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Métodos para la evaluación...
Estimados de actividad de rhEPO han sido
realizadas usando cultivos de líneas
celulares basadas en diferentes líneas
incluyendo AS-E2, TF1, UT-7 y UT-
7/EPO [54-56]. Un reporte del empleo de
la línea celular TF1 (de eritroleucemia
humana), para la determinación de la
estimulación proliferativa inducida por
lotes de rhEPO mostró correspondencia
con la respuesta obtenida con la referencia
empleada (material de referencia
internacional de rhEPO, 87/684) y el
análisis cuantitativo por Western [57].
Sin embargo, se plantea en general que
estos ensayos in vitro son incapaces de
discriminar entre la EPO intacta y sus
variantes asialo-o aglicosadas, las cuales
tienen un tiempo de vida media mucho
más corto y, por tanto, una bioactividad
muy reducida cuando son administradas in
vivo.
Por otra parte, ha sido reportado
recientemente el empleo de un método
[58], mediante el cual se determina la
carga hipotética de N-glicanos. La que se
determina a través del cálculo de un
número Z, según una expresión basada en
los reportes obtenidos de la aplicación de
una cromatografía de intercambio aniónico
a pH alto con detección amperométrica
(HPAEC-PAD) en la medición de N-
glicanos previamente liberados de
muestras de rhEPO [59-61].
El estudio plantea que cambios en los
valores Z de muestras de rhEPO pueden
ser paralelos a cambios en los respectivos
patrones que se obtienen por
isoelectroenfoque (IEF), los cuales reflejan
la distribución de las glicoformas respecto
a la carga de las muestras [60]. Sin
embargo, los datos que se obtienen con
IEF son menos significativos que la
determinación de Z, dado que los
cromatogramas HPAEC-PAD son capaces,
además, de revelar cambios sutiles en las
estructuras N-glicosídicas, como son la
ocurrencia de repeticiones o reemplazo.
Por otra parte, variaciones en el contenido
de ácido siálico, por ejemplo debido a la
pérdida de residuos, son reflejados
también en el valor de Z, siendo más
ventajosa esta determinación dada su
mayor precisión y exactitud. Además,
cambios en las estructuras de
carbohidratos sulfatados presentes en
rhEPO, son reflejadas en el valor Z y en el
cromatograma HPAEC-PAD, sin
embargo, estos no se obtienen a través de
la determinación de ácido siálico, por lo
que el método ha mostrado que puede ser
muy útil en el orden de garantizar
consistencia lote a lote, para determinar el
aclaramiento in vivo y predecir la
bioeficacia de glicoproteínas terapéuticas
[59,60].
Como se ha evidenciado, diferentes
ensayos para la evaluación de la actividad
biológica de preparaciones comerciales de
rhEPO son aplicados como parte de la
rutina de la liberación de lotes. La
tendencia actual en el control de calidad de
biológicos, es el desarrollo e
implementación de métodos in vitro, como
resultado de la mayor variabilidad,
duración y costo de los ensayos en
animales. Así como el uso de las pruebas
de control de calidad en general, para
monitorear la consistencia, más que para
establecer la “verdadera” efectividad del
producto, significando como consistencia
de producción que un lote de producto sea
de la misma calidad y se encuentre dentro
de las especificaciones de un lote que ha
demostrado ser seguro y eficaz en ensayos
clínicos o en animales. Por lo que se
mantiene un continuo análisis y
mejoramiento de los métodos establecidos
hasta el momento, así como la
introducción de nuevos bioensayos para
rhEPO.