Enzygnost* Anti-HBs II - Medcorp

Matériel nécessaire
BEP ® II : pour la distribution automatique des réactifs et l’automatisation des étapes de lavage
BEP ® III : pour l’automatisation du test après la distribution des échantillons et de l’exploitation
des résultats
BEP ® 2000 : pour l’entière automatisation du test et de l’exploitation des résultats
Pipettes : pipettes à embout de 25, 100 et 1000 µl.
Incubateur : bain-marie couvert (+37 ± 1°C) ou méthode d’incubation équivalente
Tout le matériel utilisé pour la réalisation du test doit être validé.
Echantillons à tester
Utiliser des échantillons (sérums humains ou plasmas citratés, héparinés ou prélevés sur EDTA)
obtenus selon les techniques standard des laboratoires. Les échantillons peuvent être
conservés 3 jours maximum à +2/+8°C. Pour une conservation plus longue, les congeler.
Réalisation du test
Réalisation du test sur le BEP ® II
1. Schéma de distribution : déterminer le nombre de cupules nécessaires (= nombre
d’échantillons à tester, plus 6 cupules pour les contrôles).
2. Distribution des contrôles et échantillons :
Test qualitatif/Test quantitatif (α - méthode) :
Distribuer dans 4 cupules (A1 à D1) 100 µl de Sérum Anti-HBs négatif, dans 1 cupule (E1)
100 µl de Sérum Anti-HBs 100, dans les cupules suivantes 100 µl de chacun des échantillons,
puis en fin de série ou en fin de plaque de nouveau 100 µl de Sérum Anti-HBs 100.
Les pipetages doivent être enchaînés, et ne pas durer plus de 15 min par plaque.
Important : il n’est pas possible de distribuer d’abord le Sérum Anti-HBs 100 dans les 2
cupules prévues, puis les échantillons entre celles-ci.
Test quantitatif (chaque concentration du standard) :
distribuer 100 µl de Sérum anti-HBs négatif dans 4 cupules, 100 µl de chaque dilution du
sérum correspondant à 100, 50, 25, 10 et 5 UI/l dans 2 cupules, puis 100 µl de chacun des
échantillons (éventuellement prédilués) dans les cupules suivantes.
Enchaîner la distribution du conjugué immédiatement après celle des échantillons.
3. Distribution du conjugué : distribuer dans chaque cupule 25 µl de Conjugué AgHBs/POD
(Anti-HBs II).
Couvrir ensuite d’une feuille adhésive et placer la plaque dans l’incubateur immédiatement
après la distribution du conjugué.
4. Incubation : laisser incuber 60 ± 2 min à +37 ±1°C, et enchaîner immédiatement le
processus de lavage.
5. Lavage : retirer la feuille adhésive, aspirer le contenu de toutes les cupules, et distribuer dans
chacune d’elles env. 0,3 ml de Solution de lavage. Laver 4 fois. Dès la fin du processus de
lavage, distribuer immédiatement le substrat afin d’éviter tout dessèchement.
6. Distribution du substrat : ajouter dans chaque cupule 100 µl de la solution d’emploi du
chromogène, et couvrir d’une nouvelle feuille adhésive.
7. Incubation du substrat : laisser incuber 30 ± 2 minutes à +15/+25°C à l’abri de la lumière.
8. Arrêt de la réaction : retirer la feuille adhésive et ajouter dans chaque cupule 100 µl de
Solution d’arrêt POD en respectant le même rythme qu’en 6.
9. Mesure : faire une mesure photométrique dans l’heure qui suit à 450 nm. La longueur d’onde
de référence doit être de 650 nm (comprise entre 615 et 690 nm).
OQNE G11 C0541 (906) H/R 26