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células en cajas T175 con 20 ml de medio. Las células se incubaron a 37°C y 5%
CO2, cambiando el medio de cultivo cada 2 días.
6.4.2 Pasaje celular de menisco
Cuando los cultivos en monocapa llegaron a confluencia después de 7 a 10 días,
se cosecharon las células de la siguiente manera: se aspiró el medio con pipeta
Pasteur de la caja de cultivo y se agregó tripsina-EDTA y esperamos 5 minutos
exactamente mientras se monitorea el desprendimiento de la capa celular. Ya
desprendida la monocapa, se colocó en tubos de 50 ml y se agrega 5 ml de
PBS/albúmina al 2.5% y se centrífuga a 300 x g por 6 minutos.
6.4.3 Construcción del menisco de bioingeniería.
Se sembraron alrededor de 10 millones de células por constructo meniscal, y se
utilizaron dos polímeros para generar el sustituto de menisco, el primero que forma
el centro del mismo y se constituye de PGA y el segundo, envuelve al primero y
se compone de celulosa oxidada.
El constructo de PGA se cubrió con la celulosa oxidada y se le dio forma y medida
dependiendo de cada caso.
6.5 Procedimiento anestésico.
Los sujetos de estudio se indujeron con Xilazina intramuscular a 0.8mg x kg, y se
realizó una sedación leve con la infusión intravenosa de 5 mgr x kg de Ketamina.
Acto seguido, se colocó a la oveja en decúbito lateral y se realizó la preparación
de aproximadamente 20 cm de la región lumbar en donde se quitó la lana, se hizo
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