Stage de Master 2 au Muséum National d - MAG' SITE

2.3.3 Espèces non-planctotrophes lécithotrophes
Le genre Bolma Risso, 1826 (Vetigasteropoda, Turbinidae)
Les larves du genre Bolma sont véligères mais n’ont pas de métatroque (bande ciliée
servant à la nutrition de la larve), ce qui ne leur permet pas de se nourrir dans le plancton.
Les spécimens attribués au genre Bolma (Turbinidae) dont nous disposions
présentaient un éventail de formes suggérant une forte diversité spécifique. Lors d’une
campagne aux îles Salomon, une forme proche morphologiquement d’au moins une des
formes récoltées sur les rides a été récoltée en abondance à une même station. Cet échantillon
a été inclus dans la présente étude afin d’élargir l’aire géographique échantillonnée et donc de
mieux cerner la question de l’endémisme potentiel des espèces. La phylogénie des Turbinidae
est encore mal établie. Wiliam et Ozawa (2006) ont montré que cette famille était
polyphylétique, pour cette raison l’arbre du genre Bolma n’a pas été enraciné. En revanche la
diversité spécifique a été augmenté par le rajout de trois espèces morphologiquement très
différenciées de l’ensemble de l’échantillonnage des Bolma afin de visualiser les distances
entre chaque groupe morphologique.
2.4 ANALYSES MOLECULAIRES
2.4.1 Extraction des ADN totaux
L’extraction des ADN totaux (ADN nucléaires et mitochondriaux) a été réalisée à
partir d’un morceau (5 à 50µg) du muscle du pied des individus. Les tissus et les protéines
sont d’abord digérés dans 150 µl de NucPrep Digestion Buffer et 50 µl de NucPrep Proteinase
K Solution, puis placés dans un thermomixer Eppendorf Confort pendant 12 heures à 55°C
avec une agitation réglée à 500 tours par minute. L’ensemble des opérations d’extraction se
fait sur des plaques de 96 puits adaptées au système ABI PRISM 6100 (Applied Biosystem).
Les ADN totaux sont déposés sur une membrane de silicate préalablement humidifiée au
NucPrep Digestion Buffer. Cette membrane chargée positivement retient l’ADN tandis que
les produits de la lyse cellulaire sont filtrés trois fois avec 160 µl de solution tampon à base
d’éthanol. Les ADN sont ensuite décrochés de la membrane et récupérés par variation de pH
des deux tampons d’élution (volume totale d’élution de 160µl).
Matériel et Méthodes 12