THESE DE DOCTORAT DE L'UNIVERSITE PARIS 6 Capucine ...

4. Régulation temporelle de l’expression des gènes 49
RU486
CMV
hPR
VP16
Gal4
Gal4
hPR
RE CMVmin Gène d’intérêt
VP16
GLVP
hPR
Gal4
VP16
hPR
VP16
Gal4
RU486
RU486
hPR
VP16
Gal4
RE CMVmin Gène d’intérêt
Fig. 17 – Système inductible par la mifepristone/RU486
système [260]. Dans le but d’éliminer la protéine VP16 potentiellement immunogène, un autre
laboratoire a substitué le domaine d’activation VP16 par la partie transactivatrice de p65 [261].
La très lente désinduction in vivo du système liée à la longue demi-vie de RU486 et à sa diffusion
lente dans les tissus [244] constitue un obstacle à son développement. Un inconvénient supplémentaire
de ce système est les propriétés abortives du composé RU486 ce qui rend impossible
son utilisation clinique.
Système inductible par la rapamycine Ce système repose sur le contrôle de la dimérisation
de deux protéines chimériques, inactives à l’état de monomère, et qui constituent un facteur de
transcription en hétérodimère. L’une des protéines contient le domaine de liaison à l’ADN et la
seconde le domaine d’activation de la transcription. Les deux contiennent des domaines de liaison
au ligand. La fixation du ligand entraîne la formation de l’hétérodimère.
Dans le premier système décrit [262] la première protéine chimère est une fusion entre le
domaine de liaison à l’ADN de la protéine ZFHD-1 et trois domaines de liaison à la rapamycine
de la protéine humaine FKBP12. La seconde protéine chimère du système contient le domaine de
liaison à la rapamycine de la protéine cellulaire humaine FRAP (FKBP12-rapamycin-associated
protein), associée au domaine de transactivation de la protéine NFκB p65. L’interaction de la
rapamycine ou de son analogue FK506 avec FKPB12 et FRAP entraîne la constitution d’un
activateur de transcription qui active le promoteur inductible comportant des sites de fixation
de ZFHD I.
Ce système, introduit dans des vecteurs AAV, a permis après injection dans des muscles
squelettiques de souris une régulation dose-dépendante de la sécrétion d’érythropoïétine [263] ou
d’hormone de croissance humaine pendant plusieurs mois [264]. Ce système est très efficace. Il présente
l’avantage que les protéines chimères qui le composent sont d’origine humaine et donc susceptibles
d’être bien tolérées chez l’homme. La seule limitation du système est liée aux propriétés
immunosuppressives de la rapamycine ou de son analogue FK506 qui pourraient ainsi conduire à
des effets pleïotropiques dans les cellules cibles. L’utilisation de dérivés non-immunosuppressseurs
s’impose pour une application thérapeutique. La synthèse de certains d’entre eux a déjà été pu-