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54El rincón de Schering-PloughVacuna de agalaxia contagiosa en ovino y caprinoValoración de la respuesta inmuneLa vacunación intensiva persigue el control clínico de la agalaxia contagiosa ovina y caprina, lo que demuestraque existe una relación directa entre los niveles séricos de anticuerpos específicos y la reducciónde la morbilidad, la intensidad lesional y la excreción de micoplasmas en animales vacunados.En este estudiose demuestra quela vacuna Galazeleleva los títulosséricos deanticuerposfrente aMycoplasmaen los primeros42 días trasla vacunación.Roberto GuijarroSchering-Plough Animal Health,San Agustín de Guadalix (Madrid)Imagen archivo AlbéitarLa agalaxia contagiosa es una de lasenfermedades más extendidas en España(1), y que más pérdidas ocasiona en lossectores ganaderos del ovino y del caprinode ordeño, debido a las formas clínicasmamarias de hipogalaxia/ agalaxia totalbilateral con atrofia del tejido glandular,pudiendo permanecer los animales conlesiones e improductivos durante años.Las medidas de control (2) incluyen laprofilaxis sanitaria (“stamping out”, aislamiento)y la vacunación (España, Italia yGrecia) (3) de todo el efectivo con vacunasinactivadas.Esta medida no protege a los animalesfrente a la infección pero sí se ha comprobadoque mitiga su gravedad clínica, y queexiste una relación directa entre titulaciónsérica de anticuerpos neutralizantes,reducción de la excreción y eliminación dela morbilidad en ciertos grupos de edad(4). El grado de eficacia vacunal, además,se ha vinculado al método de inactivación(5) (integridad de las proteínas inmunogénicas)y al tipo de excipiente (6) en el quese vehicula el antígeno.ObjetivosEn este ensayo se ha evaluado la eficaciade una vacuna comercial (Galazel, Schering-PloughS.A.) en los programas decontrol de la agalaxia contagiosa de lospequeños rumiantes (ovino y caprino),según la capacidad de inducir anticuerposséricos posvacunales respecto a unlote control no vacunado.Tabla 1.Valores séricos por grupo de ovino.Materiales y métodosAnimales incluidosSe dispuso de 45 animales en buen estado(20 ovejas y 25 cabras) no gestantes,de 8-10 meses de edad, procedentes derebaños libres de Mycoplasma agalactiae,no vacunados previamente, desparasitadoscon 20 mg/kg de netobimin(Hapasil 5% SO) a los 20 y 30 días prevacunaciónLos 45 animales se subdividieron en 5grupos:• Grupo A Vacunado: 15 ovejas, recibieron2 dosis de 2 ml de vacuna espaciadas14 días.• Grupo A Control: 5 ovejas, recibieron2 dosis de 2 ml de placebo espaciadas14 días.• Grupo B Vacunado: 15 cabras, recibieron2 dosis de 2 ml de vacuna espaciadas14 días.• Grupo B Control: 5 cabras, recibieron2 dosis de 2 ml de placebo espaciadas14 días.• Grupo B Seguridad: 5 cabras, recibieron2 dobles-dosis de 4 ml de vacunaespaciadas 14 días.Preparado vacunal contra laagalaxia contagiosa (Galazel)Se preparó una vacuna de Mycoplasmaagalactiae inactivada con formaldehido,que contiene 5x10 8 ufc/ml, que fueadyuvantada en una emulsión o/w, con0,2 mg de thiomersal (conservante),indicada para el control de la agalaxiacontagiosa, dosis 2 ml por vía subcutánea,sin periodo de espera en leche nicarne (Lote 01003). Como placebo seaplicaron 2 ml de solución salina fisiológicavía subcutánea.GrupoDía de la muestraV1 V2 V2+7 V2+14 V2+21 V2+28Grupo vacunado 0,405 1,427 2,642 2,142 2,995 2,662Grupo control 0,324 0,260 0,324 0,101 0,297 0,297Tabla 2.Valores séricos en el grupo vacunado de caprino.V1 V2 V2+7 V2+14 V2+21 V2+28Mín 0,11 0,561 0,2 1,96 2,459 2,337Media 0,3467 0,994 2,74 3,004 3,214 2,946Máx 0,582 2,39 5,895 5,396 4,642 3,682Desv. típica 0,0942 0,477 1,401 0,956 0,667 0,330Tabla 3.Valores séricos en el grupo control de caprino.V1 V2 V2+7 V2+14 V2+21 V2+28Mín 0,262 0,245 0,146 0,206 0,06 0,035Media 0,438 0,3786 0,313 0,286 0,1884 0,1344Máx 0,862 0,732 0,76 0,46 0,405 0,18Desv. típica 0,215 0,179 0,232 0,089 0,115 0,051Tabla 4.Valores séricos en el grupo seguridad de caprino.V1 V2 V2+7 V2+14 V2+21 V2+28Mín 0,315 1,206 3,271 2,906 3,652 3,441Media 0,398 1,433 4,584 3,750 4,115 4,039Máx 0,523 1,940 6,523 4,651 4,571 4,576Desv. típica 0,071 0,266 1,094 0,580 0,311 0,394Resumen de procedimientosEnsayo randomizado ciego con la participaciónde dos investigadores; uno encargadode la observación clínica diaria, y elotro responsable de la asignación a cadagrupo con una tabla de asignación alazar, de la administración de la vacuna ode placebo, y de la toma de muestras desangre.V1Antes de la 1ª vacunaciónV2Antes de la revacunaciónV2+7 7 días tras la revacunaciónV2+14 14 días tras la revacunaciónV2+21 21 días tras la revacunaciónV2+28 28 días tras la revacunaciónDurante los 7 días previos al inicio delensayo los animales fueron observadosclínicamente. La 1ª dosis de vacuna (V1)se aplicó el día 0 y la dosis de recuerdo(V2) 2 semanas después. Los días devacunación (V1 y V2), y cada 7 días apartir de entonces se extrajeron muestrasde sangre de todos los animales del ensayo,siendo observados clínicamentedurante al menos 4 días posvacunación.Criterios de valoraciónPara valorar la eficacia de la vacunaciónse mide la titulación de anticuerpos séricosespecíficos los días V1, V2, y semanalmentehasta los 42 días tras la primoaplicación(V2+7, V2+14, V2+21,V2+28).Las muestras de sangre (vía yugular)se recogieron en tubos estériles sin anticoagulante;el suero se obtuvo por coagulaciónespontánea en refrigeración(+2/+8ºC) o mediante centrifugacióndurante 10-15 minutos, dividiéndose enalícuotas y congelándose a –20ºC antesde su envío al Laboratorio de DiagnósticoGeneral (LDG) en las mismas condiciones.Una muestra de retención se conservóen Schering-Plough S.A.Medición de anticuerpos séricosespecíficosPara la cuantificación de los anticuerposséricos específicos se utilizó un ELISAindirecto comercial (CivTest Ovis frentea Mycoplasma agalactiae, Lab. Hipra),determinándose la densidad óptica a unaabsorbancia de 450 nm. Las unidadesresultantes se expresaron como cocienteentre la densidad óptica obtenida y eldoble de la densidad óptica de los controlesnegativos.ResultadosLa interpretación estadística de los resultadosse realizó mediante un análisis previocon gráficos, diagramas de barras yestadísticos descriptivos. Se aplicarondistintos estudios sobre la diferencia delas medias de las concentraciones deanticuerpos entre los distintos grupos.Finalmente, se analizó la proporción desueros positivos a lo largo del periodoestudiado.Las variables consideradas son las concentracionesde anticuerpos en suero enla vacunación, en la revacunación, y 7,14, 21 y 28 días después de la revacunación.Estas variables contienen, paracada día de toma, los datos referentes alos animales vacunados, el “pool” de losmismos (extracción de una muestra delconjunto de todos los sueros), los animalescontroles no vacunados con su correspondiente“pool”, y los cinco animalesdel grupo B seguridad en ganado caprino,con su respectivo “pool”.Para el estudio longitudinal, se usaronvariables correspondientes a las muestrasobtenidas a lo largo del tiempo para cadaanimal tratado, variables correspondientesa las muestras obtenidas para los controlesy variables correspondientes algrupo B seguridad.La interpretación de las concentracioneses la siguiente:• Negativo: la concentración de anticuerposen suero es inferior a 1.000.• Dudoso: la concentración de anticuerposen suero está entre 1.000 y 1.500.• Positivo: la concentración de anticuerposen suero es superior a 1.500.Grupo A de ovinoTras la transformación logarítmica de lasconcentraciones para ambos grupos, sesiguen apreciando niveles superiores deanticuerpos en el grupo vacunado en elperiodo de prueba (V1, V2, V2+7,V2+14, V2+21, V2+28) (tabla 1). Realizandoel contraste de hipótesis “Ho: mvimci>=0; H1: mvi-mci1.500)hasta los 21 días tras la 2ª vacunación.Posteriormente, la concentración tiendea bajar en algunos animales, mientrasque en otros se mantiene siempre superiora la concentración crítica de 1.500.El día de la última toma, en todos loscasos se aprecia concentración positivade anticuerpos.El comportamiento de los controles esdiferente a los vacunados. La titulaciónsérica de los controles es siempre inferiora 1.000 (negativos) oscilando a lo largode la prueba sin ningún patrón común.Analizando finalmente el grupo seguridadse aprecian mayores niveles de anticuerposrespecto al grupo vacunado(dosis normal), no habiendo casos negativosen la revacunación; se deduce unamayor eficacia de la doble dosis aunquesu evolución se asemeje a la vacunacióncon dosis normal. Los resultados (tablas2, 3 y 4) muestran la evolución de lostres “pool” de muestras como resumende todo lo anterior.’100