PRECAUCIÓN: Al purificar un disolvente se eliminan estabilizadores, lo que puede
hacerlo peligroso.
Este método puede no mencionar todas las precauciones de seguridad asociadas
con su uso. El laboratorio es responsable de mantener un ambiente de trabajo seguro
y un archivo de las normas de seguridad respecto a la exposición y manejo seguro de
las sustancias químicas especificadas en este método. Debe tenerse un archivo de
referencias de las hojas de información de seguridad el cual debe estar disponible a
todo el personal involucrado en estos análisis.
3.4.3.3 Matrices
3.4.3.3.1 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras, superficiales
epicontinentales y subterráneas)
3.4.3.3.1.1 Equipo y Materiales
VER PARA PCBs
3.4.3.3.1.2 Reactivos y Materiales de Referencia
3.4.3.3.1.2.1 Reactivos
VER PARA PCBs
3.4.3.3.1.2.2 Materiales de referencia
Estándares de calibración
Estándares puros o en disolución certificados de:
Compuestos No. CAS # IUPAC
2,2,4,4,5,5-Hexabromobifenil 36355-01-8 -
2,2',4,4'-Tetrabromobifenil éter 5436-43-1 PBDE 47
2,2',4,4',5-Pentabromobifenil éter 60348-60-9 PBDE 99
2,2',4,4',5,5'-Hexabromobifenil éter 68631-49-2 PBDE 153
2,2',4,4',5,6'-Hexabromobifenil éter 207122-15-4 PBDE 154
2,2',3,3',4,5',6-Heptabromobifenil éter 446255-22-7 PBDE 175
2,2',3,4,4',5',6-Heptabromobifenil éter 207122-16-5 PBDE 183
Estándares internos
Se debe utilizar como estándar interno el criseno-d12, adicionado en cada
muestra extraída antes del análisis e incluido en cada estándar inicial de
calibración.
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Estándares surrogados
Se utiliza el perileno-d12 como un surrogado.
3.4.3.3.1.3 Procedimiento de Extracción
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
3.4.3.3.1.4 Procedimiento de Purificación de Muestras
3.4.3.3.2 Suelos
3.4.3.3.2.1 Equipo y Materiales
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
VER PARA PCBs
3.4.3.3.2.2 Reactivos y Materiales de Referencia
VER REACTIVOS PARA PCBs Y EN 3.4.3.3.1.2
3.4.3.3.2.3 Procedimiento de Extracción
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
3.4.3.3.2.4 Procedimiento de Purificación de las muestras
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
3.4.3.3.3 Sedimentos (marinos y epicontinentales)
3.4.3.3.3.1 Equipo y Materiales
VER PARA PCBs
3.4.3.3.3.2 Reactivos y Materiales de Referencia
VER REACTIVOS PARA PCBs Y EN 3.4.3.3.1.2
3.4.3.3.3.3 Procedimiento de Extracción
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
3.4.3.3.3.4 Procedimiento de Purificación de las muestras
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
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3.4.3.3.4 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos, y Tejidos
animales,
3.4.3.3.4.1 Tejidos y alimentos con grasa (≥ 2% GRASA)
3.4.3.3.4.1.1 LECHE
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
3.4.3.3.4.1.2 QUESO, YEMA DE HUEVO O HUEVO
DESHIDRATADO
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
3.4.3.3.4.1.3 MANTEQUILLA
3.4.3.3.4.1.4 HIGADO
VER PROCEDIMIENTO PARA PLAGUICIDAS
VER PARA PROCEDIMIENTO PCBs
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
3.4.3.3.4.1.5 TEJIDO GRASO
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
3.4.3.3.4.2 ALIMENTOS CON BAJO CONTENIDO DE GRASA
3.4.3.3.4.2.1 Alta humedad azucares bajos (> 75% agua < 5%
azucares)
3.4.3.3.4.2.1.1 Lechugas, biota vegetal, etc.
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
3.4.3.3.4.2.1.2 Huevo entero
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
3.4.3.3.4.2.2 Alta humedad azucares intermedios (> 75% agua y 5-
15% de azucares)
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
3.4.3.3.4.2.3 Alta humedad azucares altos ( > 75% agua < 15-30% azucares)
137

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VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
3.4.3.3.4.2.4 Alimentos secos con baja humedad (≤ 75% agua)
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
3.4.4 MÉTODO DE IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN
INSTRUMENTAL
3.4.4.1 Aplicación y Alcances
3.4.4.1.1 Matrices – Este método es aplicable para el análisis de PBBs y PBDEs en
los extractos purificados de aguas naturales, residuales municipales e
industriales, así como suelo, residuos, sedimentos, organismos, tejidos y
alimentos, los extractos y su purificación depende de la matriz analizada, se
deben seguir los procedimientos de extracción y purificación adecuados
para cada matriz.
3.4.4.1.2 Limitaciones – Los límites de detección en las muestras reales dependerán de las
interferencias presentes en las mismas, por lo que es muy importante tener en cuenta
que pueden variar hasta en magnitudes de 10 a 1,000 veces (factores de
concentración de las muestras e interferencias presentes en el extracto purificado).
3.4.4.2 Resumen
Este método está restringido para utilizarse sólo bajo la supervisión de analistas
expertos en el uso de cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas y
en la interpretación de sus resultados. Cada analista debe demostrar la habilidad para
generar resultados aceptables con este método.
El extracto purificado y concentrado se analiza en un Sistema de Cromatografía de Gases
acoplado a espectrometría de masas con la capacidad de trabajar en los modos SIM y SCAN
simultáneamente, en caso de que se detecte algún PBBs y PBDEs mediante los tiempos de
retención (Tr) coincidentes con los de los estándares respectivos y por el espectro de masas en
modo SCAN coincidente con el de la biblioteca estandarizada del sistema de manejo de datos y
con el ion cuantitativo y los 2 iones cualificadores con sus respectivas áreas proporcionales
obtenidas de los estándares de la curva de calibración en el modo SIM, se cuantifica mediante
el método de estándar interno, en caso de que se cumplan los Tr pero no exista coincidencia
entre las proporciones de los iones cualificadores se debe tomar como tentativa la
identificación, en caso de que no se cumpla con los Tr o con el ion cuantitativo, entonces se
trata de algún pico interferente y no se reportan los resultados como positivos a PBB y PBDEs.
3.4.4.3 Equipos y Materiales
3.4.4.3.1 Equipo
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Cromatógrafo de gases – Sistema analítico completo con cromatógrafo de
gases con programación de temperatura para técnica de inyección splitsplitless
con control electrónico de presión (Agilent 7890 o equivalente).
Espectrómetro de masas capaz de realizar barridos de 35 a 500 uma por
segundo o menor, usando una fuente de ionización de impacto electrónico
con energía de 70 electrón volts. El espectrómetro debe ser capaz de
producir un espectro de masas (al inyectar 1 L de la disolución de
decafluorotrifenilfosfina DFTPP), el cual cumpla con los criterios
mencionados en la sección de control de calidad (Agilent 5975 o
equivalente).
Sistema de manejo de datos el cual se encuentra acoplado al GC/MS, Este
sistema debe ser capaz de tener una adquisición y almacenamiento
continuo de todos los espectros de masas generados durante el programa
cromatográfico y poder analizar en modo SCAN y SIM las señales de los
compuestos eluídos de la columna capilar del GC (agilent Chemsation).
Balanza analítica con precisión de 0.0001 g
3.4.4.3.2 Materiales
Columna capilar de sílica fundida HP-5MS (Crosslinked 5% fenil metil
siloxano) de 30 m de longitud, 0.25 mm de diámetro y 0,25 m de película
de espesor o equivalente.
Microjeringa de 10 L, marca Hamilton 701N, No. parte 9301-0021 o
equivalente.
Microjeringa de 25 L, marca Hamilton 702N, No. parte 9301-0022 o
equivalente.
Microjeringa de 500 L, marca Hamilton 750N, No. parte 9301-0034 o
equivalente.
Matraces volumétricos aforados de 1,5 y 10 mL con tapón esmerilado.
Viales de vidrio con tapa de politetrafluoroetileno (PTFE) de rosca marca
Agilent o equivalente.
Insertos de vidrio para puerto de inyección marca Agilent o equivalente.
Septa color gris para bajo flujo, marca Agilent o equivalente.
O-ring de vespel marca Agilent o equivalente.
3.4.4.4 Reactivos y Materiales de Referencia
3.4.4.4.1 Reactivos y disoluciones
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Hexano, C6H14 grado optima, plaguicida o equivalente
Cloruro de Metileno CH2Cl2 grado óptima, plaguicida o equivalente
3.4.4.4.2 Materiales de referencia
Hexabromobifenilo, Tetra, penta, hexa y heptabromobifenilo éter
Los patrones pueden ser estándares puros o adquirirse como disoluciones
certificadas (patrones de referencia).
Compuestos No. CAS # IUPAC
2,2,4,4,5,5-Hexabromobifenil 36355-01-8 -
2,2',4,4'-Tetrabromobifenil éter 5436-43-1 PBDE 47
2,2',4,4',5-Pentabromobifenil éter 60348-60-9 PBDE 99
2,2',4,4',5,5'-Hexabromobifenil éter 68631-49-2 PBDE 153
2,2',4,4',5,6'-Hexabromobifenil éter 207122-15-4 PBDE 154
2,2',3,3',4,5',6-Heptabromobifenil éter 446255-22-7 PBDE 175
2,2',3,4,4',5',6-Heptabromobifenil éter 207122-16-5 PBDE 183
Disolución Patrón
Preparar a partir de 3.2.4.4.1.3 una mezcla de Hexabromobifenilo, Tetra,
penta, hexa y heptabromobifenilo éter
en una concentración de 10 mg/L, se deben incluir el criseno-d12 como estándar
interno y el perileno-d12 como surrogado. El disolvente es hexano.
Disolución intermedia de 1 mg/L
A partir de la disolución de 10 mg/L, tome 500 µL con una microjeringa en un
matraz aforado de 5 mL y afore a la marca con hexano y agite para
homogenizar. Guarde la disolución en viales de 2 mL.
Disoluciones de calibración
Prepare 5 niveles como mínimo de diferente concentración de las
disoluciones estándar para cada analito de interés en matraces volumétricos.
El punto de concentración más bajo de la curva de calibración debe ser 3 a 10
veces mayor que el valor del LDM. Las otras concentraciones corresponden
al intervalo esperado de las concentraciones encontradas en las muestras
reales o bien estarán definidas por el intervalo lineal del detector.
Estándar de calibración de 0,05 mg/L. En un matraz aforado de 1 mL ponga
50 µL de la solución de 1 mg/L y afore a la marca con Hexano. Guarde esta
disolución en viales de 2 ml y rotule con etiqueta que contenga método, fecha
de preparación, concentración, solvente utilizado, persona que lo preparó
Estándar de calibración de 0,1 mg/L. En un matraz de 1 ml ponga 100 µL de
la solución de 1 mg/L y afore a la marca con Hexano. Guarde esta disolución
en viales de 2 ml y etiquete.
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Estándar de calibración de 0,2 mg/L. En un matraz de 1 mL ponga 200 µL de
la solución de 1 mg/L y afore a la marca con hexano, guarde esta disolución
en viales de 2 ml y etiquete.
Estándar de calibración de 0,5 mg/L. En un matraz aforado 1 mL ponga 500
µL de la solución de 1 mg/L y afore a la marca con hexano y guarde esta
disolución en viales de 2 mL y etiquete.
3.4.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptación y rechazo
Cada laboratorio que utilice este método está obligado a operar un programa de
control de calidad (CC) formal. Los requerimientos mínimos de este programa
consisten en una demostración inicial de la capacidad del laboratorio para cumplir con
las especificaciones de desempeño del método, además realizar análisis continuos de
muestras de control de calidad (MCC) para demostrar la precisión y exactitud
continuas y el análisis de blancos. El desempeño del laboratorio debe compararse con
los criterios aquí establecidos, con objeto de determinar si los resultados de los análisis
cumplen con las especificaciones de desempeño del método. El analista debe hacer
una demostración inicial de su habilidad para generar una exactitud y precisión
aceptables por este método.
Cada vez que se realice una modificación al método o que se cambie el analista
responsable de llevar a cabo está determinación, el analista designado debe repetir la
validación del método, si el cambio va a afectar el límite de detección del método
(LDM), el laboratorio debe demostrar que el nuevo LDM determinado es igual o más
bajo que el anterior para los analitos de interés.
No se permite el uso de técnicas determinativas alternativas y cambios que degraden
la ejecución del método. Si se utiliza una técnica analítica que no sea la especificada
en este método, dicha técnica debe tener especificaciones iguales o mejores que las
de las técnicas descritas en este documento para el analito de interés.
Es obligatorio para el laboratorio mantener los registros de las modificaciones hechas a
este método. Estos registros deben de incluir lo siguiente:
- La justificación por escrito de la necesidad de realizar modificaciones al
método para ese analito.
- Los nombres, títulos, direcciones y número de teléfono de los analistas que
ejecutaron los análisis y modificaciones, y el encargado de control de calidad
que presenció y verificó los análisis y sus modificaciones.
- Los resultados de todas las pruebas de CC del método modificado
comparadas con el método original, dichos datos deben de incluir todos los
parámetros mencionados en la sección de desempeño del método.
- La información escrita en las bitácoras tanto del equipo como del analista,
deben incluir los siguientes datos:
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Identificación de la muestra
Número del lote analítico en el cual se analizó la muestra
Fecha del análisis
Procedimiento cronológico utilizado
Cantidad de muestra utilizada
Número de muestras de control de calidad analizadas en el lote
Trazabilidad de las calibraciones de los instrumentos de medición
Registros de bitácoras, en cintas de respaldo o en otros respaldos de
información
Información cruda reportada por los equipos o por los analistas
Evidencia de la aceptación o rechazo de los resultados del lote analítico.
3.4.4.5.1 Verificación del equipo
3.4.4.5.1.1 Verificación de la sintonía del espectrómetro de masas
(Autotune)
Realice una autosintonía (autotune y DFTPP tune), siguiendo las
actividades descritas en el instructivo de la calibración del espectrómetro de
masas correspondiente. Esta es una autosintonía (autotune) que hace el
instrumento con respecto a una sustancia de referencia llamada
Perfluorotributilamina PFTBA
Si no se cumple con las especificaciones siguientes, determine las causas y
corrija el problema de acuerdo al instructivo de mantenimiento preventivo del
instrumento, documente las incidencias y acciones correctivas e inclúyalas
en el expediente del sistema GC/MS.
Especificaciones para el autotune
Masa Especificación
69 100%
219 30% respecto a la masa 69
502 1% respecto a la mas 69
3.4.4.5.1.2 Verificación del Sistema (sintonía del MS con DFTPP) de
acuerdo a las especificaciones del método.
Inyecte 2 L de la disolución de DFTPP según las condiciones
instrumentales anexas, y obtenga el espectro de la DFTPP.
Verifique que el espectro cumpla con los siguientes criterios
ION MASICO CRITERIO DE ABUNDANCIA RELATIVA DE IONES
MASICOS DE LA DFTPP
51 30 A 60% de la masa 198
68 < 2% DE LA MASA 69
70 < 2 % DE LA MASA 69
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127 40 A 60 % DE LA MASA 198
197 A 1 % DE LA MASA 198
441 PRESENTE PERO MENOR QUE LA MASA 443
442 > 40% DE LA MASA 198
443 17 A 23 % DE LA MASA 442
Si el espectro obtenido de DFTPP no cumpliera con las condiciones
anteriores será necesario que revise los parámetros de sintonía del
espectrómetro, repita nuevamente la sintonía (autotune y DFTPP tune) e
inyecte nuevamente la disolución de DFTPP.
Verifique que el sistema GC/MS esté libre de contaminación (nivel señalruido)
Realice un blanco electrónico bajo las condiciones instrumentales del
método. El blanco electrónico como su nombre lo dice es una corrida
electrónica exclusivamente (sin inyección alguna), y éste debe estar libre
de picos o en su defecto éstos deberán ser no mayores a 5 veces el ruido.
En caso de no cumplir con lo mencionado en la sección anterior, eleve las
temperaturas tanto de la columna a 300 ºC, del puerto de inyección a 280
ºC y del detector a 300 ºC, mantenga el sistema bajo éstas condiciones de
temperatura por 30 min y realice nuevamente el blanco electrónico. En
caso de persistir el problema lleve a cabo las acciones de limpieza del
instrumento mencionadas en el instructivo de mantenimiento preventivo
correspondiente.
Verifique que los flujo de gases y condiciones cromatográficas sean las
adecuadas, según se menciona posteriormente.
3.4.4.5.1.3 Verificación del Funcionamiento del Sistema GC/MS
(SPCCs)
De la misma corrida del punto del DFTTP tune, verifique la degradación del
DDT (compuesto incluido en la disolución SPCCs) a DDE y DDD, la suma
de las respuestas del DDE y DDD no deben exceder del 20% con respecto
a la respuesta del DDT.
La bencidina y el pentaclorofenol deben presentarse en sus respuestas
normales (más menos 50%) y como picos bien definidos y sin coleo. Si la
degradación es excesiva y/o dan pobre respuesta cromatográfica, revise el
puerto de inyección y límpielo, cambie el liner, sello dorado y si es
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necesario que corte los primeros 5 a 10 cm de la columna capilar en el
extremo que conecta al puerto de inyección.
3.4.4.5.2 Verificación de la calibración inicial.
La curva de la calibración inicial deberá realizarse inyectando los estándares
de calibración preparados y se considera lineal; si el por ciento de la
desviación estándar relativa (%RSD) de los factores de calibración (CF) es
menor o igual al 20%, los cálculos se realizan con las siguientes ecuaciones:
total de área
CF
masa inyectada en nanogramos
SDCF
% RSD x100
CF
Donde:
SDCF= Desviación estándar de los factores de calibración
CF = Promedio de los factores de calibración
La verificación de la calibración inicial puede también efectuarse mediante la
regresión por mínimos cuadrados, en la cual el criterio de aceptación es que
el factor de correlación "r 2 " sea mayor o igual a 0,997.
Si los criterios para el % RSD o r no se cumplen se procede a la revisión del
sistema cromatográfico y la preparación de las disoluciones de calibración.
Posteriormente la curva de calibración será vigente, si el análisis de un punto
intermedio de la curva no presenta una variación de la concentración mayor
al 15% y que será calculada de la siguiente manera.
Diferencia de
concentración
Donde
CC= concentración calculada
CT= concentración teórica
O si se utiliza el factor de calibración
Diferencia
porcentual
CC CT
CT
% D
x100
CFv CF
CF
% x100
Donde:
CFv= Es el factor de calibración de cada compuesto en el
estándar de verificación.
CF = Es la media del factor de calibración del compuesto de
la calibración inicial.
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Si el criterio de aceptación para la diferencia porcentual es mayor al 15% se
procederá a la revisión del sistema cromatográfico y a la preparación de la
solución estándar utilizada.
3.4.4.5.3 Verificación de contaminación de los reactivos.
Los blancos de reactivos no deben presentar ningún tipo de contaminante al
tiempo de retención de los analitos medidos, por lo que es importante que los
reactivos utilizados cumplan con las especificaciones mencionadas.
Si los resultados de los blancos no cumplen con el criterio mencionado, se debe
localizar la fuente de contaminación y extraer y analizar nuevamente las muestras
asociadas al blanco contaminado
Use también los blancos de reactivos para verificar la contaminación por arrastre de
muestras con altas concentraciones en análisis secuenciales
3.4.4.5.4 Verificación del lote analítico
Por cada lote analítico de muestras analice al menos una muestra sintética
de control de calidad o preferentemente un material de referencia certificado
de la misma matriz de las muestras analizadas en el lote analítico, calcule el
% de recuperación de cada analito y surrogados de la muestra control, los
cuales deberán estar dentro del rango de 80 120 %R, de no ser así se debe
revisar la preparación de la muestra control y el sistema cromatográfico.
Realizar la corrección necesaria y reanalizar la muestra control, si el
problema persiste, se deben reanalizar todas las muestras del lote analítico.
3.4.4.5.5 Verificación de interferencias de matriz
La verificación de interferencias por parte de la muestra se lleva a cabo
mediante las muestras fortificadas (MF). El laboratorio debe realizar el
análisis de muestras fortificadas (MF) y muestras duplicadas (MD), fortifique
una muestra por cada lote analítico o preferentemente una muestra de cada
tipo de matriz analizada en el lote. Las muestras fortificadas se deben
analizar cuando por las características de la muestra se sospeche de
interferencias de matriz o cuando sean parte de un plan de aseguramiento
de calidad de un proyecto.
Efecto de la matriz en el recobro del analito – Muestras fortificadas (MF):
Analice las muestras fortificadas:
Calcule el por ciento de recobro
El % de Recobro debe estar dentro 80 a 120 %R
Si los valores no cumplen con lo especificado, el sistema analítico está fuera
de control, determine las causas y corrija el problema, documente las
incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del resultado
analítico.
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Efecto de la matriz en la precisión del analito – Precisión de la matriz
duplicada (MD): Analice una muestra duplicada por cada lote de muestra.
Calcule la diferencia porcentual relativa (DPR) entre la muestra y la
duplicada para cada analito, con la siguiente ecuación:
Donde:
DPR
C1 C2
* 200
C1
C2
C1 Concentración de la primera muestra
C2 concentración de la segunda muestra (muestra duplicada)
La DPR de cada analito obtenido entre la muestra y la duplicada debe
ser:

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verificación sea en un lote mayor de 20 muestras reanalice las 10 muestras
anteriores al estándar de verificación que falló.
3.4.4.5.7 Verificación de estándares surrogados.
Evalúe los datos de recobro de los surrogados de las muestras.
Calcule el % de recuperación de los estándares surrugados en blancos,
muestras control, muestras adicionadas (si se realizaron), muestras
duplicadas (si se realizaron) y muestras reales, con la siguiente ecuación:
C
Re cuperación % R
C
1 x
2
100
Donde:
C1=Concentración calculada de surrugados en la muestra.
C2=Concentración nominal del surrugado adicionado a la
muestra.
El %R debe estar entre el 70 y el 130 % de recuperación. De no ser así
verifique la preparación de la muestra que fallo y el sistema cromatográfico,
determine la causa de la falla y corrija; de no encontrarla, repita la extracción
de la muestra y vuelva a analizar si el %R esta fuera del rango de
aceptación, llene hoja de incidencia y reporte como interferencia de matriz y
los resultados obtenidos.
Si los valores no cumplen con los especificados, determine las causas y
corrija el problema, documente las incidencias y acciones correctivas e
inclúyalas en el expediente del resultado analítico.
3.4.4.5.8 Verificación de estándares internos.
Compare el área de el o los estándares internos de las muestras con el área
promedio de los estándares internos obtenidos de los puntos de calibración,
el valor obtenido en el o los estándares internos de la muestra no deben ser
menores a 50% ni mayores a 200% del valor promedio obtenido en la curva
de calibración para cada estándar interno.
Si los valores no cumplen con los especificados, el sistema analítico está
fuera de control, determine las causas y corrija el problema, documente las
incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del resultado
analítico.
3.4.4.5.9 Control de Calidad Estadístico – En esta sección se especifica
como debe realizarse el control de calidad estadístico obligatorio para este
método:
3.4.4.5.9.1 Preparación de las Muestras de Control de Calidad
(MCC) – Prepare la MCC de la siguiente forma:
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Se deberá preparar la MCC de una fuente externa al laboratorio o
ser preparada de una fuente diferente a la utilizada en la curva de
calibración.
Prepare una disolución a una concentración que corresponda al
rango de trabajo del método.
NOTA: Se recomienda que el valor de las soluciones de MCC no sea
conocido por el analista con el objeto de asegurar la veracidad de la
medición
3.4.4.5.9.2 Gráficas de Control de Exactitud – El laboratorio debe
elaborar y mantener actualizadas las gráficas de control de exactitud
para cada lote analizado a partir de la demostración inicial de
desempeño.
Cada valor de exactitud obtenido de las MCC de cada lote analizado deberá
graficarse y deberá estar dentro de los límites de control superior e inferior
( 3s).
Si un valor de exactitud es mayor a 3s, deberán rechazarse todos los
resultados del lote analítico. Determine las causas y corrija los errores,
documente adecuadamente las incidencias y acciones correctivas, deberá
repetirse el análisis del lote en cuestión.
3.4.4.5.9.3 Gráficas de Control de Precisión – El laboratorio debe
elaborar y mantener actualizadas las gráficas de control de precisión
para cada lote analizado a partir de la demostración inicial de
desempeño
Determine los límites de control de la siguiente forma:
Donde:
Límite Superior de Control (LSC) = 3.27R
Límite Superior de Advertencia (LSA) = 2.51R
R = Promedio del DPR
Si un valor de precisión es mayor al LSC, deberán rechazarse todos
los resultados del lote analítico. Determine las causas del problema
y corrija los errores, documente adecuadamente las incidencias y
acciones correctivas, deberá repetirse el análisis del lote en
cuestión.
3.4.4.5.10 Validación de modificaciones del método o de métodos alternos
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Para validar las modificaciones que se efectúen a este método o para la
utilización de métodos alternos deberá seguirse el siguiente procedimiento:
Si se realizan modificaciones al presente método, deberán validarse
parcialmente.
Si se utiliza un método alterno cuya fuente sea un método estandarizado por
alguna Institución de carácter internacional o reconocida internacionalmente
(e. g. ASTM, USEPA, AOAC, Standard Methods, DIN, OMS Environment
Canada, etc.) también deberá validarse parcialmente.
Si se utiliza algún método no estandarizado, deberá evidenciarse, además
de los parámetros de validación parcial, los parámetros de Robustez,
Reproducibilidad y Especificidad los cuales solo pueden evaluarse mediante
estudios interlaboratorio.
Verifique diariamente el desempeño de todo el sistema analítico utilizando
los datos recolectados de análisis de blancos reactivos, solución verificadora
del desempeño del laboratorio.
Si hay un coleado excesivo de algún analito a comparación de los
cromatogramas del método, éste deberá corregirse. Los problemas de
coleado generalmente pueden rastrearse a sitios activos en la columna
cromatográfica, problemas en la instalación de la columna o mala operación
del detector.
Verifique la precisión con réplicas del análisis. Una pobre precisión
generalmente puede deberse a fugas, especialmente en el puerto de
inyección. Si el sistema cromatográfico se está comportando aparentemente
bien, pero con baja sensibilidad, puede ser necesario generar una nueva
curva o juego de factores de calibración para verificar las respuestas bajas
antes de buscar la fuente del problema.
3.4.4.5.11 Composición del lote analítico (para cada 25 muestras ó 12 horas de
análisis continuo)
1 Calibración con PFTBA (Autotune)
2 Calibración con PFTBA (DFTPP)
3 Análisis de DFTPP (Tuning Standard Mixture)
4 Blanco electrónico
5 Mezcla de Verificación
6 Blanco de Reactivos
7 Muestra de Control de Calidad 1 (MCC)
8 Muestra real No. 1
9 Muestra real No. 2
10 Muestras reales (hasta 20 o 12 horas de análisis continuo)
11 Muestra fortificada (si se realizo)
12 Muestra fortificada duplicada (si se realizo)
13 Muestra de Verificación de la Calibración Continua.
14 Siguientes 20 muestras reales
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3.4.4.5.12 Criterios de Aceptación y Rechazo
Verificación del Equipo
Punto de verificación Criterio
Equipo libre de interferencias (blanco
electrónico)
Autotune
DFTTP tune
Puerto de inyección libre de suciedad y baja
degradación
Verificación de la Calibración Inicial
No deberá presenta picos a cualquier
tiempo de retención
Cumple con especificaciones del
fabricante
Cumple con abundancias
especificadas en el método
Degradación del DDT menor al 15%,
no coleo de Bencidina y PCP
Punto de verificación Criterio
Evaluación del % Diferencial de la concentración
de la Mezcla de Verificación, punto intermedio de
la curva de calibración.
Verificación de Contaminación de Reactivos
Menor al 15%
Punto de verificación Criterio
Blanco de reactivos
Verificación del Proceso Analítico
No deben presentar ningún tipo de
contaminante al tiempo de retención
de los analitos medidos
Punto de verificación Criterio
Muestra de control de calidad % de Recuperación de 70 / 130
Evaluación de estándares Surrogados % de Recuperación de 70 / 130
Evaluación de muestras adicionadas duplicadas % DPR < 20%
Verificación de Interferencias de Matriz
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Punto de verificación Criterio
Evaluación de muestras adicionadas % de Recuperación 70 / 130
Estabilidad de la Curva de Calibración
Punto de verificación Criterio
Evaluación de la Estándar de Verificación
(Intermedio)
3.4.4.6 Calibración
% de diferencia menor al 15%
Se necesitan al menos 5 estándares de calibración. Uno debe contener analitos a una
concentración cercana, pero superior a la del límite práctico de cuantificación para
cada analito; los otros deben estar a concentraciones que cubran el intervalo
esperado en las muestras. Por ejemplo, si el LDM es 0,01µg/L y el LPC es de 0,05
µg/L, se espera que la muestra contenga concentraciones mayores de 0,05 µg/L.
Una vez establecidas las condiciones de operación inyecte un volumen adecuado (2 L) de
cada estándar de calibración por triplicado y al final realice un promedio de las tres curvas y
agréguelo a la tabla de calibración del método.
Si la DPR de cada analito es 20%, entonces la respuesta del instrumento es
considerada lineal y el factor de calibración promedio FC puede utilizarse para la
cuantificación de los resultados de las muestras. Si la DSR es mayor que 20%, entonces
no puede asumirse linealidad y se debe repetir la curva de calibración.
Si se utiliza regresión lineal por mínimos cuadrados, deberá obtener el factor de
correlación “r 2 ” para cada analito, el cual deberá ser mayor o igual a 0,997 si “r” es
menor a este valor, la curva de calibración no es lineal y deberá verificarse la
preparación de los estándares de calibración y el sistema cromatográfico, y repetir la
calibración.
3.4.4.6.1 Calibración por Estándar Interno:
El analista debe seleccionar uno o más estándares internos que sean similares en
comportamiento analítico a los compuestos de interés. El analista debe además
demostrar que la medición del estándar interno no es afectada por el método o
interferencias de la matriz.
Prepare los estándares de calibración a un mínimo de cinco concentraciones para cada
analito de interés por adición de volúmenes. Para cada estándar de calibración, adicione
una cantidad conocida constante de uno o más estándares internos y afore con un
solvente apropiado. Uno de los estándares debe estar a una concentración cercana, pero
por arriba del LPC. Las otras concentraciones deben corresponder al rango de trabajo.
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Inyecte cada estándar de calibración. Tabule la altura del pico o el área de respuesta
contra la concentración de cada compuesto y el estándar interno. Calcule el factor de
respuesta (RF) para cada compuesto como sigue:
Donde:
As*
Cis
RF
Ais*
Cs
As = Respuesta para el analito que será medido.
Ais = Respuesta del estándar interno.
Cis = Concentración del estándar interno, µg/L.
Cs = Concentración del analito a ser medido, µg/L.
Si el valor RF sobre el rango de trabajo es constante (< 20% RSD), el RF puede usarse
para cálculos. Alternativamente, los resultados pueden usarse para graficar una curva de
calibración de la relación de respuesta, As/Ais contra RF.
3.4.4.7 Procedimiento Analítico
3.4.4.7.1 Análisis de los extractos de las muestras
Condiciones cromatográficas:
Gas acarreador Helio
Temperatura inicial 150 °C
Tiempo inicial 0 min
Programa 1 8ºC/min
Temperatura final 1 180ºC 0 min
Programa 2 15ºC/min
Temperatura final 2 320ºC 6 min
Temperatura del inyector 250ºC
Volumen inyeccion: 2μL
Modo splitless
Flujo purga septum 2 mL/min
Solvent delay 4.4 min
Detector:
Modo de adquisición: SIM/SCAN
Rango de masas: 100-900
Temperatura de la fte: 230 ºC
Temperatura cuadrupolo: 150 ºC
Grupos SIM
Grupo 1 iones 219, 241, 236, 326, 240 y 486. Minuto 0-11,5
Grupo 2 iones 297, 403,8 y 566 Minuto 11-12,4
Grupo 3 iones 260, 264, 264,300,307,9, 468, 483, 628 y 644 Minuto 12,4
a 13
Grupo 4 iones 290, 300, 483,8, 561,7, 644 y 722. Minuto 13 a 19
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Adicione un volumen de la mezcla de estándares internos, de manera que la
concentración de estos en el vial sea igual a la concentración que se utilizo en
la preparación de la curva de calibración.
Elabore la secuencia de análisis de acuerdo a lo indicado en el punto de
composición del lote analítico.
Inicie el análisis.
Inyecte un volumen de 2 L del extracto de la muestra o estándar en el
cromatógrafo de gases. Registre el volumen final del extracto.
Verifique que se cumple con lo especificado en el inciso de control de calidad y
criterios de aceptación y rechazo.
Si la respuesta de cualquier ion cuantitativo excede la respuesta del intervalo de
calibración, diluya el extracto y reanalice.
3.4.4.7.2 Identificación de los analitos
La determinación cualitativa de cada compuesto determinado por este método
está basada en la comparación del tiempo de retención y de los espectros de
masas de las muestras, con los tiempos y iones característicos de los espectros
de masas de los estándares de referencia en modo SCAN. Los espectros de
masas de referencia en modo SIM están definidos por tres iones de mayor
intensidad relativa (mayor al 30% de intensidad). Los compuestos son
identificados como presentes cuando cumplen con los siguientes criterios:
El tiempo de retención relativo TRR del compuesto detectado es 0,5 unidades
del TRR del estándar de referencia.
La intensidad relativa de los iones cualificadores en modo SIM se encuentren
dentro del 30% de las intensidades relativas de estos iones en el espectro de
referencia (ejemplo: para un ion con abundancia del 50% en el espectro de
referencia, la abundancia en el espectro de la muestra debe encontrarse en el
intervalo de 20% y 80%)
Los iones que estén presentes en el espectro de la muestra y que no estén en
el espectro del estándar deben ser revisados cuidadosamente, ya que puede
tratarse de contaminación de fondo o coelusión de otros compuestos.
Si hay iones que estén presentes en el espectro del estándar y no estén
presentes en la muestra, debe someterlo a revisión ya que éstos pueden
haberse perdido por posibles sustracciones en el momento de limpiar los
espectros
Para muestras que contienen componentes que no están asociados con los
estándares de calibración, realice una búsqueda por librería para obtener una
identificación y a partir de los estándares internos obtener una concentración
estimada.
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3.4.4.7.3 Cálculos
3.4.4.7.3.1 AGUA
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
3.4.4.7.3.2 SUELOS Y SEDIMENTOS
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
3.4.4.7.3.3 ALIMENTOS PROCESADOS, SIN PROCESAR, TEJIDOS Y
ALIMENTOS
VER PROCEDIMIENTO PARA PCBs
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3.5 Acido Perfluoroctanico sulfónico (PFOS) y sus sales
El principio de este método se basa en la extracción, purificación y concentración de los PFOS,
sus sales presentes en el extracto orgánico de la muestra con objeto de la medición, inyectando
una alícuota de 10 µL en un cromatógrafo de líquidos acoplado a un detector selectivo de masas.
La identificación de los analitos se realiza por la comparación de los espectros de masas con los
estándares, las abundancias relativas de los iones cualificadores y con los tiempos de retención de
los estándares certificados.
NOTA: Este método está basado en su desempeño, se permite que el laboratorio omita cualquier
paso o modifique cualquier procedimiento, suponiendo que todos los requerimientos de
desempeño especificados se cumplan. Al laboratorio no se le permite omitir cualquier punto de
control de calidad, ni los parámetros que se especifiquen como “NO MODIFICABLES”. Los
términos “debe”, “puede” y “deberá” son mencionados a través de los métodos y están destinados
a ilustrar la importancia de los procedimientos para producir datos verificables en los rangos de
trabajo del método. El término “debe” es usado para indicar que los desarrolladores de este
método encontraron ciertos procedimientos esenciales en muestras analizadas exitosamente; de
todas maneras, estos procedimientos pueden ser modificados u omitidos si el laboratorio puede
demostrar fehacientemente que la calidad de los resultados no resulta afectada.
PARÁMETROS NO MODIFICABLES
LC/MS
3.5.1 Aplicación y Alcances
3.5.1.1 Propósito – Este es un método para el análisis del Acido
Perfluoroctanico Sulfónico (PFOS), sus sales por cromatografía de líquidos acoplado a
espectrometría de masas (LC/MS).
3.5.1.2 Analitos –El método es aplicable a los siguientes analitos:
PFOS
3.5.1.3 Matrices – Este método es aplicable para el análisis de los PBBs y
PBDEs mencionados en el inciso anterior en las siguientes matrices ambientales:
Aguas Marinas
Aguas Estaurinas y de Lagunas Costeras
Aguas Superficiales Epicontinentales
Aguas Subterráneas
Suelos
Sedimentos Marinos
Sedimentos Epicontinentales
Alimentos procesados, sin procesar, Organismos y Tejidos animales
3.5.1.4 Limitaciones – Los límites de detección en las muestras reales dependerán de
las interferencias presentes en las mismas, por lo que es muy importante tener en cuenta que pueden
variar hasta en magnitudes de 10 a 1,000 veces (factores de concentración de las muestras e
interferencias presentes en el extracto purificado).
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Este método está restringido para utilizarse sólo bajo la supervisión de analistas expertos en el uso de
cromatografía de gases de alta resolución y en la interpretación de sus resultados. Cada analista debe
demostrar la habilidad para generar resultados aceptables con este método usando los procedimientos
establecidos en el Manual de Control de Calidad.
3.5.2 Resumen
AGUAS (Marinas, Costeras, Estaurinas, Lagunas Costeras, Superficiales Epicontinentales
y Subterráneas)
Una muestra de agua es extraída por extracción en fase sólida (SPE) y posteriormente
analizada por LC/MS
SUELOS Y SEDIMENTOS
Una muestra de suelo es tratada con NaOH y HCl en metanol y extraída con metanol
y finalmente se realiza una segunda extracción con Carbono grafitado no poroso.
ORGANISMOS, TEJIDOS ANIMALES, ALIMENTOS PROCESADOS Y SIN PROCESAR
Se pesa una cantidad de muestra a la cual se le adiciona un reactivo de par iónico y
se extrae con acetato de etilo. Se evapora a sequedad y se reconstituye con
acetonitrilo y se pasa para su análisis por LC/MS.
3.5.3 Procedimientos de Extracción y Purificación de muestras
3.5.3.1 Interferencias generales
Las interferencias del método pueden originarse por la presencia de contaminantes
en los solventes, reactivos, material de vidrio o cualquier otro material durante el
procesamiento de la muestra (contaminación cruzada).
Interferencias de matriz pueden ser causadas por contaminantes co-extraídos de las
muestras. La ausencia de interferencias de matriz varía considerablemente,
dependiendo de la naturaleza de la muestra. En aguas subterráneas las
interferencias son mínimas, pero en aguas de desechos, aguas de mar, suelos,
sedimentos, tejidos y alimentos puede existir interferencias de matriz.
El material de los recipientes que contienen la muestra no deben ser de ningún
plástico polifluorado incluyendo el politetrafluoroetileno (PTFE) y materiales
fluoroeslastomeros; todos estos materiales no deben ser usados durante el muestreo,
almacenamiento o procesamiento de la muestra. Todo el material utilizado debe ser
enjuagado con agua y metanol.
Es importante que las muestras y los estándares de trabajo se encuentren en el
mismo disolvente. El disolvente de trabajo para los estándares debe ser el mismo que
el disolvente final utilizado en la preparación de la muestra. De no ser este el caso,
puede afectarse la comparación cromatográfica entre los estándares y la muestra.
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3.5.3.2 Seguridad general
La carcinogenidad y toxicidad de los químicos utilizados en este método no ha sido
determinadas con precisión; de todas maneras; cada sustancia química debe ser
tratada como potencial peligro a la salud. La exposición a estas sustancias químicas
debe ser reducida al menor nivel posible. Se sugiere que el laboratorio realice
monitoreos de higiene ocupacional de cada reactivo a los que pueda estar expuesto
el analista y que dichos resultados estén disponibles para los analistas.
PRECAUCIÓN: Al purificar un disolvente se eliminan estabilizadores, lo que puede
hacerlo peligroso.
Este método puede no mencionar todas las precauciones de seguridad asociadas con
su uso. El laboratorio es responsable de mantener un ambiente de trabajo seguro y
un archivo de las normas de seguridad respecto a la exposición y manejo seguro de
las sustancias químicas especificadas en este método. Debe tenerse un archivo de
referencias de las hojas de información de seguridad el cual debe estar disponible a
todo el personal involucrado en estos análisis.
3.5.3.3 Matrices
3.5.3.3.1 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras, superficiales
epicontinentales y subterráneas)
3.5.3.3.1.1 Equipo y Materiales
La mención de marcas, modelos y proveedores de equipos y materiales en este método se citan
debido a que fueron los utilizados para desarrollarlo y solamente tienen propósitos ilustrativos.
Su mención no implica ninguna aprobación oficial. Puede obtenerse un desempeño equivalente
usando otros equipos y materiales que no hayan sido especificados en este método, pero la
demostración del desempeño equivalente de otros equipos y materiales es responsabilidad del
laboratorio que utilice este método.
Sólo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este método
analítico.
Cartuchos de extracción en fase sólida: Oasis-WAX 100-200 mg
Oasis-HLB 60-200 mg ambos de Waters
Sistema de vació
Contenedores de 500 mL
Viales de polipropileno o polietileno que no contengan materiales
de fluoropolimeros
3.5.3.3.1.2 Reactivos y Materiales de Referencia
Los reactivos que requiere el método deben ser tipo ACS grado reactivo o pesticida, a menos
que otra cosa se indique.
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3.5.3.3.1.2.1 Reactivos
Acido acético
Hidróxido de amonio al 25%.
Acetato de amonio
Metanol
Agua – A menos que otra forme se indique, el agua de referencia debe entenderse como
agua grado reactivo tipo I ASTM.
Buffer de acetato 0.025 M pH 4: Mezclar 0,5 mL de ácido acético con 349,5 mL de
agua. Disolver 0.116 g de acetato de amonio en 60 mL de agua. Mezclar 200 mL del
acido acético diluido con 50 mL de la disolución de acetato de amonio.
Disolución de Amoniaco 0.1% en metanol: Mezclar 0,4 mL de amoniaco al 25% con
99,6 mL de metanol.
3.5.3.3.1.2.2 Materiales de referencia
Estándares puros o en disolución certificados de:
Compuesto No. CAS
PFOS 1763-23-1
3.5.3.3.1.3 Procedimiento de Extracción
La muestra debe encontrarse a 4 ºC y debe analizarse dentro de las 2 semanas posteriores a su
muestreo; de no ser así, la muestra debe de mantenerse en congelación desde el muestreo hasta
su procesamiento.
Primero se realiza el acondicionamiento del cartucho SPE:
Se acondiciona el cartucho haciéndole pasar 4 mL de la disolución de amoniaco/metanol y
finalmente 4 mL de agua. El cartucho nunca debe quedar seco, para ello cerrar a la llave
cuando el nivel del agua se encuentre por arriba de la cama del adsorbente, de esta manera se
mantendrá activado.
Haga pasar por el cartucho 500 mL de la muestra a un flujo de 3-6 mL/min. Para las muestras
que contengan más de 500 mg/L de materia suspendida solo utilizar 100 mL. Para eliminar el
agua atrapada en el adsorbente hacer pasar 30 segundos vacío; si no fue suficiente repetir en
periodos de 30 segundos pero no debe de hacerlo mas de 2 minutos pues puede resultar en
perdida de los analitos. Adicione 4 mL del buffer de acetato y seque el cartucho desechando el
líquido eluído.
Para eluir los PFOS haga pasar por el cartucho 4 mL de metanol seguido de 4 mL de 0,1% de
amoniaco/MeOH a un flujo de una gota por segundo. Colectar el eluato y concentrarlo con
nitrógeno a 500 µL.
No Aplica
3.5.3.3.1.4 Procedimiento de Purificación de Muestras
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3.5.3.3.2 Suelos y Sedimentos
3.5.3.3.2.1 Equipo y Materiales
La mención de marcas, modelos y proveedores de equipos y materiales en este método se citan
debido a que fueron los utilizados para desarrollarlo y solamente tienen propósitos ilustrativos.
Su mención no implica ninguna aprobación oficial. Puede obtenerse un desempeño equivalente
usando otros equipos y materiales que no hayan sido especificados en este método, pero la
demostración del desempeño equivalente de otros equipos y materiales es responsabilidad del
laboratorio que utilice este método.
Sólo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este método
analítico.
Fase sólida de carbono grafitado no poroso: Supelcelan ENVI-Carb
120/400 de Supelco
Contenedores de 500 mL
Tubos de centrifuga de polipropileno
Tubos para centrifuga Eppendorf de 1.7 mL
Viales de polipropileno o polietileno que no contengan materiales de
fluoropolimeros.
Matraces volumétricos de 500 mL.
3.5.3.3.2.2 Reactivos y Materiales de Referencia
Los reactivos que requiere el método deben ser tipo ACS grado reactivo o pesticida, a menos
que otra cosa se indique.
3.5.3.3.2.2.1 Reactivos
Metanol (CH3OH)
Hidróxido de sodio (NaOH)
Acido acético glacial (CH3COOH)
Acetato de amonio (CH3COO NH4)
Acido Clorhídrico concentrado (HCl)
Metanol
Agua – A menos que otra forme se indique, el agua de referencia debe entenderse como
agua grado reactivo tipo I ASTM.
NaOH 200 mM en metanol: Pesar 4 g de NaOH disolver en MeOH en un matraz
volumétrico de 500 mL y llevar al aforo con MeOH.
HCl 2 M en metanol: Tomar 88 mL de HCl concentrado y colocarlos en un matraz
aforado de 500 mL y con cuidado llevar al aforo con metanol.
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Acetato de amonio 4 mM: Pesar 0.0576 g de acetato de amonio, disolverlos en 100
mL de agua y llevar al aforo con agua en un matraz volumétrico de 200 mL.
3.5.3.3.2.2.2 Materiales de referencia
Estándares puros o en disolución certificados de:
Compuesto No. CAS
PFOS 1763-23-1
3.5.3.3.2.3 Procedimiento de Extracción
El suelo o sedimento debe encontrarse en congelación hasta el momento de su
procesamiento.
Descongelar el suelo o sedimento, pesar 2.5 g colocándolos en un tubo de centrifuga
de polipropileno y adicionar 1 mL de NaOH 200 mM en metanol dejando remojar por
30 minutos. Adicionar 100 µL de HCl 2M en 9 mL de metanol, tapar el tubo (la tapa
debe ser de polipropileno) y agitar durante 15 minutos.
Centrifugar a 2000 rpm durante 5 min y transferir el sobrenadante a otro tubo de
polipropileno. Al tubo que contiene la fase sólida adicionar 9 mL de metanol y repetir
el procedimiento de agitación y centrifugación. Repetir nuevamente la extracción. Unir
los tres extractos de las tres extracciones y concentrar a aproximadamente 1 mL.
En un tubo de centrifuga Eppendorf de 1,7 mL adicionar 25 mg de ENVI-Carb y 50 µL
de acido acético glacial y adicionar el mL de extracto obtenido en la parte de
concentración. Tapar, agitar en vortex y centrifugar a 10000 rpm durante 10 minutos.
Pasar 0,5 mL del sobrenadante del tubo Eppendorf a. un vial de polipropileno y
adicionar 0,5 mL de acetato de amonio 4 mM. La muestra esta lista para su análisis
por LC/MS
No Aplica
3.5.3.3.2.4 Procedimiento de Purificación de Muestras
3.5.3.3.3 Alimentos procesados, sin procesar, organismos y tejidos animales
3.5.3.3.3.1 Tejido graso e hígado
3.5.3.3.3.1.1 Equipo y Materiales
La mención de marcas, modelos y proveedores de equipos y materiales en este método
se citan debido a que fueron los utilizados para desarrollarlo y solamente tienen
propósitos ilustrativos. Su mención no implica ninguna aprobación oficial. Puede
obtenerse un desempeño equivalente usando otros equipos y materiales que no hayan
sido especificados en este método, pero la demostración del desempeño equivalente de
otros equipos y materiales es responsabilidad del laboratorio que utilice este método.
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Sólo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este
método analítico.
Viales 40 mL
Mezclador de alta velocidad con vaso de polietileno o polipropileno
Tubos de centrifuga de polipropileno
Microjeringas de 10 y 50 µL.
Filtros para jeringa de nylon de 0,2μm. 25mm
Jeringas de plástico de 3 mL
Matraz volumétrico de 1L
Viales de polipropileno o polietileno que no contengan materiales de
fluoropolimeros
3.5.3.3.3.1.2 Reactivos y Materiales de Referencia
Los reactivos que requiere el método deben ser tipo ACS grado reactivo o pesticida, a
menos que otra cosa se indique.
3.5.3.3.3.1.2.1 Reactivos
Sulfato acido de Tetrabutilamonio (TBA)
Hidróxido de sodio (NaOH)
Carbonato de sodio (NaCO3)
Bicarbonato de sodio (NaHCO3)
Metanol
Acetato de etilo (CH3COOCH2CH3)
Agua – A menos que otra forme se indique, el agua de referencia debe entenderse como
agua grado reactivo tipo I ASTM.
NaOH 10 N: Pesar 200g de NaOH en un vaso de precipitados de 500 mL, agregar
250mL de agua desionizada, agitar hasta disolver los sólidos. Pasar a un matraz
aforado de 500 mL y llevar al aforo con agua. Debe almacenarse en una botella de
polietileno con capacidad de 500 mL.
NaOH 1 N: Colocar 10mL de la disolución 10N preparada anteriormente en un
matraz volumétrico de 100mL y llevar al aforo con agua desionizada Debe
almacenarse en una botella de polietileno con capacidad de 125mL
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Tetrabutilamonio hidrogenosulfato (TBA) 0.5M: Pesar 169g de TBA en un
matraz volumétrico de 1L y disolver con 500mL de agua, ajustar el pH a 10
utilizando aproximadamente 64mL de la disolución de NaOH 10N; llevar al
aforo con agua desionizada El último mililitro de NaOH debe agregarse
cuidadosamente ya que el pH cambia abruptamente.
Esta disolución debe almacenarse en una botella de polietileno con
capacidad de 1L. La disolución de TBA requiere ser revisada justo antes de
su uso para asegurar pH=10. Si requiere ajuste, se utiliza la disolución de
NaOH 1N.
Disolución amortiguadora de Carbonato de sodio/Bicarbonato de Sodio
(Na2CO3/NaHCO3) 0,25M: Pesar aproximadamente 26,5g de carbonato de
sodio y 21g de bicarbonato de sodio; y colocarlos en un matraz volumétrico
de 1L, llevar a la marca de aforo con agua desionizada. Almacenar en una
botella de polietileno con capacidad de 1L.
3.5.3.3.3.1.2.2 Materiales de referencia
Estándares puros o en disolución certificados de:
Compuesto No. CAS
PFOS 1763-23-1
3.5.3.3.3.1.3 Procedimiento de Extracción
Pesar 1 g de la muestra en un vaso de mezcla de alta velocidad, adicionar 2,5 mL de
agua y moler la muestra durante dos minutos hasta que sea homogénea; pasar a un vial
de polietileno raspando las paredes del vaso con una espátula y/o adicionando 2,5 mL
mas de agua al vaso. Tapar y agitar en vortex durante 15 segundos.
En otro tubo de centrifuga colocar 1 mL de la mezcla homogénea, 1 mL de TBA 0.5
M, 2 mL del buffer 0,25 M de carbonato de sodio/bicarbonato de sodio y 5 mL de
acetato de etilo. Tapar muestra y agitar durante 20 minutos en vortex. Posteriormente
centrifugar a 3500 rpm hasta la separación de fases. Pasar 4 mL de la fase orgánica a
un tubo de centrifuga limpio. Posteriormente se evapora el disolvente con nitrógeno
hasta sequedad.
Adicionar 1 mL de MeOH, agitar 30 segundos en vortex y filtrar sobre un filtro de
nylon de 0,2 µm colocándola en un vial de polipropileno. La muestra esta lista para su
análisis en LC/MS
No Aplica
3.5.3.3.3.1.4 Procedimiento de Purificación de Muestras
3.5.3.3.3.2 Alimentos procesados y sin procesar
3.5.3.3.3.2.1 Equipo y Materiales
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La mención de marcas, modelos y proveedores de equipos y materiales en este método se
citan debido a que fueron los utilizados para desarrollarlo y solamente tienen propósitos
ilustrativos. Su mención no implica ninguna aprobación oficial. Puede obtenerse un
desempeño equivalente usando otros equipos y materiales que no hayan sido
especificados en este método, pero la demostración del desempeño equivalente de otros
equipos y materiales es responsabilidad del laboratorio que utilice este método.
Sólo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este método
analítico.
Agitador mecánico
Mezclador de alta velocidad con vaso de polietileno o polipropileno
Tubos de centrifuga de polipropileno
Cartuchos de extracción en fase sólida de intercambio aniónico débil
Microjeringas de 10 y 50 µL.
Filtros para jeringa de nylon de 0,2μm. 25mm
Jeringas de plástico de 3 mL
Matraz volumétrico de 1L
Viales de polipropileno o polietileno que no contengan materiales de
fluoropolimeros
3.5.3.3.3.2.2 Reactivos y Materiales de Referencia
Los reactivos que requiere el método deben ser tipo ACS grado reactivo o pesticida, a
menos que otra cosa se indique.
3.5.3.3.3.2.2.1 Reactivos
Hidróxido de potasio (KOH)
Metanol
Acetato de amonio (CH3COO NH4)
Hidróxido de amonio (NH4OH)
Agua – A menos que otra forme se indique, el agua de referencia debe entenderse como
agua grado reactivo tipo I ASTM.
KOH 0.01 M: Pesar 0.2805 g de KOH en un vaso de precipitados de 500 mL,
agregar 250mL de agua desionizada, agitar hasta disolver los sólidos. Pasar a un
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matraz aforado de 500 mL y llevar al aforo con agua. Debe almacenarse en una
botella de polietileno con capacidad de 500 mL.
Acetato de amonio 25 mM - pH 4. Pesar 0,36 g de acetato de amonio, disolverlos en
100 mL de agua y llevar al aforo con agua en un matraz volumétrico de 200 mL.
Metanol básico (0.1% NH4OH): En un matraz volumétrico de 250 mL se colocan
aproximadamente 200 mL de metanol y se agrega 0.25 mL de hidróxido de amonio
con una microjeringa y se lleva al aforro con metanol.
Disolución amortiguadora de Carbonato de sodio/Bicarbonato de Sodio
(Na2CO3/NaHCO3) 0,25M: Pesar aproximadamente 26,5g de carbonato de
sodio y 21g de bicarbonato de sodio; colocarlos en un matraz volumétrico
de 1L, llevar a la marca de aforo con agua desionizada. Almacenar en una
botella de polietileno con capacidad de 1L.
3.5.3.3.3.2.2.2 Materiales de referencia
Estándares puros o en disolución certificados de:
Compuesto No. CAS
PFOS 1763-23-1
3.5.3.3.3.2.3 Procedimiento de Extracción
En un vaso de alta velocidad se colocan 10 g de muestra y se adicionan 20 mL
de metanol y se homogeniza. Adicionar 20 mL de metanol y mezclar
nuevamente. La muestra se somete a agitación vigorosa durante toda la noche
(16 horas).
Posteriormente las muestras son centrifugadas a 5000 rpm durante 15 minutos.
Las muestras de leche y huevo se someten a calentamiento (70º) durante 2
horas para inducir la precipitación de las proteínas.
Se colecta el extracto metanólico y se evapora a sequedad con nitrógeno a 80
ºC y se reconstituye con 25 mL de KOH 0,01 M; se sonica durante 10 minutos y
se centrifuga a 5000 rpm 15 minutos.
Transferir la fase líquida con mucho cuidado a un tubo limpio de polipropileno.
Se acondiciona el cartucho de intercambio aniónico de acuerdo a las
instrucciones del fabricante. Se hace pasar el extracto liquido por gravedad (si
es requerido se utiliza vacío). Se lava el cartucho con dos porciones de 6 mL de
acetato de amonio 25 mM, pH 4,5. La elusión se lleva a cabo con 4 mL de la
disolución de metanol básico colectando.
Al extracto obtenido de la elusión se evapora el disolvente con nitrógeno en un
baño de agua a 30 ºC y justo antes de que llegue a sequedad se reconstituye
con 400 µL de metanol.
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No Aplica
3.5.3.3.3.2.4 Procedimiento de Purificación de Muestras
3.5.4 MÉTODO DE IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN INSTRUMENTAL
3.5.4.1 Aplicación y Alcances
3.5.4.1.1 Matrices – Este método es aplicable para el análisis de PFOS y sus sales
en los extractos purificados de aguas naturales, residuales municipales e
industriales, así como suelos, sedimentos, organismos, tejidos y
alimentos, los extractos y su purificación depende de la matriz analizada;
se deben seguir los procedimientos de extracción y purificación
adecuados para cada matriz.
3.5.4.1.2 Limitaciones – Los límites de detección en las muestras reales dependerán de las
interferencias presentes en las mismas, por lo que es muy importante tener en
cuenta que pueden variar hasta en magnitudes de 10 a 1,000 veces (factores de
concentración de las muestras e interferencias presentes en el extracto
purificado).
3.5.4.2 Resumen
Este método está restringido para utilizarse sólo bajo la supervisión de analistas
expertos en el uso de cromatografía de líquidos acoplada a espectrometría de
masas y en la interpretación de sus resultados. Cada analista debe demostrar la
habilidad para generar resultados aceptables con este método.
Este método describe el análisis de PFOS y sus sales de extractos por HPLCelectrospray/espectrometría
de masas. La cuantificación se lleva a cabo monitoreando el ion
característico de PFOS M/Z 499.
3.5.4.3 Equipos y Materiales
3.5.4.3.1 Equipo
Cromatógrafo de líquidos (HPLC)–electrospray/MS con controlador de
temperatura en el compartimiento de columna y todos los accesorios
necesarios incluyendo gases, inyector, automuestreador, etc. Debe tener
una interfase de Ionización por electrospray acoplado a un detector de
masas.
Balanza analítica con precisión de 0,0001 g
3.5.4.3.2 Materiales
2.0 Columna Thermo Keystone Betasil C18 HPLC Column 4.6 x 150mm
5µm
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Microjeringa de 10 L, marca Hamilton 701N, No. parte 9301-0021 o
equivalente.
Microjeringa de 25 L, marca Hamilton 702N, No. parte 9301-0022 o
equivalente.
Microjeringa de 500 L, marca Hamilton 750N, No. parte 9301-0034 o
equivalente.
Matraces volumétricos aforados de 1,5 y 10 mL con tapón esmerilado.
Viales de polipropileno o bien silanizados.
3.5.4.4 Reactivos y Materiales de Referencia
3.5.4.4.1.1 Reactivos
Acetonitrilo. Grado HPLC
Acetato de amonio
Metanol. Grado HPLC
Acetato de amonio 2 mM: Pesar 0.0288 g de acetato de amonio, disolverlos
en 100 mL de agua y llevar al aforo con agua en un matraz volumétrico de
200 mL.
3.5.4.4.1.2 Material de referencia
Estándares puros o en disolución certificados de:
Compuesto No. CAS
PFOS 1763-23-1
Disolución Patrón de 100 mg/L
Pesar 0.01 mg del STD de PFOS en un matraz aforado de 100 mL, disolver y llevar
al aforo con metanol. Guardar en frasco de polipropileno.
Disolución intermedia de 10 mg/L
A partir de la disolución patrón tomar 100 µL en un matraz aforado de 1 mL y
llevar al aforo con metanol.
Disoluciones de calibración
Prepare 5 niveles como mínimo de diferente concentración de las
disoluciones estándar para cada analito de interés en matraces volumétricos.
El punto de concentración más bajo de la curva de calibración debe ser 3 a 10
veces mayor que el valor del LDM. Las otras concentraciones corresponden
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al intervalo esperado de las concentraciones encontradas en las muestras
reales o bien estarán definidas por el intervalo lineal del detector.
Estándar de calibración de 1 mg/L. En un matraz aforado de 1 mL ponga 100
µL de la solución de 10 mg/L y afore a la marca con metanol.
Estándar de calibración de 0,5 mg/L. En un matraz de 1 mL ponga 50 µL de la
solución de 10 mg/L y afore a la marca con metanol.
Estándar de calibración de 0,25 mg/L. En un matraz de 1 ml ponga 25 µL de
la solución de 10 mg/L y afore a la marca con hexano, guarde esta disolución
en viales de 2 ml y etiquete.
Estándar de calibración de 0,1 mg/L. En un matraz aforado 1 mL ponga 100
µL de la solución de 1 mg/L y afore a la marca con metanol.
Estándar de calibración de 0,05 mg/L. En un matraz aforado de 1 mL ponga
50 µL de la solución de 1 mg/L y afore a la marca con metanol.
3.5.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptación y rechazo
Cada laboratorio que utilice este método está obligado a operar un programa de
control de calidad (CC) formal. Los requerimientos mínimos de este programa
consisten en una demostración inicial de la capacidad del laboratorio para cumplir con
las especificaciones de desempeño del método, además realizar análisis continuos de
muestras de control de calidad (MCC) para demostrar la precisión y exactitud
continuas y el análisis de blancos. El desempeño del laboratorio debe compararse
con los criterios aquí establecidos, con objeto de determinar si los resultados de los
análisis cumplen con las especificaciones de desempeño del método. El analista debe
hacer una demostración inicial de su habilidad para generar una exactitud y precisión
aceptables por este método.
Cada vez que se realice una modificación al método o que se cambie el analista
responsable de llevar a cabo está determinación, el analista designado debe repetir la
validación del método, si el cambio va a afectar el límite de detección del método
(LDM), el laboratorio debe demostrar que el nuevo LDM determinado es igual o más
bajo que el anterior para los analitos de interés.
No se permite el uso de técnicas determinativas alternativas y cambios que degraden
la ejecución del método. Si se utiliza una técnica analítica que no sea la especificada
en este método, dicha técnica debe tener especificaciones iguales o mejores que las
de las técnicas descritas en este documento para el analito de interés.
Es obligatorio para el laboratorio mantener los registros de las modificaciones hechas
a este método. Estos registros deben de incluir lo siguiente:
- La justificación por escrito de la necesidad de realizar modificaciones al
método para ese analito.
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- Los nombres, títulos, direcciones y número de teléfono de los analistas que
ejecutaron los análisis y modificaciones y el encargado de control de calidad que
presenció y verificó los análisis y sus modificaciones.
- Los resultados de todas las pruebas de CC del método modificado
comparadas con el método original, dichos datos deben de incluir todos los
parámetros mencionados en la sección de desempeño del método.
- La información escrita en las bitácoras tanto del equipo como del analista,
deben incluir los siguientes datos:
Identificación de la muestra
Número del lote analítico en el cual se analizó la muestra
Fecha del análisis
Procedimiento cronológico utilizado
Cantidad de muestra utilizada
Número de muestras de control de calidad analizadas en el lote
Trazabilidad de las calibraciones de los instrumentos de medición
Registros de bitácoras, en cintas de respaldo o en otros respaldos de
información
Información cruda reportada por los equipos o por los analistas
Evidencia de la aceptación o rechazo de los resultados del lote
analítico.
3.5.4.5.1 Verificación del equipo
La verificación del equipo debe realizarse de acuerdo a las instrucciones del
fabricante. En general:
Verificar que se tiene fase móvil necesaria en los reservorios.
Estabilizar el sistema con la columna por al menos 10 min.
Abrir la alimentación de nitrógeno
3.5.4.5.2 Verificación de la calibración inicial.
La curva de la calibración inicial deberá realizarse inyectando los estándares
de calibración preparados y se considera lineal, si el por ciento de la
desviación estándar relativa (%RSD) de los factores de calibración (CF) es
menor o igual al 20%, los cálculos se realizan con las siguientes ecuaciones:
Donde:
total de área
CF
masa inyectada en nanogramos
SDCF
% RSD x100
CF
168

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SDCF= Desviación estándar de los factores de calibración
CF = Promedio de los factores de calibración
La verificación de la calibración inicial puede también efectuarse mediante la
regresión por mínimos cuadrados, en la cual el criterio de aceptación es que
el factor de correlación "r 2 " sea mayor o igual a 0.997.
Si los criterios para el % RSD o r no se cumplen se procede a la revisión del
sistema cromatográfico y la preparación de las disoluciones de calibración.
Posteriormente la curva de calibración será vigente, si el análisis de un punto
intermedio de la curva no presenta una variación de la concentración mayor
al 15% y que será calculada de la siguiente manera.
Diferencia de
concentración
Donde
CC= concentración calculada
CT= concentración teórica
O si se utiliza el factor de calibración
Diferencia
porcentual
CC CT
CT
% D
x100
CFv CF
CF
% x100
Donde:
CFv= Es el factor de calibración de cada compuesto en el estándar de
verificación.
CF = Es la media del factor de calibración del compuesto de la
calibración inicial.
Si el criterio de aceptación para la diferencia porcentual es mayor al 30% se
procederá a la revisión del sistema cromatográfico y a la preparación de la
solución estándar utilizada.
3.5.4.5.3 Verificación de contaminación de los reactivos.
Los blancos de reactivos no deben presentar ningún tipo de contaminante al
tiempo de retención de los analitos, por lo que es importante que los
reactivos utilizados cumplan con las especificaciones mencionadas.
Si los resultados de los blancos no cumplen con el criterio mencionado, se debe
localizar la fuente de contaminación y extraer y analizar nuevamente las muestras
asociadas al blanco contaminado
Use también los blancos de reactivos para verificar la contaminación por arrastre de
muestras con altas concentraciones en análisis secuenciales
3.5.4.5.4 Verificación del lote analítico
169

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Por cada lote analítico de muestras analice al menos una muestra sintética
de control de calidad o preferentemente un material de referencia certificado
de la misma matriz de las muestras analizadas en el lote analítico, calcule el
% de recuperación del analito de la muestra control, los cuales deberán estar
dentro del rango de 80 120 %R, de no ser así se debe revisar la preparación
de la muestra control y el sistema cromatográfico. Realizar la corrección
necesaria y reanalizar la muestra control, si el problema persiste, se deben
reanalizar todas las muestras del lote analítico.
3.5.4.5.5 Verificación de interferencias de matriz
La verificación de interferencias por parte de la muestra se lleva a cabo
mediante las muestras fortificadas (MF). El laboratorio debe realizar el
análisis de muestras fortificadas (MF) y muestras duplicadas (MD), fortifique
una muestra por cada lote analítico o preferentemente una muestra de cada
tipo de matriz analizada en el lote. Las muestras fortificadas se deben
analizar cuando por las características de la muestra se sospeche de
interferencias de matriz o cuando sean parte de un plan de aseguramiento
de calidad de un proyecto.
Efecto de la matriz en el recobro del analito – Muestras fortificadas (MF):
Analice las muestras fortificadas:
Calcule el por ciento de recobro
El % de Recobro debe estar dentro 80 a 120 %R
Si los valores no cumplen con lo especificado, el sistema analítico está fuera
de control, determine las causas y corrija el problema, documente las
incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del resultado
analítico.
Efecto de la matriz en la precisión del analito – Precisión de la matriz
duplicada (MD): Analice una muestra duplicada por cada lote de muestra.
Calcule la diferencia porcentual relativa (DPR) entre la muestra y la
duplicada para cada analito, con la siguiente ecuación:
DPR
C1 C2
* 200
C1
C2
Donde:
C1 Concentración de la primera muestra
C2 concentración de la segunda muestra (muestra duplicada)
La DPR de cada analito obtenido entre la muestra y la duplicada debe
ser:

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Si los valores no cumplen con los especificados, el sistema analítico está
fuera de control, determine las causas y corrija el problema, documente las
incidencias y acciones correctivas e inclúyalas en el expediente del resultado
analítico.
Repita el análisis del lote asociado con la muestra y la duplicada que provocó
que la prueba del DPR fallara.
3.5.4.5.6 Verificación de la estabilidad de la curva de calibración
En cada lote analizado, si más de 10 muestras van a ser analizadas durante
el día, verifique la curva de calibración analizando un estándar de
concentración media del intervalo de trabajo al principio del lote y después
de cada 10 muestras.
Calcule el factor de calibración o la concentración para cada analito del
estándar de concentración media, y el por ciento de la diferencia (%D) con la
siguiente ecuación:
Donde:
FC1
FC2
Diferencia porcentual
x100
FC
1
FC1 = Factor de calibración promedio para cada plaguicida en la curva
de calibración, o la concentración nominal de del estándar de
verificación.
FC2 = Factor de calibración promedio para cada plaguicida en el
estándar de concentración media, o la concentración calculada en el
estándar de verificación.
El valor obtenido del % de la diferencia (%D) deberá ser menor al 15%, de
no ser así verifique su vigencia, revisé también el sistema cromatográfico y
determine la causa de la falla y corrija, de no lograr corregir la falla, recalibre
nuevamente el sistema.
3.5.4.5.7 Verificación de estándares surrogados.
NO APLICA
3.5.4.5.8 Verificación de estándares internos.
NO APLICA
3.4.4.5.9 Control de Calidad Estadístico – En esta sección se especifica
como debe realizarse el control de calidad estadístico obligatorio para este
método:
3.5.4.5.9.1 Preparación de las Muestras de Control de Calidad (MCC)
Prepare la MCC de la siguiente forma:
171

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Se deberá preparar la MCC de una fuente externa al laboratorio o ser
preparada de una fuente diferente a la utilizada en la curva de
calibración.
Prepare una disolución a una concentración que corresponda al
rango de trabajo del método.
NOTA: Se recomienda que el valor de las soluciones de MCC no sea
conocido por el analista con el objeto de asegurar la veracidad de la
medición
3.5.4.5.9.2 Gráficas de Control de Exactitud – El laboratorio debe
elaborar y mantener actualizadas las gráficas de control de exactitud
para cada lote analizado a partir de la demostración inicial de
desempeño.
Cada valor de exactitud obtenido de las MCC de cada lote analizado deberá
graficarse y deberá estar dentro de los límites de control superior e inferior (
3s).
Si un valor de exactitud es mayor a 3s, deberán rechazarse todos los
resultados del lote analítico, determine las causas y corrija los errores,
documente adecuadamente las incidencias y acciones correctivas, deberá
repetirse el análisis del lote en cuestión.
3.5.4.5.9.3 Gráficas de Control de Precisión – El laboratorio debe
elaborar y mantener actualizadas las gráficas de control de precisión
para cada lote analizado a partir de la demostración inicial de
desempeño
Determine los límites de control de la siguiente forma:
Donde:
Límite Superior de Control (LSC) = 3.27R
Límite Superior de Advertencia (LSA) = 2.51R
R = Promedio del DPR
Si un valor de precisión es mayor al LSC, deberán rechazarse todos
los resultados del lote analítico, determine las causas del problema y
corrija los errores, documente adecuadamente las incidencias y
acciones correctivas, deberá repetirse el análisis del lote en cuestión.
3.5.4.5.10 Validación de modificaciones del método o de métodos alternos
172

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Para validar las modificaciones que se efectúen a este método o para la
utilización de métodos alternos deberá seguirse el siguiente procedimiento:
Si se realizan modificaciones al presente método, deberán validarse
parcialmente.
Si se utiliza un método alterno cuya fuente sea un método estandarizado por
alguna Institución de carácter internacional o reconocida internacionalmente
(e. g. ASTM, USEPA, AOAC, Standard Methods, DIN, OMS Environment
Canada, etc.) también deberá validarse parcialmente.
Si se utiliza algún método no estandarizado, deberá evidenciarse, además
de los parámetros de validación parcial, los parámetros de Robustez,
Reproducibilidad y Especificidad los cuales solo pueden evaluarse mediante
estudios interlaboratorio.
Verifique diariamente el desempeño de todo el sistema analítico utilizando
los datos recolectados de análisis de blancos reactivos, solución verificadora
del desempeño del laboratorio.
Si hay un coleado excesivo de algún analito a comparación de los
cromatogramas del método, éste deberá corregirse. Los problemas de
coleado generalmente pueden rastrearse a sitios activos en la columna
cromatográfica, problemas en la instalación de la columna o mala operación
del detector.
Verifique la precisión con réplicas del análisis. Una pobre precisión
generalmente puede deberse a fugas, especialmente en el puerto de
inyección. Si el sistema cromatográfico se está comportando aparentemente
bien, pero con baja sensibilidad, puede ser necesario generar una nueva
curva o juego de factores de calibración para verificar las respuestas bajas
antes de buscar la fuente del problema.
3.5.4.5.11 Composición del lote analítico (para cada 10 muestras)
1 Blanco electrónico
2 Mezcla de Verificación
3 Blanco de Reactivos
4 Muestra de Control de Calidad 1 (MCC)
5 Muestra real No. 1
6 Muestra real No. 2
7 Muestra fortificada
8 Muestra fortificada duplicada (si se realizo)
9 Muestra real 5 a 10
10 Muestra de Verificación de la Calibración Continua.
3.5.4.5.12 Criterios de Aceptación y Rechazo
Verificación del Equipo
173

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Punto de verificación Criterio
Equipo libre de interferencias (blanco
electrónico)
Verificación de la Calibración Inicial
No deberá presenta picos a cualquier
tiempo de retención
Punto de verificación Criterio
Evaluación del % Diferencia de la concentración
de la Mezcla de Verificación, punto intermedio de
la curva de calibración.
Verificación de Contaminación de Reactivos
Menor al 30%
Punto de verificación Criterio
Blanco de reactivos
Verificación del Proceso Analítico
No deben presentar ningún tipo de
contaminante al tiempo de retención
de los analitos medidos
Punto de verificación Criterio
Muestra de control de calidad % de Recuperación de 70 / 130
Evaluación de muestras adicionadas duplicadas % DSR < 20%
Verificación de Interferencias de Matriz
Punto de verificación Criterio
Evaluación de muestras adicionadas % de Recuperación 70 / 130
Estabilidad de la Curva de Calibración
Punto de verificación Criterio
Evaluación de la Estándar de Verificación
(Intermedio)
3.5.4.6 Calibración
% de diferencia menor al 35%
174

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Se necesitan al menos 5 estándares de calibración. Uno debe contener analitos a una
concentración cercana, pero superior a la del límite práctico de cuantificación para
cada analito; los otros deben estar a concentraciones que cubran el intervalo
esperado en las muestras. Por ejemplo, si el LDM es 0.01µg/L y el LPC es de 0.05
µg/L, se espera que la muestra contenga concentraciones mayores de 0.05 µg/L.
Una vez establecidas las condiciones de operación inyecte un volumen adecuado de cada
estándar de calibración por triplicado y al final realice un promedio de las tres curvas y
agréguelo a la tabla de calibración del método.
Si la DSR de cada analito es 20%, entonces la respuesta del instrumento es
considerada lineal y el factor de calibración promedio FC puede utilizarse para la
cuantificación de los resultados de las muestras. Si la DSR es mayor que 20%, entonces
no puede asumirse linealidad y se debe repetir la curva de calibración.
Si se utiliza regresión lineal por mínimos cuadrados, deberá obtener el factor de
correlación “r 2 ” para cada analito, el cual deberá ser mayor o igual a 0.997 si “r” es
menor a este valor, la curva de calibración no es lineal y deberá verificarse la
preparación de los estándares de calibración y el sistema cromatográfico y repetir la
calibración.
3.5.4.7 Procedimiento Analítico
3.5.4.7.1 Análisis de los extractos de las muestras
Condiciones cromatográficas:
Temperatura columna 40 °C
Fase móvil A Acetato de amonio 2 mM
Fase móvil B Metanol
Gradiente:
Tiempo (min) % FM B % FM A
0 45 55
7.5 90 10
11 90 10
11.5 45 55
Volumen inyección 10 µL
Flujo 3 mL/min
MS Ionización ESI negativo
Modo MS SIM
Voltaje del capilar 3 kV
Temperatura de la fuente 150 ºC
Temperatura desolvatacion 350 ºC
Flujo del gas 140 L/min
Flujo del gas desolvatacion 460 L/min
m/z monitoreada 499
175

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Elabore la secuencia de análisis de acuerdo a lo indicado en el punto de
composición del lote analítico.
Inicie el análisis.
Inyecte un volumen de10 L del extracto de la muestra o estándar en el
cromatógrafo de gases. Registre el volumen final del extracto.
Verifique que se cumple con lo especificado en el inciso de control de calidad y
criterios de aceptación y rechazo.
Si la respuesta de cualquier ion cuantitativo excede la respuesta del intervalo de
calibración, diluya el extracto y reanalice.
3.5.4.7.2 Identificación de los analitos
La determinación cuantitativa del PFOS se basa en que la curva de calibración
esta hecha con los valores obtenidos de las áreas del ion cuantificador vs
concentración, por lo que las muestras que presenten picos al tiempo de
retención del analito se les realiza la búsqueda del ion cuantificador y si esta
presente el ion se obtiene su concentración con base en la ecuación obtenida
de la regresión lineal de la curva de calibración.
3.5.4.7.3 Cálculos
3.5.4.7.3.1 AGUA
Calcule la concentración como:
Donde
Volumen
final extracto
Concentracióng / L
C
i
Volumen de muestra
Ci = concentración obtenida del cromatograma
Hay software en los cuales es posible introducir el factor de corrección para obtener el
resultado expresado en muestra.
3.5.4.7.3.3 SUELOS Y SEDIMENTOS
Calcule la concentración como:
Volumen
final extracto
Concentracióng / Kg
C
i
Peso de muestra
Donde
Ci = concentración obtenida del cromatograma
176

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Hay software en los cuales es posible introducir el factor de corrección para obtener el
resultado expresado en muestra.
3.5.4.7.3.4 ALIMENTOS PROCESADOS, SIN PROCESAR, TEJIDOS Y
ALIMENTOS
Volumen
final extracto
Concentracióng / Kg
C
i
Peso de muestra
Donde
Ci = concentración obtenida del cromatograma
Hay software en los cuales es posible introducir el factor de corrección para obtener el
resultado expresado en muestra.
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3.6 METALES Y METALOIDES (EXCEPTO MERCURIO)
El principio de este método se basa en la digestión ácida de las muestras y el análisis por
Espectroscopía de Emisión Atómica con Plasma Inductivamente Acoplado (ICP/AES)
NOTA: Este método está basado en su desempeño, se permite que el laboratorio omita cualquier
paso o modifique cualquier procedimiento, suponiendo que todos los requerimientos de
desempeño especificados se cumplan. Al laboratorio no se le permite omitir cualquier punto de
control de calidad, ni los parámetros que se especifiquen como “NO MODIFICABLES”. Los
términos “debe”, “puede” y “deberá” son mencionados a través de los métodos y están destinados
a ilustrar la importancia de los procedimientos para producir datos verificables en los rangos de
trabajo del método. El término “debe” es usado para indicar que los desarrolladores de este
método encontraron ciertos procedimientos esenciales en muestras analizadas exitosamente; de
todas maneras, estos procedimientos pueden ser modificados u omitidos si el laboratorio puede
demostrar fehacientemente que la calidad de los resultados no resulta afectada.
PARÁMETROS NO MODIFICABLES
Espectrómetro de Emisión Atómica con Plasma Inductivamente Acoplado (ICP/AES)
3.6.1 Aplicación y Alcances
3.6.1.1 Propósito: La espectroscopía de Emisión Atómica con Plasma Inductivamente
Acoplado (ICP/AES) es aplicable para la determinación de concentraciones de µg/L para un
gran número de elementos (metálicos y no metálicos). Se requiere una digestión ácida
previa al análisis y filtración para analizar los metales totales a analizar.
De acuerdo a la matriz analizada se utilizan diferentes métodos de digestión para solubilizar
los metales en las muestras antes de su análisis instrumental.
3.6.1.2 Analitos: El método es aplicable a los siguientes analitos:
Ag, As, Ba, Be, Cd, Ca, Cr, Cu, Co, Fe, Ni, Mg, Mn, Mo, Pb, Na, Ni, Se, Sb, Tl, V y Zn.
Este método puede ser aplicado a otros elementos, se debe validar la aplicación para cada
uno de los analitos que quiera ser analizado.
Este método no puede ser utilizado para la determinación de Mercurio .
3.6.1.3 Matrices: Este método es aplicable para el análisis de metales en las siguientes
matrices ambientales:
Aire Ambiente
Suelos
Sedimentos Marinos
Sedimentos Epicontinentales
Aguas Estaurinas y de Lagunas Costeras
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Aguas Superficiales Epicontinentales
Aguas Subterráneas
Alimentos procesados, sin procesar, organismos y tejidos animales
Sangre
Leche Materna
3.6.1.4 Limitaciones: Este método está restringido para utilizarse sólo bajo la supervisión de analistas
expertos en el uso de ICP/AES y en la interpretación de sus resultados. Cada analista debe demostrar
la habilidad para generar resultados aceptables con este método.
3.6.2 Resumen
Una porción homogenizada de una muestra líquida o sólida es pesada con exactitud para su
procesamiento. Para un análisis de elementos totales, los analitos son solubilizados o digeridos
utilizando el método de preparación de muestras apropiado, quedando esta lista para ser
analizada por ICP-AES utilizando un instrumento secuencial de plasma axial, dicho instrumento
mide espectros de emisión característicos por espectrometría óptica. Los espectros son
dispersados por una rejilla de difracción y las intensidades de las líneas de emisión son
monitoreadas por dispositivos fotosensitivos.
AIRE AMBIENTE
Se determina la concentración de partículas suspendidas totales en el aire ambiente, por
medio de un muestreador de alto volumen adecuadamente localizado, que succiona a
través de un filtro una cantidad entre 1 600 y 2 400 m 3 de aire ambiente, a un flujo entre
1,13 y 1,70 m 3 /min durante un período de muestreo de 24 hrs. La velocidad de flujo del aire
ambiente y la geometría del muestreador son tales que favorecen la recolección de
partículas hasta de 50 micrómetros (µm) de diámetro aerodinámico, dependiendo de la
velocidad del viento y su dirección. Los filtros usados deben tener una eficiencia de
recolección mínima del 99 % para partículas de 0.3 µm.
El filtro se pesa en el laboratorio bajo condiciones de humedad y temperatura controladas,
antes y después de su uso, para determinar su ganancia neta de peso (masa). El volumen
total de aire muestreado, corregido a las condiciones de referencia, se determina a partir
del flujo de aire ambiente medido y del tiempo de muestreo. La concentración de partículas
suspendidas totales en el aire ambiente se calcula dividiendo la masa de las partículas
recolectadas entre el volumen de aire muestreado y se expresa en microgramos por metro
cúbico patrón (µg/ m 3 ptn), corregidos a las condiciones de referencia.
En muestras tomadas a temperaturas y presiones barométricas que difieren
significativamente de las condiciones de referencia, las concentraciones corregidas pueden
variar de las concentraciones reales (µg/ m 3 real), sobre todo a elevadas altitudes. Las
concentraciones reales de partículas pueden ser calculadas a partir de las concentraciones
corregidas, utilizando las temperaturas y presiones que se hayan presentado durante el
período de muestreo.
El filtro es dividido en tiras y se digiere una de ellas por el método de microondas, se afora a
un volumen conocido y de analiza por ICP/AES para metales y metaloides..
AGUAS (Superficiales, Epicontinentales y Subterráneas)
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Una alícuota representativa de 45 mL de muestra acuosa es digerida en microondas con 4
mL de ácido nítrico concentrado y 1 mL de ácido clorhídrico concentrado; en vasos de
digestión de teflón (PFA o TFM compuestos) s durante 20 minutos. Posteriormente al
proceso de digestión, la muestra es enfriada, filtrada y colocada en un tubo limpio para su
posterior análisis por ICP/AES.
AGUAS MARINAS, ESTAURINA Y SALMUERAS
Este método es usado para preconcentrar elementos traza usando una resina quelatante
de iminodiacetato funcionalizada. Seguida de una solubilización ácida, la muestra es
buffereada y pasada por la columna quelatante; los grupos metálicos I y II, al igual que los
aniones, son separados selectivamente para el análisis por elusión con acetato de amonio
a pH 5,5. Los analitos son subsecuentemente eluídos en una matriz simplificada que
consiste en ácido nítrico 0,75 M.
SUELO Y SEDIMENTOS
Una alícuota representativa de 1,0 g de muestra se digiere en microondas con 9 mL de
ácido nítrico concentrado y 1,0 mL de ácido clorhídrico concentrado, para matrices
complejas no pese más de 1,0 g de muestra adicione 9 mL de ácido nítrico concentrado y 3
mL de ácido fluorhídrico en vasos de digestión de teflón (PFA o TFM compuestos) durante
10 min. Posteriormente al proceso de digestión, la muestra es enfriada, filtrada y colocada
en un tubo limpio para su posterior análisis por ICP/AES.
ORGANISMOS, TEJIDOS ANIMALES, ALIMENTOS PROCESADOS Y SIN PROCESAR
Una alícuota representativa de 0.25 - 1,0 g de muestra se digiere en microondas con 8 mL
de ácido nítrico concentrad y añadir 1 mL de H202 al 30% en vasos de digestión de teflón
(PFA o TFM compuestos) durante 10 min. Posteriormente al proceso de digestión, la
muestra es enfriada, filtrada y colocada en un tubo limpio para su posterior análisis por
ICP/AES.
SANGRE HUMANA
La muestra se digiere con HNO3:HClO4:H2SO4 (3:1:1), se reduce su volumen a 1 mL y se
deja enfriar. Las muestras son analizadas por ICP/AES.
LECHE HUMANA
Una alícuota representativa de leche se mezcla ácido nítrico, se calienta,, una vez fría se
adicionan ácido perclórico concentrado y nuevamente se somete la mezcla a
calentamiento. Se añade H202 al 30% y se calienta a 70ºC, finalmente se lleva a un
volumen de 10mL con agua doblemente destilada y agua desionizada.
La determinación de los metales en la muestra se realiza mediante ICP/AES.
3.6.3 Procedimientos de Digestión de muestras
3.6.3.1 Interferencias generales
180

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Solventes, reactivos, material de vidrio, etc. pudieran causar interferencias. Todo lo
mencionado anteriormente debe demostrarse que no aportan interferencia alguna.
La digestión de muestras con alto contenido de orgánicos puede generar presiones
altas debido a los gases generados durante la digestión. Lo anterior pudiera causar
desfogue en los liners teniendo el riesgo de perdida de los analitos.
Muchas muestras pueden disolverse con este método; sin embargo cuando la
muestra contiene sólidos suspendidos tales como compuestos refractarios (como
dióxido de silicio, dióxido de titanio, alumina y otros óxidos) estos pudieran
secuestrar analitos target. Los enlaces con estos elementos pueden considerarse
como “no móviles” en el ambiente por lo que son excluidos de la mayoría de los
mecanismos de transporte de contaminantes acuosos.
Muestras altamente reactivas o contaminadas pudieran requerir dilución antes de su
análisis. Muestras altamente reactivas pueden requerir pre-digestión para minimizar
reacciones vigorosas
En la preparación de muestras para aire ambiente puede presentarse la pérdida de
partículas volátiles. Las partículas volátiles recogidas en el filtro pueden perderse
durante el muestreo subsecuente o durante el envío posterior, durante el
almacenamiento del filtro antes de pesarse o después del muestreo. Aunque tales
pérdidas son en gran medida inevitables, para reducir el error, el filtro se debe pesar
tan pronto como sea posible después del muestreo.
Partículas artificiales. Se pueden llegar a formar partículas a partir de los gases
ácidos de la muestra de aire y el material alcalino del filtro, lo cual incrementaría la
concentración real de partículas suspendidas totales. De ocurrir esto, generalmente
se presenta al inicio del período de muestreo y es una función del pH del filtro y la
presencia de los gases ácidos. Este efecto cobra importancia cuando se presentan
partículas de peso relativamente pequeño.
Los filtros de fibra de vidrio son relativamente estables ante los cambios de la
humedad relativa, pero las partículas colectadas pueden ser higroscópicas. El
procedimiento de acondicionamiento de humedad puede minimizar, pero no eliminar
completamente el error debido a ésta.
3.6.3.2 Seguridad general
La carcinogenidad y toxicidad de los químicos utilizados en este método no ha sido
determinadas con precisión; de todas maneras; cada sustancia química debe ser tratada
como potencial peligro a la salud. La exposición a estas sustancias químicas debe ser
reducida al menor nivel posible. Se sugiere que el laboratorio realice monitoreos de higiene
ocupacional de cada reactivo a los que pueda estar expuesto el analista y que dichos
resultados estén disponibles para los analistas.
La acidificación de las muestras que contienen materiales reactivos puede ocasionar
la liberación de gases tóxicos, como cianuros o sulfuros. La acidificación debe
realizarse en una campana de extracción.
Los ácidos y bases concentradas causan severas quemaduras e irritaciones en la piel. Debe utilizarse
ropa protectora tal como: Batas, guantes y lentes de seguridad cuando se manejan estos productos
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químicos.
Este método puede no mencionar todas las precauciones de seguridad asociadas con su
uso. El laboratorio es responsable de mantener un ambiente de trabajo seguro y un archivo
de las normas de seguridad respecto a la exposición y manejo seguro de las sustancias
químicas especificadas en este método. Debe tenerse un archivo de referencias de las
hojas de información de seguridad el cual debe estar disponible a todo el personal
involucrado en estos análisis.
3.6.3.3 Matrices
3.6.3.3.1 Aire Ambiente
3.6.3.3.1.1 Equipo y Materiales
Solo se mencionan los equipos y materiales que no son de uso común en el
laboratorio analítico.
3.6.3.3.1.1.1 Equipo
Muestreador de aire de alto volumen (HV)
Filtros de medio o super alta eficiencia de recolección para partículas muy
pequeñas ( tamaño submicrometro)
Cámara ambiental de acondicionamiento para filtros: La temperatura
controlada debe ser entre 15 y 30ºC con un máximo de ± 3ºC de variación
durante el período de equilibrio. La humedad debe controlarse en un nivel
menor del 50% de humedad relativa constante dentro de ± 5%.
Balanza analítica: La sensibilidad de la balanza analítica debe ser de 0.01
mg. La cámara de pesado debe estar diseñada para que pueda ser
introducido un filtro sin doblar
Unidad luminosa de inspección. La fuente de luz debe ser similar a la de un
visor de películas de rayos X para la inspección de los filtros.
Se debe disponer de un foliador para numerar los filtros antes de que se
coloquen en la cámara de acondicionamiento ambiental, en caso de no
estar numerados por el fabricante.
La unidad de microondas marca CEM modelo MARS-5, MARSX o equivalente
que proporcione una energía de 1600 W, que pueda programarse dentro de + 10 W
de la energía requerida. Y que cuente con sensor de temperatura y presión y un
controlador de microondas.
El sistema requiere de vasos de digestión de teflón PFA marca CEM modelo ACV,
HP 500 de 100 mL de capacidad o vasos marsxpress de 75 mL de capacidad o
equivalentes, capaces de resistir presiones de 500 psi y una temperatura máxima de
210ºC.
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Una tornamesa giratoria es empleada para asegurar la distribución homogénea de la
radiación dentro de la unidad.
PRECAUCIONES: Deben utilizarse las recomendaciones de operación del
modelo y del fabricante del equipo de microondas. Las especificaciones de
este método y requerimientos del análisis deben consultarse con las
especificaciones del manual del equipo.
3.6.3.3.1.1.2 Materiales:
Probetas graduadas de 50 o 100 mL de capacidad o equivalente.
Papel filtro, cuantitativo Whatman No. 41 o equivalente.
Embudos para filtración de polipropileno.
Matraz Erlenmeyer de 125 mL
3.6.3.3.1.2 Reactivos y Materiales de Referencia
A menos que otra cosa se indique, los reactivos que requiere el método deben ser tipo ACS
grado reactivo
Agua Reactivo – A menos que otra forma se indique, el agua utilizada debe
ser agua grado reactivo tipo II ASTM.
Ácido nítrico concentrado, HNO3 J.T. Baker R04 o equivalente.
Ácido Clorhídrico concentrado, HCl J.T. Baker R02 o equivalente.
Acido Fluorhídrico concentrado, HF SIGMA-ALDRICH o equivalente
3.6.3.3.1.3 Procedimiento de digestión de Muestra
3.6.3.3.1.3.1 preparación del filtro previo su muestreo
Se debe inspeccionar a contra luz cada filtro para detectar posibles
orificios u otras imperfecciones; deben descartarse los filtros con
imperfecciones evidentes. Deben foliarse cada filtro en dos orillas
opuestas de la cara que no va a ser expuesta, todo esto antes de
someter los filtros al proceso de estabilización.
Se debe poner el cuarto de balazas a las condiciones de humedad
relativa y temperatura que se registren en la camara de
acondicionamiento. Los filtros son colocados en la camara de
acondicionamiento registrando temperatura y humedad.
Acondicionar los filtros en la camara ambiental con una temperatura
controlada de 15 a 30 ºC con un máximo de variación de ± 3ºC de
variación y con una humedad relativa de 50% ± 5% por 24 horas.
Pasado el tiempo poner el cuarto de balanzas a las condiciones de
temperatura y humedad relativa de la camara y pesar cada uno de los
filtros registrando su peso (Gi). Guardarlos individualmente en sobres.
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3.6.3.3.1.3.2 Preparación del filtro después del muestreo.
Permita que el filtro alcance el equilibrio a condiciones ambientales por
lo menos 24 horas.
Inmediatamente después del acondicionamiento, pese el filtro llevando
la fracción al miligramo más cercano y registrar el peso neto del filtro (Gf)
junto con el número del filtro.
Determine el peso neto de partículas retenidas en el filtro por diferencia
entre el peso final y el peso inicial del filtro.
3.6.3.3.1.3.3 Digestión de las muestras
Corte el filtro en 12 tiras de 2.5 cm x 20 cm (20 x 25 cm) usando guantes
de vinilo y un molde prehecho de plexiglas duro o acrílico lavado con
ácido antes de cada uso y una navaja.
Enrolle cada tira del filtro e introdúzcala con cuidado al liner y agregue
15 mL de HNO3 3M (el ácido debe cubrir totalmente el filtro enrollado),
ponga el liner de microondas y agregue 31 mL de agua reactivo, tape el
liner y péselo con una exactitud de 0,01 g. Digiera a W durante 23 min.
(es importante digerir los 12 tubos) si se usan menos tubos es necesario
ajustar la potencia del horno para que sea equivalente (ver instructivo
específico de cada equipo para realizar su calibración).
Al terminar la digestión, enfríe los vasos digestores, pese los vasos y la
diferencia entre el peso inicial y el final no debe ser mayor a 0,1 g, si es
mayor repita la digestión ya que existió alguna fuga en el vaso digestor.
Retire el tubo de centrífuga y agregue 10 mL de agua reactivo, tape el
tubo y agite en vortex por 3 minutos, por medio de una jeringa de nylon o
teflón tome 10 mL del digerido en un tubo nuevo de plástico y la muestra
se entrega para análisis por ICP/AES.
3.6.3.3.2 Aguas superficiales epicontinentales y subterráneas
3.6.3.3.2.1 Equipo y Materiales
Sólo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este método
analítico.
Todo el material volumétrico utilizado en éste método debe ser clase “A” o estar
verificada su calibración.
3.6.3.3.2.1.1 Equipo
La unidad de microondas marca CEM modelo MARS-5, MARSX o equivalente
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que proporcione una energía de 1600 W, que pueda programarse dentro de + 10 W
de la energía requerida. Y que cuente con sensor de temperatura y presión y un
controlador de microondas.
El sistema requiere de vasos de digestión de teflón PFA marca CEM modelo ACV,
HP 500 de 100 mL de capacidad o vasos marsxpress de 75 mL de capacidad o
equivalentes, capaces de resistir presiones de 500 psi y una temperatura máxima de
210ºC.
Una tornamesa giratoria es empleada para asegurar la distribución homogénea de la
radiación dentro de la unidad.
PRECAUCIONES: Deben utilizarse las recomendaciones de operación del
modelo y del fabricante del equipo de microondas. Las especificaciones de
este método y requerimientos del análisis deben consultarse con las
especificaciones del manual del equipo.
Balanza analítica con precisión de 0,1 mg.
3.6.3.3.2.1.2 Materiales:
Probetas graduadas de 50 o 100 mL de capacidad o equivalente.
Papel filtro, cuantitativo Whatman No. 41 o equivalente.
Embudos para filtración de polipropileno.
Matraz Erlenmeyer de 125 mL.
3.6.3.3.2.2 Reactivos y Materiales de Referencia
A menos que otra cosa se indique, los reactivos que requiere el método deben ser tipo ACS
grado reactivo
Agua Reactivo – A menos que otra forma se indique, el agua utilizada debe
ser agua grado reactivo tipo II ASTM.
Ácido nítrico concentrado, HNO3 J.T. Baker R04 o equivalente.
Ácido Clorhídrico concentrado, HCl J.T. Baker R02 o equivalente.
Ácido Fluorhídrico concentrado, HF SIGMA-ALDRICH o equivalente.
3.6.3.3.2.3 Digestión de las muestras
3.6.3.3.2.3.1 Lavado de vasos
Agregar 25 mL de agua desionizada a cada uno de los vasos de
digestión; adicione 3 mL de ácido nítrico concentrado a cada uno de los
vasos, tape el vaso. Deposite los vasos en el carrusel del microondas
Lave de acuerdo al programa
ETAPA POTENCIA % RAMPA PSI TEMP. MANT.
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1
1 a 3 vasos 300 W
4 a 6 vasos 600 W
7 a 14 vasos 1200 W
100 10:00 100 200ºC 5:00
Permita que los vasos se enfríen al menos 5 minutos en la unidad de
microondas. Destape cuidadosamente y enjuague con agua
desionizada.
3.6.3.3.2.3.2 Digestión ácida por microondas
Mida una alícuota de 45 mL de muestra homogénea, esta alícuota es
depositada dentro de los vasos de digestión. En el proceso un blanco de
reactivos es tratado en la misma manera que las muestras junto con
muestras duplicadas.
Adicione 4 mL de HNO3 y 1 mL de HCl a cada vaso, tape el vaso.
Deposite los vasos en el carrusel del microondas.
NOTA: Durante el proceso pueden ser liberados óxidos de nitrógeno, por lo cual
debe asegurarse que el sistema de ventilación funcione apropiadamente.
La distribución de los vasos en el carrusel debe estar siempre en
equilibrio. El propósito de los blancos de muestra es para darle un
balance a la energía seleccionada.
El programa de microondas para la secuencia de las muestras debe de
ir a 160°C ± 5ºC en 10 min y permitir un ascenso lento de 160°C a
170°C durante los siguientes 10 min.
ETAPA POTENCIA
1 a 3 vasos 300 W
% RAMPA PSI ºC MAN
1 4 a 6 vasos 600 W
7 a 14 vasos 1200 W
1 a 3 vasos 300 W
100 10:00 250 160 0:00
2 4 a 6 vasos 600 W
7 a 14 vasos 1200 W
100 10:00 250 170 00:00
-Al final del programa del microondas permita que los vasos se enfríen al
menos 5 min en la unidad antes de remover el carrusel, para evitar
posibles daños en el sistema de ventilación de los vasos. Asegúrese que
están frías para evitar pérdidas de mercurio.
NOTA: Las muestras pueden enfriarse fuera de la unidad, si se desea que el
enfriado sea más rápido se puede meter en refrigeración.
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Complete la preparación de la muestra destapando cuidadosamente
cada vaso dentro de la campana de extracción. Lleve la muestra a un
volumen final de 50 mL, si la muestra digerida contiene partículas las
cuales puedan obstruir el nebulizador, pase la muestra a través de filtros
Whatman No. 41 ó equivalente y transfiérala a un tubo previamente
etiquetado..
3.6.3.3.3 Aguas marinas, estaurinas y lagunas costeras
3.6.3.3.3.1 Equipo y Materiales
3.6.3.3.3.1.1 Equipo
Balanzas – Balanza analítica, con presición de ± 0,1 mg, balanza de
platillos principales con presición de ± 0,01g.
Parrilla de calentamiento.
Centrífuga.
Horno de secado – capaz de mantener 105 ± 5 ºC.
pHímetro – resolución de ± 0,1 unidades de pH.
Sistema de Preconcentración – no debe tener partes metálicas donde
tenga contacto con el analito
Columna. Resina quelante de iminodiacetato con macroporos
Sistema de bombeo de eluyente (P1
Bombas auxiliares – de bombeo con pistón (P2), acarreadora (P3) y
peristáltica (P4).
Válvulas de Control – Inert Double Snack, neumática de cuatro vías.
3.6.3.3.3.1.2 Materiales
Pipeta automática –capaz de dar volúmenes de 10 a 2500 μL, con un
surtidor libre de metal y puntas desechables.
Vasos de precipitado de 250 mL
Vidrios de reloj
3.6.3.3.3.2 Reactivos y Materiales de Referencia
Debido a la alta sensibilidad del método, todos los reactivos deben ser de ultra alta
pureza y agua ASTM tipo I a menos que se especifique lo contrario.
Ácido acético glacial.
Hidróxido de amonio (20%).
Buffer de acetato de amonio 1M, pH 5,5 – añadir 58mL de ácido acético
glacial a 600mL de agua tipo ASTM. Agregar 65mL de hidróxido de amonio
al 20% y mezclar. Revisar el pH de la disolución . Ajustar el pH en 5,5 ± 0,1
con pequeños volúmenes de acido acético o hidróxido de amonio si es
necesario. Enfriar y diluir a 1L con agua ASTM.
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Buffer de acetato de amonio 2M, pH 5,5 – preparar igual al punto anterior,
usando 116 mL de ácido acético glacial y 130 mL de hidróxido de amonio
al 20%, y diluirlo a 1L con agua ASTM.
NOTA: Las soluciones buffer de acetato de amonio pueden ser purificadas más
adelante haciéndolas pasar a través de una columna quelatante a un flujo de 5
mL/min.
Ácido nítrico concentrado.
Ácido oxálico hidratado 0,2 M
3.6.3.3.3.3 Digestión de las Muestras
A 100mL de muestra, agregar 2mL (1-1) de ácido nítrico. Colocarlo en la parrilla
para evaporar la solución. La parrilla debe estar colocada en una campana y dejar
evaporar a una temperatura no mayor a 85ºC. El vaso debe ser cubierto con un
vidrio de reloj para evitar la contaminación de la muestra con el ambiente de la
campana. Reducir el volumen de la alícuota de la muestra a 20 mL.
NOTA: Para un calentamiento apropiado, ajustar el control de temperatura de la
parrilla de forma tal que un vaso descubierto que contenga 50mL de agua puesto en
el centro de la parrilla pueda ser mantenido a una temperatura de aproximadamente
pero no mayor a 85ºC (Una vez que se coloca el vaso cubierto con el vidrio de reloj
la temperatura aumentará a aproximadamente 95ºC)
Dejar enfriar el vaso, y transferir cuantitativamente la muestra a un matraz
volumétrico de 100mL y diluir al volumen con agua, tapar y mezclar.
Permitir a cualquier material no disuelto reposar toda la noche o centrifugar una
porción de la muestra (si después de centrifugar o dejar reposar toda la noche, la
muestra contiene sólidos suspendidos, una porción de la muestra debe ser filtrada
antes del análisis. Tener cuidado en la filtración para evitar cualquier tipo de
contaminación). Debido a los efectos de varias matrices en la estabilidad de las
muestras diluidas, todos los análisis deben ser realizados tan pronto como sea
posible después de la preparación completa.
Antes de usar el sistema de preconcentración debe ser limpiado y descontaminado
usando ácido oxálico 0,2M. Colocar aproximadamente 500mL de ácido oxálico
0,2M en los contenedores de la solución eluyente y correr la muestra con ácido
oxálico 0,2M usando la bomba de la muestra a un flujo de 3 – 5mL/min. Con el
sistema de preconcentración desconectado del ICP-MS, usar el programa de
secuencia como se muestra en la tabla siguiente para limpiar el sistema completo
con ácido oxálico. Repetir la limpieza 3 veces.
Programa de Secuencia de Bombeo de Eluyente para la Preconcentración de
Elementos Traza.
Tiempo
(min)
Flujo
(mL/min)
Eluyente
Válvula A,
B
Válvula C
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0,0 4,0 1M Acetato de Amonio Abierta Abierta
4,5 4,0 1,25M Ácido Nítrico Abierta Abierta
5,1 1,0 1,25M Ácido Nítrico Cerrada Abierta
5,5 1,0 1,25M Ácido Nítrico Cerrada Cerrada
7,5 4,0 1,25M Ácido Nítrico Cerrada Abierta
8,0 4,0 1M Acetato de Amonio Cerrada Abierta
10,0 4,0 1,25M Ácido Nítrico Cerrada Abierta
11,0 4,0 1M Acetato de Amonio Cerrada Abierta
12.5 0.0 Cerrada Abierta
Repetir la secuencia usando ácido nítrico 1,25M, y después usando agua ASTM en
lugar del ácido oxálico 0,2M.
Enjuague los recipientes con agua ASTM, llénelos con los reactivos designados y
corra la secuencia de la tabla anterior. Inicie el ICP-MS y reconecte el sistema de
preconcentración.
Con las válvulas A y B cerradas y la válvula C abierta, corra la muestra hacia los
desechos con la bomba (P4) por 4 minutos a un flujo de 4mL/min. Encienda la
bomba acarreadora (P3) y bombeé ácido nítrico 1% al nebulizador del ICP-MS a un
flujo de 0,8 – 1,0mL/min. Encienda la bomba del buffer de acetato de amonio 2M
(P2) a un flujo de 1,0mL/min.
La preconcentración de la muestra puede ser corrida a través de una secuencia de
bombeo de eluyente como en la tabla anterior. El tiempo exacto de esta secuencia
debe ser modificada de acuerdo al volumen interno y al hardware.
Inyección de la muestra – con las válvulas A, B y C abiertas, correr la muestra hacia
la columna usando acetato de amonio 1M por 4,5min a 4,0mL/min. Los analitos son
retenidos en la columna mientras que la mayor parte de la matriz es llevada a los
desechos,
Elusión de los analitos – cierre las válvulas A y B y comience la elusión de los
analitos b
bombeando ácido nítrico 1,25M a través de la columna a 4,0mL/min; cierre la
válvula C y bombeé los analitos eluídos al ICP-MS a 1,0mL/min, e inicie el software.
Reacondicionamiento de la columna – abra la válvula C para dirigir el eluyente de la
columna hacia los residuos, y bombeé ácido nítrico 1,25 M, acetato de amonio 1 M,
ácido nítrico 1,25 M y acetato de amonio 1 M alternadamente a través de la columna
a 4,0 mL/min. Durante este proceso, la siguiente muestra puede ser cargada usando
la bomba P4.
Repetir la secuencia para cada muestra a ser analizada. Al final de las corridas
analíticas, dejar la columna llena del buffer de acetato de amonio 1M hasta el
siguiente uso.
NOTA: Las muestras que hayan sido concentradas de más, deben ser diluidas con
HNO3 al 1% y reanalizadas.
3.6.3.3.4 Suelos
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3.6.3.3.4.1 Equipo y Materiales
Sólo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este método
analítico.
Todo el material volumétrico utilizado en éste método debe ser clase “A” o estar
verificada su calibración.
3.6.3.3.4.1.1 Equipo
La unidad de microondas marca CEM modelo MARS-5, MARSX o equivalente
que proporcione una energía de 1600 W, que pueda programarse dentro de + 10 W
de la energía requerida. Y que cuente con sensor de temperatura y presión y un
controlador de microondas.
El sistema requiere de vasos de digestión de teflón PFA marca CEM modelo ACV,
HP 500 de 100 mL de capacidad o vasos marsxpress de 75 mL de capacidad o
equivalentes, capaces de resistir presiones de 500 psi y una temperatura máxima de
210ºC.
Una tornamesa giratoria es empleada para asegurar la distribución homogénea de la
radiación dentro de la unidad.
PRECAUCIONES: Deben utilizarse las recomendaciones de operación del
modelo y del fabricante del equipo de microondas. Las especificaciones de
este método y requerimientos del análisis deben consultarse con las
especificaciones del manual del equipo.
Balanza analítica con precisión de 0,1 mg.
3.6.3.3.4.1.2 Materiales:
Probetas graduadas de 50 o 100 mL de capacidad o equivalente.
Papel filtro, cuantitativo Whatman No. 41 o equivalente.
Embudos para filtración de polipropileno.
Matraz Erlenmeyer de 125 mL.
3.6.3.3.4.2 Reactivos y Materiales de Referencia
A menos que otra cosa se indique, los reactivos que requiere el método deben ser tipo ACS
grado reactivo
Agua Reactivo – A menos que otra forma se indique, el agua utilizada debe
ser agua grado reactivo tipo II ASTM.
Ácido nítrico concentrado, HNO3 J.T. Baker R04 o equivalente.
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Ácido Clorhídrico concentrado, HCl J.T. Baker R02 o equivalente.
Ácido Fluorhídrico concentrado, HF SIGMA-ALDRICH o equivalente.
Peroxido de Hidrogeno (H2O2)
3.6.3.3.4.3 Digestión de las muestras
3.6.3.3.4.3.1 Lavado de vasos
Agregar 25 mL de agua desionizada a cada uno de los vasos de
digestión., adicione 3 mL de ácido nítrico concentrado a cada uno de los
vasos, tape el vaso.
Deposite los vasos en el carrusel del microondas
Lave de acuerdo al programa
ETAPA POTENCIA
1 a 3 vasos 300 W
% RAMPA PSI TEMP. MANT.
1 4 a 6 vasos 600 W
7 a 14 vasos 1200 W
100 10:00 100 200ºC 5:00
Permita que los vasos se enfríen al menos 5 minutos en la unidad de
microondas y destape cuidadosamente y enjuague con agua desionizada.
3.6.3.3.4.3.2 Digestión ácida por microondas
Mezcle bien la muestra, pese aproximadamente 0,5 g en un vaso de digestión,
adicione 9 mL de ácido nítrico concentrado y 1 mL de ácido clorhídrico
concentrado. Si ocurre una reacción vigorosa espere a que la reacción se detenga
antes de cerrar los vasos. Cierre los vasos y deposítelos en el carrusel del
microondas.
PRECAUCIÓN: Pueden liberarse óxidos de nitrógeno, verifique que el sistema de
ventilación funcione adecuadamente. La digestión puede ocasionar una reacción
vigorosa. Si esto ocurre espere a que los vasos se enfríen antes de taparlos.
PRECAUCIÓN: Cuando la digestión de muestras contienen volátiles o
componentes orgánicos que se oxiden fácilmente, use inicialmente no más de 0,10
g de muestra y observe la reacción antes de tapar los vasos. Si ocurre una reacción
vigorosa espere a que la reacción cese antes de tapar los vasos. Si no ocurre una
reacción aparente, puede usar un peso de muestra de 0,25 g.
La distribución de los vasos en el carrusel debe estar siempre en equilibrio. El
propósito de los blancos de muestras es para darle un balance a la energía
seleccionada.
El programa de microondas debe ser de acuerdo a las recomendaciones del
fabricante. La secuencia de las muestras debe ir de 175ºC 4ºC en 5 minutos y
mantener esta temperatura por 5 minutos.
ETAPA POTENCIA % RAMPA PSI ºC MAN
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1
1 a 3 Vasos 300 W
4 a 6 Vasos 600 W
7 a 14 vasos 1200 W
100
05:00 250
175
5:00
Al final del programa del microondas permita que los vasos se enfríen al menos
por 5 minutos en la unidad antes de remover el carrusel, para evitar posibles daños
en el sistema de ventilación de los vasos. Las muestras pueden enfriarse fuera de
la unidad, si desea que el enfriado sea más rápido puede meterlos a refrigeración.
Asegúrese que este frío para no perder mercurio.
Complete la preparación de las muestras destapando cuidadosamente cada vaso
dentro de la campana de extracción. Lleve la muestra a un volumen final de 50
mL, si la muestra digerida contienen partículas las cuales pueden obstruir el
nebulizador, pase la muestra a través de filtro Whatman No. 41 y transfiera a un
matraz Erlenmeyer.
3.6.3.3.5 Sedimentos (marinos y epicontinentales)
VER PROCEDIMIENTO PARA SUELOS
3.6.3.3.6 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos, y Tejidos animales,
Equipo y Materiales
VER PROCEDIMIENTO PARA SUELOS
Reactivos y Materiales de Referencia
VER PROCEDIMIENTO PARA SUELOS
Digestión de las muestras
Lavado de vasos
Agregar 25 mL de agua desionizada a cada uno de los vasos de digestión.,
adicione 3 mL de ácido nítrico concentrado a cada uno de los vasos, tape el
vaso.
Deposite los vasos en el carrusel del microondas
Lave de acuerdo al programa
ETAPA POTENCIA
1 a 3 vasos 300 W
% RAMPA PSI TEMP. MANT.
1 4 a 6 vasos 600 W
7 a 14 vasos 1200 W
100 10:00 100 200ºC 5:00
Permita que los vasos se enfríen al menos 5 minutos en la unidad de
microondas y destape cuidadosamente y enjuague con agua desionizada.
Digestión ácida por microondas
192

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Es necesario considerar el contenido energético de la muestra, pues dependiendo de
ello se decide la cantidad a pesar. De 0.5 a 1g de muestra se pesa en un vaso de
digestión, adicione 8 mL de ácido nítrico concentrado debe adicionarlo escurriendo
por las paredes gota a gota hasta que ya no ocurran reacciones violentas. Algunos
alimentos especialmente los que contienen alto contenido de azucares pueden
reaccionar con el acido nítrico durante varios minutos Si ocurre una reacción
vigorosa coloque los vasos en una campana de extracción y espere a que la
reacción se detenga.
Adicione 1 mL de H2O2. Cierre los vasos y deposítelos en el carrusel del
microondas.
PRECAUCIÓN: Pueden liberarse óxidos de nitrógeno, verifique que el sistema de
ventilación funcione adecuadamente. La digestión puede ocasionar una reacción
vigorosa. Si esto ocurre espere a que los vasos se enfríen antes de taparlos.
La distribución de los vasos en el carrusel debe estar siempre en equilibrio. El
propósito de los blancos de muestras es para darle un balance a la energía
seleccionada.
El programa de microondas debe ser de acuerdo a las recomendaciones del
fabricante. La secuencia de las muestras debe ir de 175ºC 4ºC en 5 minutos y
mantener esta temperatura por 5 minutos.
POTENCIA RAMPA CONTROL PRESION TEMPERATURA DURANTE
1200 W
25 min
800 PSI
200 ºC
15 min
Al final del programa del microondas permita que los vasos se enfríen al menos
por 5 minutos en la unidad antes de remover el carrusel, para evitar posibles daños
en el sistema de ventilación de los vasos. Las muestras pueden enfriarse fuera de
la unidad, si desea que el enfriado sea más rápido puede meterlos a refrigeración.
Asegúrese que este frío para no perder mercurio.
Complete la preparación de las muestras destapando cuidadosamente cada vaso
dentro de la campana de extracción. Lleve la muestra a un volumen final de 25
mL, si la muestra digerida contienen partículas las cuales pueden obstruir el
nebulizador, pase la muestra a través de filtro Whatman No. 41 y transfiera a un
tubo para su análisis por ICP/AES.
3.6.3.3.7 Sangre Humana
3.6.3.3.7.1 Equipo y Materiales
Sólo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este método
analítico.
Balanza analítica
Parrilla de calentamiento
Vaso de pp de 125 mL
Vidrio de reloj
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Pipeta de 5 y 10 mL
Matraces volumétricos de 5, 10 y 1000 mL.
3.6.3.3.7.2 Reactivos y Materiales de Referencia
Los disolventes que requiere el método deben ser de alta pureza, a menos que otra cosa se
indique.
Ácido Nítrico conc.
Ácido Preclórico conc.
Ácido sulfúrico conc.
Agua Desinoizada
3.6.3.3.7.3 Digestión de las Muestras
Al momento de la toma de muestra se le debe adicionar un anticoagulante como el
heparin. Se congela hasta el momento de tratamiento.
En un vaso de pp colocar 10 g de sangre, agregar 10 mL de HNO3:HClO4:H2SO4
(3:1:1) y calentar a 110ºC por 2 horas en parrilla. Incrementar la temperatura a
250ºC hasta reducir el volumen a 1 mL, dejar enfriar y llevar a un volumen final de
10 mL con agua desionizada; en este momento la muestra esta lista para su análisis
por ICP/AES.
3.6.3.3.8 Leche Materna
3.6.3.3.8.1 Equipo y Materiales
Sólo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este método
analítico.
3.6.3.3.8.2 Reactivos y Materiales de Referencia
Agua desionizada
Agua doblemente destilada
Ácido nítrico concentrado SUPRAPUR o equivalente
Ácido perclórico concentrado SUPRAPUR o equivalente
Peroxido de hidrogeno SUPRAPUR o equivalente
3.6.3.3.8.3 Digestión de las muestras
Una alícuota de 2mL de leche se pesa con exactitud y se mezcla con 7mL de ácido
nítrico, se calienta a 110ºC hasta alcanzar un volumen de 1mL.
Una vez que la muestra se ha enfriado, se adicionan 2mL de ácido perclórico
concentrado y nuevamente se somete la mezcla a calentamiento hasta que el
líquido se torna café oscuro.
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Se deja enfriar la muestra, posteriormente se añaden 2mL de peroxido de hidrogeno
al 30%. La mezcla se calienta a 70ºC hasta que esta se aclara y llega a un volumen
de 1mL aproximadamente.
Cuando se ha enfriado la mezcla, esta se transfiere cuantitativamente a un tubo de
ensayo calibrado y se lleva a un volumen de 10mL con agua doblemente destilada y
agua desionizada.
La determinación de los metales en la muestra se realiza mediante ICP/AES.
3.6.4 MÉTODO DE IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN INSTRUMENTAL
3.6.4.1 Aplicación y Alcances
3.6.4.1.1 Matrices – Este método es aplicable para el análisis de metales
exceptuando mercurio en los extractos digeridos de aguas naturales, residuales
municipales e industriales, así como suelo, residuos, sedimentos, organismos,
tejidos y alimentos, los extractos y su purificación depende de la matriz analizada,
se deben seguir los procedimientos de digestión adecuados para cada matriz.
3.6.4.1.2 Limitaciones –Este método está restringido para utilizarse sólo bajo la supervisión
de analistas expertos en el uso de ICP/AES y en la interpretación de sus resultados. Cada
analista debe demostrar la habilidad para generar resultados aceptables con este método.
3.6.4.2 Resumen
.Para un análisis de elementos totales, los analitos son solubilizados o digeridos utilizando
el método de preparación de muestras apropiado, quedando esta lista para ser analizada
por ICP-AES utilizando un instrumento de plasma axial, dicho instrumento mide espectros
de emisión característicos por espectrometría óptica. Los espectros son dispersados por
una rejilla de difracción y las intensidades de las líneas de emisión son monitoreadas por
dispositivos fotosensitivos.
3.6.4.3 Equipos y Materiales
Sólo se mencionan los equipos y materiales que no son de uso común en el laboratorio analítico.
Todo el material volumétrico utilizado en éste método debe ser clase “A” o estar verificada su
calibración.
3.6.4.3.1 Equipo
Espectrómetro de emisión de plasma acoplado inductivamente; controlado
totalmente a través de una computadora, con capacidad de realizar corrección de
fondo, con generador de radiofrecuencia de 27,12 MHz a una potencia de 2,0 KW,
de autosintonía con cristal controlado, Thermo ICP 6500 o equivalente con
automuestreador.
Balanza analítica con sensibilidad de 0.1 mg, para el pesado de sólidos, preparación
de estándares y reactivos.
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3.6.4.3.2 Materiales
Pipetas volumétricas de diferentes capacidades.
Material de laboratorio – Todo el material de laboratorio (vidrio, cuarzo,
polietileno, PTFE, FEP, etc.) debe estar suficientemente limpio para cubrir los
objetivos del método. Existen varios procedimientos para la limpieza del material
incluyendo el lavado con detergente, enjuague con agua de la llave, remojarlos por
4 horas o mas en 20% (v/v) de ácido nítrico o una mezcla de nítrico – clorhídrico,
lavar con agua y almacenar en lugar limpio.
Matraces volumétricos de 10, 25, 50 y 100 mL, probetas graduadas, embudos.
3.6.4.4 Reactivos y Materiales de Referencia
A menos que se indique otro grado, los reactivos que se requieren en el método deben ser tipo ACS
(American Chemical Society) grado reactivo analítico.
3.6.4.4.1 Reactivos
Agua – A menos que otra cosa se indique, el agua de referencia debe
cumplir con las siguientes características:
Resistividad: megohm-cm a 25°C: 0.2 Mínima
Conductividad: S/cm a 25°C: 5.0 Máxima
pH: 5.0 a 8.0
Purificada por desionización
Ácido clorhídrico concentrado (HCl) libre de los elementos a analizar (puede ser
grado Suprapur o equivalente).
Ácido nítrico concentrado (HNO3) libre de los elementos a analizar (puede ser
grado Suprapur o equivalente).
Ácido nítrico al 5%:
3.6.4.4.2 Materiales de referencia
Los patrones pueden ser estándares puros o adquirirse como disoluciones certificadas
(patrones de referencia).
Mezcla Analítica con trazabilidad a NIST para ICP “ICP SOLUTION STOCK” SOLUCION
A Marca High-Purity o equivalente, que contenga los siguientes elementos en una
concentración de 1000 mg/L ± 0,5% en HNO3 al 4% + Tr HF : Arsénico, Aluminio,
Antimonio, Bario, Berilio, Boro, Bismuto, Cadmio, Cromo, Cobalto, Cobre, Hierro, Plomo,
Litio, Manganeso, Níquel, Selenio, Silicio, Estroncio, Talio, Vanadio y Zinc y una
concentración de 1000 g/mL ± 0,5% en HNO3 para Calcio, Magnesio, Potasio y Sodio.
Disoluciones Patrón
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Diluya la Solución Stock 1:10 con ácido nítrico al 5% para tener 100 mg/L de
los analitos.
Disoluciones de calibración
Elabore una curva de calibración con ácido nítrico al 5% con varios niveles de
concentración, las concentraciones deben de estar de acuerdo al intervalo de trabajo
requerido, utilice los patrón mencionados en el inciso anterior para tener presentes
todos los analitos de interés en disolución. A continuación se indican las
concentraciones necesarias para la curva de calibración:
Conc. Inicial
mg/L
Vol. estándar
(mL)
Vol de Aforo
(mL)
Conc. Final**
mg/L
10 0,5 250 0,02
10 2,0 250 0,08
10 5,0 250 0,2
100 1,0 250 0,4
100 5 250 2,0
100 10 250 4,0
100 25 250 10,0
*La concentración final de K, Ca, Mg y Na es el valor obtenido multiplicado por 10 ya que la concentración inicial de estos
elementos es 10000 mg/L
3.6.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptación y rechazo
Cada laboratorio que utilice este método está obligado a operar un programa de control
de calidad (CC) formal. Los requerimientos mínimos de este programa consisten en una
demostración inicial de la capacidad del laboratorio para cumplir con las especificaciones
de desempeño del método, además realizar análisis continuos de muestras de control de
calidad (MCC) para demostrar la precisión y exactitud continuas y el análisis de blancos.
El desempeño del laboratorio debe compararse con los criterios aquí establecidos, con
objeto de determinar si los resultados de los análisis cumplen con las especificaciones de
desempeño del método. El analista debe hacer una demostración inicial de su habilidad
para generar una exactitud y precisión aceptables por este método.
Cada vez que se realice una modificación al método o que se cambie el analista
responsable de llevar a cabo está determinación, el analista designado debe repetir la
validación del método, si el cambio va a afectar el límite de detección del método (LDM),
el laboratorio debe demostrar que el nuevo LDM determinado es igual o más bajo que el
anterior para los analitos de interés.
No se permite el uso de técnicas determinativas alternativas y cambios que degraden la
ejecución del método. Si se utiliza una técnica analítica que no sea la especificada en este
método, dicha técnica debe tener especificaciones iguales o mejores que las de la técnica
descritas en este documento para el analito de interés.
Es obligatorio para el laboratorio mantener los registros de las modificaciones hechas a
este método. Estos registros deben de incluir lo siguiente:
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- La justificación por escrito de la necesidad de realizar modificaciones al método para ese
analito.
- Los nombres, títulos, direcciones y número de teléfono de los analistas que ejecutaron
los análisis y modificaciones y el encargado de control de calidad que presenció y verificó
los análisis y sus modificaciones.
- Los resultados de todas las pruebas de CC del método modificado comparadas con el
método original, dichos datos deben de incluir todos los parámetros mencionados en la
sección de desempeño del método.
- La información escrita en las bitácoras tanto del equipo como del analista, deben incluir
los siguientes datos:
Identificación de la muestra
Número del lote analítico en el cual se analizó la muestra
Fecha del análisis
Procedimiento cronológico utilizado
Cantidad de muestra utilizada
Número de muestras de control de calidad analizadas en el lote
Trazabilidad de las calibraciones de los instrumentos de medición
Registros de bitácoras, en cintas de respaldo o en otros respaldos de
información
Información cruda reportada por los equipos o por los analistas
Evidencia de la aceptación o rechazo de los resultados del lote analítico.
3.6.4.5.1 Verificación del equipo
Verifique que el equipo se encuentra en óptimas condiciones operativas, para lo cual debe
encender y permitir que se estabilice térmicamente por 30 min. Y realizar la verificación
correspondiente de acuerdo a los instructivos de verificación de la calibración de acuerdo
al equipo a utilizar.
3.6.4.5.2 Verificación de la calibración inicial
La calibración inicial debe tener un blanco y 4 estándares mínimo y debe cumplir
con un coeficiente de correlación >= 0.997. Enseguida se analiza un estándar
para verificar la estandarización y este debe de ser el punto medio de dicha
estandarización y se debe de tener un por ciento de recobro de 90-110%.
3.6.4.5.3 Verificación de contaminación de reactivos
Blanco de reactivos (BR) – Prepare un blanco de reactivos a la misma concentración de
ácido que las muestras para analizar, procese el blanco de reactivos al igual que las
muestras y verifique que el blanco de reactivos sea menor al Límite de detección del
método (LDM). En caso de no cumplir, verifique los reactivos, prepare nuevamente el
blanco de reactivos y reprocese el lote analítico con los nuevos reactivos.
3.6.4.5.4 Verificación del Lote Analítico
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La verificación del proceso analítico se realiza a través del análisis de la muestra
de control de calidad (MCC), La MCC debe provenir de una fuente externa,
diferente a los estándares de calibración, preparada con las mismas mezclas de
ácidos que los estándares de calibración y llevada a través de todo el proceso de
digestión y análisis que las muestras. La MCC debe tener un porcentaje de
recuperación de 80-120% .
3.6.4.5.5 Verificación de interferencias de matriz
Se utilizan muestras adicionadas y adicionadas duplicadas. La muestra
adicionada se incluye en el lote analítico, el criterio de aceptación es de 75-125%
de recobro, en caso de no cumplir, reanalice nuevamente, si persiste el problema
reporte como interferencia de matriz.
3.6.4.5.6 Verificación de la estabilidad de la Curva de Calibración.
Utilice el punto medio de las disoluciones con que se estandarizó el método para
verificar la estabilidad de la estandarización. Esta disolución debe ser analizada
cada 10 muestras y al final de la corrida. El criterio de aceptación es de 90-110 %
de recobro. sí no es así, se corrige el problema y se reanalizan las muestras a
partir de la siguiente después del última verificación de la estabilidad de la
estandarización
3.6.4.5.7 Verificación de estándares surrogados
No aplica
3.6.4.5.8 Verificación de estándares internos
No aplica
3.6.4.5.9 Control de Calidad Estadístico – En esta sección se especifica como
debe realizarse el control de calidad estadístico obligatorio para este método:
Se deberán preparar la MCC de una fuente externa al laboratorio o ser preparada
de una fuente diferente a la utilizada en la curva de calibración, las concentración
debe corresponder al rango de trabajo del método.
NOTA: Se recomienda que el valor de las soluciones de MCC no sea conocido
por el analista con el objeto de asegurar la veracidad de la medición
3.6.4.5.9.1 Gráficas de Control de Exactitud – El laboratorio debe elaborar y
mantener actualizadas las gráficas de control de exactitud para cada lote
analizado a partir de la demostración inicial de desempeño.
Cada valor de exactitud obtenido de las MCC de cada lote analizado deberá graficarse
y deberá estar dentro de los límites de control superior e inferior ( 3s).
Si un valor de exactitud es mayor a 3s, deberán rechazarse todos los resultados del
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lote analítico, determine las causas y corrija los errores, documente adecuadamente las
incidencias y acciones correctiva y deberá repetirse el análisis del lote en cuestión.
3.6.4.5.9.2 Gráficas de Control de Precisión – El laboratorio debe elaborar y
mantener actualizadas las gráficas de control de precisión para cada lote
analizado a partir de la demostración inicial de desempeño
Determine los límites de control de la siguiente forma:
Donde:
Límite Superior de Control (LSC) = 3.27R
Límite Superior de Advertencia (LSA) = 2.51R
R = Promedio del DPR
Si un valor de precisión es mayor al LSC, deberán rechazarse todos los
resultados del lote analítico, determine las causas del problema y corrija los
errores, documente adecuadamente las incidencias y acciones correctivas,
deberá repetirse el análisis del lote en cuestión.
3.6.4.5.10 Validación de modificaciones del método o de métodos alternos – Para validar
las modificaciones que se efectúen a este método o para la utilización de métodos alternos
deberá seguirse el siguiente procedimiento:
Si se realizan modificaciones al presente método, deberán revalidarse.
Si se utiliza un método alterno cuya fuente sea un método estandarizado por alguna
Institución de carácter internacional o reconocida internacionalmente (e. g. ASTM,
USEPA, AOAC, Standard Methods, DIN, OMS Environment Canada, etc.) siga el
mismo procedimiento de validación presentado.
Si se utiliza algún método no estandarizado, deberá evidenciarse, además de los
parámetros mencionados en este método, los parámetros de Robustez,
Reproducibilidad y Especificidad los cuales solo pueden evaluarse mediante
estudios interlaboratorio.
Verifique diariamente el desempeño de todo el sistema analítico utilizando los datos
recolectados de análisis de blancos reactivos, solución verificadora del desempeño del
laboratorio.
3.6.4.5.11 Composición del lote analítico
1.- Blanco de calibración
2.- Estandarización
3.- Verificación de la calibración
3.- Blanco de Reactivos
4.- Muestra de Control de Calidad (MCC)
5.- Muestra real No. 1
6.- Muestra duplicada
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7.- Muestra fortificada
8.- Muestras reales (5)
9.- Muestra de Verificación de la Calibración Continua
3.6.4.5.12 Criterios de Aceptación y Rechazo
Para el seguimiento de las especificaciones de aceptación y rechazo consultar las siguientes
tablas:
Verificación del equipo:
Punto de verificación Criterio
Lo que el fabricante recomiende Ver instructivo de de equipo
correspondiente
Verificación de la estandarización
Punto de verificación Criterio
Correlación >0.997
Verificación de la calibración
Punto de verificación Criterio
CCV ± 10%
Verificación de contaminación de reactivos
Punto de verificación Criterio
Blanco de reactivos < limite de detección
Verificación del proceso analítico
Punto de verificación Criterio
Muestra de control de calidad +- 20 %R
Verificación de interferencias de matriz
Punto de verificación Criterio
Muestras adicionadas +- 20 %
Verificación de la estabilidad de la estandarización
Punto de verificación Criterio
Estándar de verificación continua +- 10 %
3.6.4.6 Calibración
Dado que cada instrumento y modelo tienen diferentes especificaciones, siga las
instrucciones del fabricante para su calibración, ver instructivo de equipo
correspondiente.
201

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La calibración del equipo se realiza conforme a las instrucciones del fabricante, sobre cada una de las
longitudes de onda de cada elemento a analizar.
La estandarización diaria se prepara con un blanco así como un mínimo de 4 estándares, esta curva se
verifica con el estándar de verificación continúa de la curva de calibración, que debe ser de una
concentración equivalente al punto medio de la curva. El porcentaje de recuperación debe ser de 90-
110%.
Se necesitan al menos 4 estándares de calibración. Uno debe contener analitos a una
concentración cercana, pero superior a la del límite práctico de cuantificación para cada
analito; los otros deben estar a concentraciones que cubran el intervalo esperado en las
muestras. Por ejemplo, si el LDM es 0.01µg/L y el LPC es de 0.05 µg/L, se espera que la
muestra contenga concentraciones mayores de 0.05 µg/L.
Si se utiliza regresión lineal por mínimos cuadrados, deberá obtener el factor de correlación
“r 2 ” para cada analito, el cual deberá ser mayor o igual a 0.997 si “r” es menor a este valor, la
curva de calibración no es lineal y deberá verificarse la preparación de los estándares de
calibración, el ICP/AES y repetir la calibración.
3.6.4.7 Procedimiento Analítico
3.6.4.7.1 Análisis de los extractos de las muestras.
Antes de la estandarización diaria del instrumento, inspeccione el sistema de introducción
incluyendo el nebulizador, antorcha, tubo central de la antorcha por posible incrustación de
sales, suciedad que restrinjan el flujo de la disolución y afecten el desempeño del
instrumento. Limpie el instrumento cada vez que sea necesario.
El instrumento debe estabilizarse por alrededor de 30 minutos antes de la calibración y
análisis y lleve a cabo la calibración óptica.
Para la operación de rutina diaria siga las instrucciones de encendido, análisis, apagado del
equipo que se indica en el instructivo de operación del equipo a utilizar. Estandarice el
equipo usando la curva de calibración.
Después de cumplir con los requerimientos iniciales de este método, analice las muestras
bajo las mismas condiciones de operación de la rutina de calibración con un enjuague entre
cada una de las muestras y blancos.
Condiciones instrumentales:
RF power: 1100-1500 watts
Flujo de enfriamiento: 15-19 L/min
Flujo de nebulizacion: 0.6-1.5 L
Velocidad de bomba: 1-1.8 mL/min
3.6.4.7.2 Identificación de las Analitos
La determinación cualitativa de cada elemento de este método está basada en la intensidad
de la señal captada por el detector a la longuitud de onda seleccionada para cada elemento.
3.6.4.7.3 Cálculos
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2.1.1.
3.6.4.7.3.1 AIRE AMBIENTE
El volumen total de la muestra se calcula de las lecturas de flujo periódico
(Magnehelic) con la siguiente ecuación:
V
Q Q ... Q
1 2
n
m
n 1000
Donde:
V(m)= Volumen total de la muestra (m 3 ).
Q1,Q2,.,Qn= Flujos determinados al inicio, final y puntos intermedios durante el tiempo
muestreado (L/minuto).
n= Número de datos promediados.
T= Tiempo de muestreado (minutos).
El volumen de muestreado debe convertirse a condiciones estándar (760 mm Hg y
25ºC) con la siguiente ecuación.
V
s Vm
A
P
298
760
273
t
T
a
Donde:
V(s)= Volumen total de la muestra a 25ºC y 760 mm Hg (m 3 ).
V(m)= Volumen total de flujo a condiciones ambientales (m 3 ).
P(A)= Presión ambiental (mm Hg).
t(a)= Temperatura ambiental (ºC).
La concentración del elemento en la muestra se calcula con la siguiente ecuación:
C
A A
V
* V E i* V s Donde:
C(A)= Concentración del analito en la muestra (µg/m 3 ).
A= Cantidad calculada de material analizado, basada en la curva de calibración para
estándares analizados (nanogramos).
V(i)= Volumen inyectado del extracto (µL).
V(E)= Volumen final del extracto (mL).
V(s)= Volumen total de la muestra de aire corregido a condiciones estándar (m 3 ).
Determine la concentración de compuestos individuales en la muestra.
Informe los resultados en µg/m 3 a condiciones STD.
Todos los datos de control de calidad obtenido deberán ser informados junto con los
resultados de la muestra.
3.6.4.7.3.2 AGUA
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Utilice la curva de calibración para calcular directamente la concentración de cada
analito en la muestra; este valor debe ser afectado por el factor de preparación de
muestra:
concentración = Conc. obtenida en equipo * FC
50mL.
vol.
aforo
45mL.
vol.
mtra
No reporte concentraciones por debajo del límite de detección.
Reporte todos los valores obtenidos de CC junto con los resultados del análisis.
Los resultados deben reportarse con un número apropiado de cifras significativas. La
experiencia indica que tres cifras significativas pueden ser usadas para concentraciones
por arriba de 99 µg/L, dos cifras significativas para concentraciones entre 1-99 µg/L y
una cifra significativa para concentraciones menores a 1 µg/L.
3.6.4.7.3.3 SUELOS
Calcule la concentración utilizando la siguiente ecuación:
g
C * V
kg P
Donde:
C= Concentración en el extracto digerido (µg/L)
V= Volumen del extracto digerido (L)
P= Peso de la muestra digerida
Reporte los resultados del análisis en µg/Kg con tres cifras significativas y
aclarando si son en Base Seca o Base Húmeda. Si reporta en base seca debe
considerar el valor de la humedad para obtener el resultado.
3.6.4.7.3.4 SEDIMENTOS (MARINOS Y EPICONTINENTALES)
VER CALCULOS PARA SUELOS
3.6.4.7.3.5 ALIMENTOS PROCESADOS, SIN PROCESAR, TEJIDOS, ORGANISMOS,
g
C * V
kg P
C= Concentración en el extracto digerido (µg/L)
V= Volumen del extracto digerido (L)
P= Peso de la muestra digerida
Todos los factores de dilución o concentración deben ser considerados.
No reporte concentraciones por debajo del límite de detección.
204

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Reporte todos los valores obtenidos de CC junto con los resultados del análisis.
Reporte los resultados de análisis en µg/kg con tres cifras significativas.
2.1.2. 3.6.4.8 Desempeño del Método
Los datos son los del método de referencia y los de un laboratorio nacional con
experiencia.
3.6.4.8.1 Límite de Detección: Ver Tablas 3 y 4.
3.6.4.8.2 Límite Práctico de Cuantificación: Ver Tablas 3 y 4
3.6.4.8.3 Intervalo de Trabajo: Ver Tablas 3 y 4
3.6.4.8.4 Precisión del Método: Ver Tablas 3 y 4
3.6.4.8.5 Exactitud del Método: Ver Tablas 3 y 4
2.1.3. 3.6.4.9 Tablas y Figuras
TABLA 1 LONGITUDES DE ONDA UTILIZADAS RECOMENDADAS Y LIMITES DE DETECCION
INSTRUMENTALES ESTIMADOS (según EPA 6010C 2000)
ELEMENTO
2.1.4. S
I
M
B
O
L
O
LONG. ONDA
LDI
ESTIMADOS**
g/L
Plata Ag 328,07 4,7
Arsénico As 193,70 35
Bario Ba 455,40 0,87
Berilio Be 313,04 0.18
Cadmio Cd 226,50 2.3
Níquel Ni 231,60 x 2 10
Plomo Pb 220,35 28
Selenio Se 196,03 50
Talio Tl 190,86 27
Vanadio V 292,40 5,0
1) Las longitudes de onda (nm) listadas son las recomendadas para obtener una adecuada sensibilidad, Cuando es (x 2) es de segundo
orden. Otras longitudes de onda pueden ser utilizadas (en caso de interferencias).
2) Los límites de detección instrumental estimados muestran una guía sobre los límites del instrumento, los límites de detección del
método son dependientes del tipo de matriz de las muestras.
3) Altamente dependiente de las condiciones y posición del plasma.
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TABLA 2 FACTORES DE CORRECCIÓN INTERELEMENTO.
INTEREFERNCIA POR FIERRO
Metal Factor de Corrección
Ag 0,000540
As 0,000663
Cd 0,000029
Cr 0,0007340
Pb 0,0003940
Se 0,0024000
INTERFERENCIA POR ALUMINIO
Metal Factor de Corrección
As 0,0005
Pb 0,0004
Se 0,0012
Nota: Los datos anteriores son proporcionados por el fabricante del instrumento
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TABLA 3 PRECISIÓN Y EXACTITUD INSTRUMENTAL PARA SOLUCIONES ACUOSAS.
Elemento
Concentración
Media
(mg/L)
N b DSR b
Precisión c
(%)
As 14,7 7 6,4 99
Ba 3,66 7 3,1 99
Be 3,78 8 5,8 102
Cd 3,61 8 7,0 97
Pb 14,4 7 5,9 97
Ni 3,70 7 5,7 100
Se 15,3 8 7,5 104
Ag 3,69 6 9,1 100
Tl 15,1 7 8,5 102
V 3,51 8 6,6 95
Los valores son independientes de la preparación de las muestras.
(b)= Numero de mediciones para la media y la desviación estándar relativa.
(c)= La precisión esta expresada como el porcentaje del valor nominal para cada analito en
soluciones acidificada de multielementos.
NOTA: Pruebas realizadas por varios laboratorios.
207

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Elemento Valor
(g/L)
Conc.
Media
(g/L)
TABLA 4 PRECISIÓN Y EXACTITUD PARA ICP
DSR
(%)
A
(%)
Valor
(g/L)
Conc.
Media
(g/L)
DSR
(%)
B
(%)
Valor
(g/L)
Conc.
Media
(g/L)
Be 750 733 6,2 98 20 20 9.8 100 180 176 5,2 98
V 750 749 1,8 100 70 69 2,9 99 170 169 1,1 99
As 200 208 7,5 104 22 19 23 86 60 63 17 105
Cd 50 48 12 96 2,5 2,9 16 116 14 13 16 93
Ni 250 245 5,8 98 30 28 11 93 60 55 14 92
Pb 250 236 16 94 24 30 32 125 80 80 14 100
Zn 200 201 5,6 100 16 19 45 119 80 82 9,4 102
Se 40 32 21,9 80 6 8,5 42 142 10 8.5 8,3 85
A= Precisión de muestra No. 1
B= Precisión de muestra No. 2
C= Precisión de muestra No. 3
DSR= Desviación estándar relativa
La precisión es expresada como la concentración media dividida entre el valor verdadero de la
concentración 100 veces.
NOTA: Pruebas realizadas por varios laboratorios.
DSR
(%)
C
(%)
208

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3.7 MERCURIO
Existen 2 técnicas analíticas para analizar mercurio en muestras ambientales, la
Espectrofotometría de Absorción Atómica con Vapor frío y la Espectrofotometría de Fluorescencia
Atómica con Vapor Frío, la primera es una técnica utilizable para matrices de aguas, suelos,
sedimentos, organismos y alimentos, la segunda es una técnica utilizable en aire ambiente
principalmente, la ventaja es que es un método de medición directa y es muy sensible (en el orden
de ng/m 3 ), en la actualidad se han desarrollado equipos automáticos que además pueden medir
cantidades traza de mercurio en todas las matrices sin procesamiento de muestra alguno, lo que
representa grandes ventajas al elevar considerablemente la sensibilidad y eliminar las
interferencias y pérdidas del analito por el procesamiento de las muestras.
En este documento se presentan los métodos de AAEVP para todas las matrices de interés
excepto aire ambiente, en esta matriz la medición se deberá realizar por medición directa con un
equipo EFAVP para aire ambiente, este método aún no está estandarizado por lo que quien lo
realice deberá validarlo.
No se debe utilizar ICP/AES para analizar mercurio por las bajas sensibilidades que tiene esta
técnica para este analito (en el orden de mg/kg).
NOTA: Este método está basado en su desempeño, se permite que el laboratorio omita cualquier
paso o modifique cualquier procedimiento, suponiendo que todos los requerimientos de
desempeño especificados se cumplan. Al laboratorio no se le permite omitir cualquier punto de
control de calidad, ni los parámetros que se especifiquen como “NO MODIFICABLES”. Los
términos “debe”, “puede” y “deberá” son mencionados a través de los métodos y están destinados
a ilustrar la importancia de los procedimientos para producir datos verificables en los rangos de
trabajo del método. El término “debe” es usado para indicar que los desarrolladores de este
método encontraron ciertos procedimientos esenciales en muestras analizadas exitosamente; de
todas maneras, estos procedimientos pueden ser modificados u omitidos si el laboratorio puede
demostrar fehacientemente que la calidad de los resultados no resulta afectada.
PARÁMETROS NO MODIFICABLES
Ninguno
3.7.1 Aplicación y Alcances
3.7.1.1 Propósito: La espectrometría de absorción atómica con vapor frío (AAEVF) es
aplicable para la determinación de concentraciones de µg/kg para mercurio en matrices
sólidas y líquidas. Se requiere una digestión ácida previa al análisis y filtración para analizar
los metales totales a analizar.
De acuerdo a la matriz analizada se utilizan diferentes métodos de digestión para solubilizar
los metales en las muestras antes de su análisis instrumental.
3.7.1.2 Analitos –El método es aplicable a los siguientes analitos:
209

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Metal # CAS
Mercurio 7439-97-6
3.7.1.3 Matrices – Este método es aplicable para el análisis de metales en las siguientes
matrices ambientales:
Suelos
Sedimentos Marinos
Sedimentos Epicontinentales
Aguas Marinas
Aguas Estaurinas y de Lagunas Costeras
Aguas Superficiales Epicontinentales
Aguas Subterráneas
Alimentos procesados, sin procesar, organismos y tejidos animales
Sangre
Leche Materna
3.7.1.4 Limitaciones – Este método está restringido para utilizarse sólo bajo la supervisión de
analistas expertos en el uso de AAEVF en la interpretación de sus resultados. Cada analista debe
demostrar la habilidad para generar resultados aceptables con este método.
3.7.2 Resumen
Una porción bien homogenizada de una muestra líquida o sólida es pesada con exactitud para su
procesamiento. Para el análisis de Mercurio total, la muestra es solubilizada o digerida utilizando el
método de preparación de muestras apropiado, quedando esta lista para ser analizada por AAEVF
utilizando un espectrofotómetro de absorción atómica con el aditamento para procesar muestras
por vapor frío.
3.7.3 Procedimientos de Digestión de muestras
3.7.3.1 Interferencia Generales
3.7.3.1.1 Se ha reportado interferencias de cobre; sin embargo concentraciones de cobre
de 10 mg/L no tiene efectos en el recobro de mercurio sobre muestras
adicionadas.
3.7.3.1.2 Aguas marinas o muestras con alto contenido de cloro requiere la adición de
permanganato ya que durante la oxidación los cloruros pasan a cloro libre el
cual también absorbe radiación a 253.7 nm.
3.7.3.1.3 Algunos compuestos orgánicos volátiles pueden absorbe a la misma longitud de
onda causando interferencias.
3.7.3.2 Seguridad general
La carcinogenidad y toxicidad de los químicos utilizados en este método no ha sido
determinadas con precisión; de todas maneras; cada sustancia química debe ser tratada
como potencial peligro a la salud. La exposición a estas sustancias químicas debe ser
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reducida al menor nivel posible. Se sugiere que el laboratorio realice monitoreos de higiene
ocupacional de cada reactivo a los que pueda estar expuesto el analista y que dichos
resultados estén disponibles para los analistas.
La acidificación de las muestras que contienen materiales reactivos puede ocasionar la liberación de
gases tóxicos, como cianuros o sulfuros. La acidificación debe realizarse en una campana de
extracción.
Los ácidos y bases concentradas causan severas quemaduras e irritaciones en la piel. Debe utilizarse
ropa protectora tal como: Batas, guantes y lentes de seguridad cuando se manejan estos productos
químicos.
Este método puede no mencionar todas las precauciones de seguridad asociadas con su
uso. El laboratorio es responsable de mantener un ambiente de trabajo seguro y un archivo
de las normas de seguridad respecto a la exposición y manejo seguro de las sustancias
químicas especificadas en este método. Debe tenerse un archivo de referencias de las hojas
de información de seguridad el cual debe estar disponible a todo el personal involucrado en
estos análisis.
3.7.3.3 Matrices
3.7.3.3.1 Aire Ambiente
3.7.3.3.1.1 Equipo y Materiales
Solo se mencionan los equipos y materiales que no son de uso común en el
laboratorio analítico.
3.7.3.3.1.1.1 Equipo
Bombas y sistema de medición de flujo.
Congelador para el almacenamiento de muestras de partículas de Hg a -40
ºC
Balanza analítica: La sensibilidad de la balanza analítica debe ser de 0.01
mg. La cámara de pesado debe estar diseñada para que pueda ser
introducido un filtro sin doblar
La unidad de microondas marca CEM modelo MARS-5, MARSX o equivalente
que proporcione una energía de 1600 W, que pueda programarse dentro de + 10 W
de la energía requerida. Y que cuente con sensor de temperatura y presión y un
controlador de microondas.
El sistema requiere de vasos de digestión de teflón PFA marca CEM modelo ACV,
HP 500 de 100 mL de capacidad o vasos marsxpress de 75 mL de capacidad o
equivalentes, capaces de resistir presiones de 500 psi y una temperatura máxima de
210ºC.
Una tornamesa giratoria es empleada para asegurar la distribución homogénea de la
radiación dentro de la unidad.
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Portafiltros de teflón de 47 mm de entrada cerrada para fase-vapor Hg y entrada
abierta para fase-partículas
PRECAUCIONES: Deben utilizarse las recomendaciones de operación del
modelo y del fabricante del equipo de microondas. Las especificaciones de
este método y requerimientos del análisis deben consultarse con las
especificaciones del manual del equipo.
3.7.3.3.1.1.2 Materiales:
Probetas graduadas de 50 o 100 mL de capacidad o equivalente.
Papel filtro, cuantitativo Whatman No. 41 o equivalente.
Embudos para filtración de polipropileno.
Matraz Erlenmeyer de 125 mL
Filtros de fibra de vidrio 47 mm
Termómetro de inmersión
3.7.3.3.1.2 Reactivos y Materiales de Referencia
A menos que otra cosa se indique, los reactivos que requiere el método deben ser tipo ACS
grado reactivo
Agua Reactivo – A menos que otra forma se indique, el agua
utilizada debe ser agua grado reactivo tipo II ASTM.
Acetona
Ácido nítrico concentrado, HNO3 J.T. Baker R04 o equivalente.
Ácido Clorhídrico concentrado, HCl J.T. Baker R02 o equivalente.
Acido Fluorhídrico concentrado, HF SIGMA-ALDRICH o equivalente
BrCl
Cloruro de estaño II dihidratado (SnCl2 )
Mercurio elemental, liquido de alta pureza.
3.7.3.3.1.3 Procedimiento de digestión de Muestra
3.7.3.3.1.3.1 preparación del filtro previo su muestreo
Los filtros de fibra de vidrio se deben calentar en la mufla a 500 ºC por
durante una hora. Se deben dejar enfriar y se guardan en un recipiente
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de teflón (50 mm de diámetro) el cual se debe sellar con cinta teflón. Se
guarda en triple bolsa y se guarda hasta que se utilicen.
3.7.3.3.1.3.2 Digestión de las muestras
En un vaso digestor se coloca el filtro que previamente fue cortado en
cuatro con 20 mL de HNO3 al 10%, el vaso digestor es colocado en el
carrusel del digestor.
Las condiciones del digestor son las siguientes: 160ºC a 70 PSI durante
20 minutos. Permita que se enfríen.
Lleve el vaso digestor a una campana de extracción y adicione
cuidadosamente 0.5 mL de BrCl, esto para oxidar el mercurio en
solución a Hg 2+ . Tape el vaso mezclando el contenido y permita que
reaccione al menos 1 hora.
3.7.3.3.2 Aguas (marinas, estaurinas y de lagunas costeras, superficiales
epicontinentales y subterráneas)
3.7.3.3.2.1 Equipo y Materiales
VER EN METALES Y METALOIDES
3.7.3.3.2.2 Reactivos y Materiales de Referencia
VER EN METALES Y METALOIDES
3.7.3.3.2.3 Digestión de las muestras
3.7.3.3.3 Suelos
3.7.3.3.3.1 Equipo y Materiales
VER EN METALES Y METALOIDES
VER EN METALES Y METALOIDES
3.7.3.3.3.2 Reactivos y Materiales de Referencia
VER EN METALES Y METALOIDES
3.7.3.3.3.3 Digestión de las muestras
VER EN METALES Y METALOIDES
3.7.3.3.4 Sedimentos (marinos y epicontinentales)
VER EN METALES Y METALOIDES
3.7.3.3.5 Alimentos procesados, sin procesar, Organismos y Tejidos animales,
3.7.3.3.5.1 Equipo y Materiales
213

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3.7.3.3.6 Sangre Humana
VER EN METALES Y METALOIDES
3.7.3.3.5.2 Reactivos y Materiales de Referencia
VER EN METALES Y METALOIDES
3.7.3.3.5.3 Digestión de las muestras
3.7.3.3.6.1 Equipo y Materiales
VER EN METALES Y METALOIDES
Sólo se mencionan los equipos y materiales que son relevantes en este método
analítico.
La unidad de microondas marca CEM modelo MARS-5, MARSX o equivalente
que proporcione una energía de 1600 W, que pueda programarse dentro de + 10 W
de la energía requerida. Y que cuente con sensor de temperatura y presión y un
controlador de microondas.
El sistema requiere de vasos de digestión de teflón PFA marca CEM modelo
ACV, HP 500 de 100 mL de capacidad o vasos marsxpress de 75 mL de capacidad
o equivalentes, capaces de resistir presiones de 500 psi y una temperatura máxima
de 210ºC.
3.7.3.3.6.2 Reactivos y Materiales de Referencia
Los disolventes que requiere el método deben ser de alta pureza, a menos que otra cosa
se indique.
Ácido Nítrico
Peróxido de hidrógeno
3.7.3.3.6.3 Digestión de las Muestras
Las muestras de sangre se colectaron en tubos de ensayo previamente heparinizados y se
mantienen en congelación hasta su procesamiento..
Las muestras se preparan en un tubo de digestión donde se colocan 0,5 mL de sangre, 5
mL de ácido nítrico concentrado y 1 mL de peróxido de hidrógeno. Se procede a realizar
una digestión asistida por microondas. El tubo se coloca en el microondas y se procesa
de acuerdo a la siguiente secuencia.
Paso 1 2 3 4
T (ºC) 160 190 100 100
TM*(min) 5 1 1 1
T (min) 5 10 10 10
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*Tiempo de mantenimiento
Terminado el tiempo se deja enfriar, se diluye a 10 mL y se transvasa para su análisis.
3.7.3.3.7 Leche Materna
3.7.3.3.7.1 Equipo y Materiales
Liners de teflón con capacidad de 22mL
3.7.3.3.7.2 Reactivos y Materiales de Referencia
Ácido nítrico
Ácido sulfúrico
Ácido clorhídrico
Bromato de Potasio
Bromuro de Potasio
Disolución Stock de cloruro de bromo.- 0.2mol/L en 10mol/L de ácido
clorhídrico. Se prepara disolviendo 11g de bromato de potasio y 15g de
bromuro de potasio en 180mL de agua y posteriormente se agregan 800mL
de ácido clorhídrico concentrado. Las sales de potasio son pre-tratadas
mediante el calentamiento en un horno a 200ºC durante 1 hora, a fin de
remover cualquier contaminación debida a mercurio. Una vez fría, la
solución es diluida a 1L con agua y almacenada en la oscuridad.
Disolución de trabajo.- 0.002mol/L de cloruro de bromo en 0.1mol/L de
ácido clorhídrico. Se deriva de la solución stock realizando una dilución
1:100 con agua.
3.7.3.3.7.3 Digestión de las muestras
Se coloca la muestra de leche dentro de un liner de teflón de 22mL, se añade una
mezcla de ácido sulfúrico y ácido nítrico 70:30 (v/v), se cierra el liner y se coloca en
un horno a 70ºC durante mínimo 16 horas. La cantidad de muestra en ácido
corresponde a 1g/5mL.
Para enfriar la muestra, se coloca el liner en un congelador durante 2 horas, de
acuerdo al volumen de muestra que se obtenga, se agrega el mismo volumen de la
disolución de cloruro de bromo para convertir el mercurio en Hg 2+ .Se deja reposar la
muestra durante 2 horas a temperatura ambiente.
3.7.4 MÉTODO DE IDENTIFICACIÓN Y CUANTIFICACIÓN INSTRUMENTAL
3.7.4.1 Aplicación y Alcances
3.7.4.1.1 Matrices – Este método es aplicable para el análisis mercurio en los
extractos digeridos de aguas naturales, residuales municipales e industriales, así
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como suelo, residuos, sedimentos, organismos, tejidos y alimentos, los extractos y
su purificación depende de la matriz analizada, se deben seguir los procedimientos
de digestión adecuados para cada matriz.
3.7.4.1.2 Limitaciones –Este método está restringido para utilizarse sólo bajo la supervisión
de analistas expertos en el uso de AAEVF y en la interpretación de sus resultados. Cada
analista debe demostrar la habilidad para generar resultados aceptables con este método.
3.7.4.2 Resumen
.Para un análisis de elementos totales, los analitos son solubilizados o digeridos utilizando el método
de preparación de muestras apropiado, quedando esta lista para ser analizada por AAEVF en dicho
instrumento el mercurio es convertido a su estado basal con una solución de cloruro estañoso en
H2SO4. El vapor de mercurio metálico es removido de la solución por burbujeo y llevado por un flujo
de nitrógeno al espectrofotómetro de absorción atómica, la lectura de absorbancia de la muestra es
comparada con la de una curva de calibración analizada en las mismas condiciones que la muestra.
El análisis cuantitativo se basa en la determinación de la radiación a 253.7 nm de vapor de mercurio.
3.7.4.3 Equipos y Materiales
Sólo se mencionan los equipos y materiales que no son de uso común en el laboratorio analítico.
Todo el material volumétrico utilizado en éste método debe ser clase “A” o estar verificada su
calibración.
3.7.4.3.1 Equipo
Espectrómetro de Absorción atómica por vapor frío (AAEVF)
Balanza analítica con sensibilidad de 0.1 mg, para el pesado de sólidos, preparación
de estándares y reactivos.
3.7.4.3.2 Materiales
Pipetas volumétricas de diferentes capacidades.
Material de laboratorio – Todo el material de laboratorio (vidrio, cuarzo,
polietileno, PTFE, FEP, etc.) debe estar suficientemente limpio para cubrir los
objetivos del método. Existen varios procedimientos para la limpieza del material
incluyendo el lavado con detergente, enjuague con agua de la llave, remojarlos por
4 horas o mas en 20% (v/v) de ácido nítrico o una mezcla de nítrico – clorhídrico,
lavar con agua y almacenar en lugar limpio.
Matraces volumétricos de 10, 25, 50 y 100 mL, probetas graduadas, embudos.
3.7.4.4 Reactivos y Materiales de Referencia
A menos que se indique otro grado, los reactivos que se requieren en el método deben ser tipo ACS
(American Chemical Society) grado reactivo analítico.
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3.7.4.4.1 Reactivos
Agua – A menos que otra cosa se indique, el agua de referencia debe
cumplir con las siguientes características:
Resistividad: megohm-cm a 25°C: 0.2 Mínima
Conductividad: S/cm a 25°C: 5.0 Máxima
pH: 5.0 a 8.0
Purificada por desionización
Ácido clorhídrico concentrado (HCl) libre de los elementos a analizar (puede ser
grado Suprapur o equivalente).
Ácido nítrico concentrado (HNO3) libre de los elementos a analizar (puede ser
grado Suprapur o equivalente).
Acido nítrico al 5%:
3.7.4.4.2 Materiales de referencia
Los patrones pueden ser estándares puros o adquirirse como disoluciones
certificadas (patrones de referencia).
Estándar certificado de mercurio de 1000 mg/L Hg
Disoluciones de calibración
Elabore una curva de calibración con ácido nítrico al 5% con varios niveles de
concentración, las concentraciones deben de estar de acuerdo al intervalo de trabajo
requerido, utilice los patrón mencionados en el inciso anterior. 0.0, 1.0, 2.0, 5.0,
10.0 y 20.0 ug/L
3.7.4.5 Control de Calidad y especificaciones de aceptación y rechazo
Cada laboratorio que utilice este método está obligado a operar un programa de control
de calidad (CC) formal. Los requerimientos mínimos de este programa consisten en una
demostración inicial de la capacidad del laboratorio para cumplir con las especificaciones
de desempeño del método, además realizar análisis continuos de muestras de control de
calidad (MCC) para demostrar la precisión y exactitud continuas y el análisis de blancos.
El desempeño del laboratorio debe compararse con los criterios aquí establecidos, con
objeto de determinar si los resultados de los análisis cumplen con las especificaciones de
desempeño del método. El analista debe hacer una demostración inicial de su habilidad
para generar una exactitud y precisión aceptables por este método.
Cada vez que se realice una modificación al método o que se cambie el analista
responsable de llevar a cabo está determinación, el analista designado debe repetir la
validación del método, si el cambio va a afectar el límite de detección del método (LDM),
el laboratorio debe demostrar que el nuevo LDM determinado es igual o más bajo que el
anterior para los analitos de interés.
No se permite el uso de técnicas determinativas alternativas y cambios que degraden la
ejecución del método. Si se utiliza una técnica analítica que no sea la especificada en este
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método, dicha técnica debe tener especificaciones iguales o mejores que las de la técnica
descritas en este documento para el analito de interés.
Es obligatorio para el laboratorio mantener los registros de las modificaciones hechas a
este método. Estos registros deben de incluir lo siguiente:
- La justificación por escrito de la necesidad de realizar modificaciones al método para ese
analito.
- Los nombres, títulos, direcciones y número de teléfono de los analistas que ejecutaron
los análisis y modificaciones y el encargado de control de calidad que presenció y verificó
los análisis y sus modificaciones.
- Los resultados de todas las pruebas de CC del método modificado comparadas con el
método original, dichos datos deben de incluir todos los parámetros mencionados en la
sección de desempeño del método.
- La información escrita en las bitácoras tanto del equipo como del analista, deben incluir
los siguientes datos:
Identificación de la muestra
Número del lote analítico en el cual se analizó la muestra
Fecha del análisis
Procedimiento cronológico utilizado
Cantidad de muestra utilizada
Número de muestras de control de calidad analizadas en el lote
Trazabilidad de las calibraciones de los instrumentos de medición
Registros de bitácoras, en cintas de respaldo o en otros respaldos de
información
Información cruda reportada por los equipos o por los analistas
Evidencia de la aceptación o rechazo de los resultados del lote analítico.
3.7.4.5.1 Verificación del equipo
Verifique que la succión en los capilares de la muestra y del cloruro estañoso sea
la adecuada (sin interrupciones) y que la bomba peristáltica gire adecuadamente.
Verifique que el equipo se encuentra en óptimas condiciones operativas, para lo
cual debe encender y permitir que se estabilice térmicamente por 30 min. Y
realizar la verificación correspondiente de acuerdo a los instructivos de
verificación de la calibración de acuerdo al equipo a utilizar.
3.7.4.5.2 Verificación de la calibración inicial
Se realiza la lectura de los estándares de calibración, aceptando un 10% de
RSD. El coeficiente de correlación debe ser >= 0.995 con un blanco y al menos 4
estándares.
3.7.4.5.3 Verificación de contaminación de reactivos
Blanco de reactivos (BR) – Prepare un blanco de reactivos a la misma concentración de
ácido que las muestras para analizar, procese el blanco de reactivos al igual que las
218

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muestras y verifique que el blanco de reactivos sea menor al Límite de detección del
método (LDM). En caso de no cumplir, verifique los reactivos, prepare nuevamente el
blanco de reactivos y reprocese el lote analítico con los nuevos reactivos.
3.7.4.5.4 Verificación del Lote Analítico
La verificación del proceso analítico se realiza a través del análisis de la muestra
de control de calidad (MCC), La MCC debe provenir de una fuente externa,
diferente a los estándares de calibración, preparada con las mismas mezclas de
ácidos que los estándares de calibración y llevada a través de todo el proceso de
digestión y análisis que las muestras. La MCC debe tener un porcentaje de
recuperación de 80-120% .
3.7.4.5.5 Verificación de interferencias de matriz
Se utilizan muestras adicionadas. La muestra adicionada se incluye en el lote
analítico, el criterio de aceptación es de 75-125% de recobro, en caso de no
cumplir, reanalice nuevamente, si persiste el problema reporte como interferencia
de matriz.
3.7.4.5.6 Verificación de la estabilidad de la Curva de Calibración.
Si más de 25 muestras van a ser analizadas durante el día, la curva estándar de
trabajo debe verificarse con un estándar de referencia o un estándar de
concentración media del rango de trabajo después de cada 25 muestras y un
blanco de verificación. Este valor de la muestra debe tener un recobro del 80-
120%, de no ser así entonces las 25 muestras previas deben volver a analizarse.
El blanco de verificación debe estar por debajo del Límite de detección del
método.
3.7.4.5.7 Verificación de estándares surrogados
No aplica
3.7.4.5.8 Verificación de estándares internos
No aplica
3.7.4.5.9 Control de Calidad Estadístico – En esta sección se especifica como
debe realizarse el control de calidad estadístico obligatorio para este método:
Se deberán preparar la MCC de una fuente externa al laboratorio o ser preparada
de una fuente diferente a la utilizada en la curva de calibración, las concentración
debe corresponder al rango de trabajo del método.
NOTA: Se recomienda que el valor de las soluciones de MCC no sea conocido
por el analista con el objeto de asegurar la veracidad de la medición
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PARA LAS MATRICES PRIORITARIAS DEL PRONAME. México, p. 222.
3.7.4.5.9.1 Gráficas de Control de Exactitud – El laboratorio debe elaborar y
mantener actualizadas las gráficas de control de exactitud para cada lote
analizado a partir de la demostración inicial de desempeño.
Cada valor de exactitud obtenido de las MCC de cada lote analizado deberá graficarse y
deberá estar dentro de los límites de control superior e inferior ( 3s).
Si un valor de exactitud es mayor a 3s, deberán rechazarse todos los resultados del lote
analítico, determine las causas y corrija los errores, documente adecuadamente las
incidencias y acciones correctiva y deberá repetirse el análisis del lote en cuestión.
3.7.4.5.9.2 Gráficas de Control de Precisión – El laboratorio debe elaborar y
mantener actualizadas las gráficas de control de precisión para cada lote
analizado a partir de la demostración inicial de desempeño
Determine los límites de control de la siguiente forma:
Donde:
Límite Superior de Control (LSC) = 3.27R
Límite Superior de Advertencia (LSA) = 2.51R
R = Promedio del DPR
Si un valor de precisión es mayor al LSC, deberán rechazarse todos los
resultados del lote analítico, determine las causas del problema y corrija los
errores, documente adecuadamente las incidencias y acciones correctivas,
deberá repetirse el análisis del lote en cuestión.
3.7.4.5.10 Validación de modificaciones del método o de métodos alternos –
Para validar las modificaciones que se efectúen a este método o para la utilización de
métodos alternos deberá seguirse el siguiente procedimiento:
- Si se realizan modificaciones al presente método, deberán revalidarse.
- Si se utiliza un método alterno cuya fuente sea un método estandarizado por
alguna Institución de carácter internacional o reconocida internacionalmente (e. g.
ASTM, USEPA, AOAC, Standard Methods, DIN, OMS Environment Canada, etc.)
siga el mismo procedimiento de validación presentado.
- Si se utiliza algún método no estandarizado, deberá evidenciarse, además de los
parámetros mencionados en este método, los parámetros de Robustez,
Reproducibilidad y Especificidad los cuales solo pueden evaluarse mediante
estudios interlaboratorio.
Verifique diariamente el desempeño de todo el sistema analítico utilizando los datos
recolectados de análisis de blancos reactivos, solución verificadora del desempeño del
laboratorio.
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3.7.4.5.11 Composición del lote analítico
1.- Blanco de calibración
2.- Estandarización
3.- Verificación de la calibración
4.- MCC
5.- Blanco de Reactivos.
6.- Muestra 1
7.- Muestra duplicada
8- Muestra adicionada
9.- Muestra 2 a 25
10.- Estándar de verificación de la estabilización de calibración
11.- Blanco de chequeo.
3.7.4.5.12 Criterios de Aceptación y Rechazo
Para el seguimiento de las especificaciones de aceptación y rechazo consultar las siguientes
tablas:
Verificación del equipo:
Punto de verificación Criterio
Lo que el fabricante recomiende Ver instructivo de de equipo
correspondiente
Verificación de la calibración inicial
Punto de verificación Criterio
Estándar de verificación de la calibración inicial 80 – 120 % Recobro
Verificación de contaminación de reactivos
Punto de verificación Criterio
Blanco de reactivos < limite de detección
Verificación del proceso analítico
Punto de verificación Criterio
Muestra de control de calidad 80 – 120 % Recobro
Verificación de interferencias de matriz
Punto de verificación Criterio
Muestras adicionadas 75 – 125 % Recobro
Verificación de la estabilidad de la curva de calibración
Punto de verificación Criterio
Estándar de verificación continua 80 – 120 % Recobro
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3.7.4.6 Calibración
La estandarización diaria se prepara con un blanco así como un mínimo de 4 estándares, esta curva se
verifica con el estándar de verificación continúa de la curva de calibración, que debe ser de una
concentración equivalente al punto medio de la curva. El porcentaje de recuperación debe ser de 90-
110%.
Se necesitan al menos 4 estándares de calibración. Uno debe contener analitos a una
concentración cercana, pero superior a la del límite práctico de cuantificación para cada
analito; los otros deben estar a concentraciones que cubran el intervalo esperado en las
muestras. Por ejemplo, si el LDM es 0.01µg/L y el LPC es de 0.05 µg/L, se espera que la
muestra contenga concentraciones mayores de 0.05 µg/L.
Si se utiliza regresión lineal por mínimos cuadrados, deberá obtener el factor de correlación
“r 2 ” para cada analito, el cual deberá ser mayor o igual a 0.997 si “r” es menor a este valor, la
curva de calibración no es lineal y deberá verificarse la preparación de los estándares de
calibración, el ICP/AES y repetir la calibración.
3.7.4.7 Procedimiento Analítico
2.1.5.
3.7.4.7.1 Análisis de los extractos de las muestras para aire ambiente
Los extractos para el análisis de aire ambiente se deben analizar en un espectrómetro de
fluorescencia atómica por vapor frío (CVAFS) siguiendo los lineamentos que se establecen
en el EPA Compendium Method IO-5.
3.7.4.7.2 Análisis de los extractos de las muestras para todas las demás matrices
Los extractos son analizados en el AAEVF referido en 3.7.4.3
3.7.4.7.3 Cálculos
3.7.4.7.3.1 AGUA
3.7.4.7.3.2 SUELOS
VER EN METALES Y METALOIDES
VER EN METALES Y METALOIDES
3.7.4.7.3.3 SEDIMENTOS (MARINOS Y EPICONTINENTALES)
VER EN METALES Y METALOIDES
3.7.4.7.3.4 ALIMENTOS PROCESADOS, SIN PROCESAR, TEJIDOS,
ORGANISMOS
VER EN METALES Y METALOIDES
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