THESE DE DOCTORAT DE L'UNIVERSITE PARIS 6 Capucine ...

4. Régulation temporelle de l’expression des gènes 39
version mutée du gène cible [223]. La recombinaison homologue s’effectue lors de la division cellulaire.
Cette technique reste cependant peu efficace (rendement de recombinaison faible) et très
coûteuse. Elle reste uniquement applicable pour des lignées cellulaires ou des modèles animaux,
mais en aucun cas pour des applications cliniques car elle nécessite une sélection des cellules dans
lesquelles l’évènement de recombinaison a eu lieu.
TFO (Triplex Forming Oligonucleotide) : utilisation d’oligonucléotides synthétiques capables
de s’hybrider avec de l’ADN double brin. La formation d’une triple hélice entre l’oligonucléotide
et le double brin d’ADN empêche la transcription. La formation de la triple hélice
nécessite la formation de deux liaisons hydrogènes entre chaque base du TFO et la séquence complémentaire
dans le duplexe d’ADN. Ceci contraint les TFO à pouvoir s’hybrider uniquement sur
les bases purines de groupement polypurine-polypyrimidiques de l’ADN. L’efficacité de ces TFO
est cependant limitée par l’accessibilité de l’ADN compacté dans la structure chromosomique et
la faible stabilité de la triple hélice.
Leurres (decoy) : utilisation d’ADN double brin synthétique comme leurre pour les facteurs
de transcription. En effet ces derniers reconnaissent et se lient sur des séquences spécifiques
d’ADN. Il est donc possible d’introduire des séquences d’ADN synthétiques qui vont entrer en
compétition avec les séquences d’ADN natives pour les facteurs de transcription [224].
Stratégie anti-ARNm
L’idée est dans ce cas de cibler l’ARNm d’un gène d’intérêt, prévenant ainsi la synthèse de
la protéine correspondante. D’un point de vue stoechiométrique, cette stratégie peut paraître
moins favorable qu’une stratégie anti-gène, mais elle est cependant attractive car l’ARNm est en
définitive plus accessible, car il est en simple brin.
Leurres : utilisation d’oligonucléotides qui jouent le rôle d’un site de fixation alternatif ou
leurre pour des éléments stabilisateurs qui interagissent normalement avec un ARNm donné. En
éloignant ces protéines stabilisatrices de l’ARNm, le decoy ou leurre, induit une déstabilisation
et donc une destruction de l’ARNm.
Approches antisens : utilisation de séquences d’acides nucléiques antisens (complémentaires)
entraînant la formation intracellulaire d’un hybride entre l’ARN messager cible et la séquence
en antisens par un appariement des bases complémentaires. Le duplexe ainsi formé empêche la
traduction de l’ARNm initial et initie des mécanismes conduisant à sa destruction. Les différents
types de séquences antisens, qui varient selon leur nature chimique, peuvent agir à différentes
étapes de la synthèse d’une protéine mais ils ont tous comme fonction ultime d’inhiber la synthèse
de cette protéine [225].
L’acide nucléique antisens peut prendre différentes formes :
(1) ARNm antisens codé par un vecteur : on introduit dans la cellule cible un vecteur
codant le gène d’intérêt en orientation antisens. Il y aura donc transcription d’un ARNm complémentaire
de l’ARNm cible. La formation intracellulaire d’un hybride entre l’ARNm naturel
et la séquence antisens inhibe la synthèse de la protéine par deux mécanismes possibles : (i) en