THESE DE DOCTORAT DE L'UNIVERSITE PARIS 6 Capucine ...

2. Electrotransfert 29
La conclusion de cette étude est que très peu de lésions musculaires sont observées (figure 8 c),
les rares cellules musculaires avec centralisation nucléaire observées dans quelques muscles ne sont
pas significatives (figure 8 e), il n’y a pas de lésion vasculaire ou nerveuse, seules quelques lésions
inflammatoires subaigües minimes ou discrètes sont observées au niveau de la gaine conjonctive
périmusculaire (figure 8 d) ou en intramusculaire chez une souris (figure 8 f). On peut supposer
que les lésions inflammatoires au niveau de la gaine conjonctive périmusculaire observées sur les
muscles traités une et trois fois sont dues à l’inhomogénéité de la distribution du champ entre
les électrodes ( [87] et paragraphe précédent).
Biodistribution du plasmide
Différentes études ont montré l’importance de l’accessibilité de l’ADN aux cellules cibles. Ces
études, réalisées principalement sur le muscle squelettique, ont montré qu’améliorer la distribution
du plasmide conduisait à une augmentation de l’expression. Une meilleure distribution peut
être obtenue par exemple par la préinjection d’une solution de sucrose qui crée des espaces entre
les fibres musculaires [36], ou encore avec un prétraitement à la hyaluronidase [105], une enzyme
qui dégrade l’acide hyaluronique, un constituant majeur de la matrice extracellulaire [106]. Par
exemple, Molnar et al. ont montré par histochimie en utilisant le gène LacZ, une augmentation
de la zone du muscle transfectée de 150 à 370% grâce à un prétraitement à la hyaluronidase avant
l’électrotransfert (175V/cm) dans différentes souches de souris [107] (voir aussi chapitre 1). Il est
intéressant de noter que ce prétraitement à la hyaluronidase permet d’utiliser, pour un même
niveau d’expression, des voltages plus faibles tout en réduisant les dommages musculaires [108].
Le poly-L-glutamate a également été utilisé dans le muscle de souris pour augmenter l’expression
d’un transgène : en effet, le poly-L-glutamate est un polymère anionique qui semble augmenter
l’internalisation du plasmide à l’intérieur de la cellule et/ou réduire sa dégradation [109].
2.5 Tissus cibles
L’électrotransfert in vivo apparaît comme une technique simple et efficace de transfert de
gène. Au cours de ces dernières années, cette technique a été employée sur une large variété de
tissus incluant muscle squelettique, peau, foie, poumons, rein, articulations, cerveau, rétine, cornée,
et bien d’autres encore (tableau 4). Différentes conditions d’électrotransfert sont appliquées
selon le tissu cible car le transfert de gène est hautement dépendant de l’organisation du tissu
et de la taille des cellules transfectées. Nous ne détaillerons dans les paragraphes suivants que le
muscle squelettique et la peau, organes que nous avons utilisés au cours de cette thèse.
Muscle squelettique
L’électrotransfert d’ADN dans le muscle squelettique a été découvert de façon indépendante
par trois équipes [76,140–142]. Le muscle squelettique est le tissu cible le plus largement utilisé
pour l’électrotransfert car il offre de nombreux avantages :
– il constitue un large volume facilement accessible,
– le muscle squelettique est constitué de faisceaux musculaires formés eux-mêmes d’un ensemble
de fibres musculaires. Les fibres musculaires sont des cellules très allongées et organisées
en fibres parallèles : de nombreuses fibres auront ainsi une orientation optimale par
rapport au champ et pourront être transfectées sur toute la longueur,
– contrairement aux autres cellules de l’organisme, les cellules musculaires possèdent plusieurs
noyaux plaqués contre la membrane cellulaire ce qui facilite le transfert de gène [143],