UNIVERSITE DE BOURGOGNE - Université de Bourgogne

log = log (N/N0) dont N0 est le nombre des colonies formées issue de la solution
témoins et N est le nombre des colonies formées après le choc. Plus que log est négatif, plus
que le choc est efficace.
2.3. Dosage des composés d’arôme
2.3.1. Extraction liquide-liquide
La γ-dodécalactone est extraite du milieu de biotransformation par l’éther diéthylique
(pureté 99,8%, Prolabo, Vaulx-en-Velin). La γ-undécalactone (pureté 99%, Sigma-Aldrich, St
Quentin-Fallavier) a été utilisée comme étalon interne de l’extraction et du dosage
chromatographique. Nous avons optimisé l’extraction : 2 mL d’éther diéthylique sont ajoutés
à 2 mL de milieu dans un vial en verre de 4 mL qui est retourné ensuite une dizaine fois de
suite. Après 30 min de repos, la phase supérieure est prélevée et peut être injectée directement
dans le chromatographe.
2.3.2. Quantification par chromatographie en phase gazeuse
L’appareil est un chromatographe en phase gazeuse Hewlett-Packard HP 6890 series
(Agilent Technologies, Montluçon), équipé d’un injecteur split/splitless et d’un détecteur à
ionisation de flamme. Il comporte une colonne capillaire HP-Innowax (longueur 30 m,
diamètre 320 µm, épaisseur du film 0,25 µm) (Agilent Technologies), dont la phase
stationnaire est composée de polyéthylène glycol.
Le gaz vecteur est de l’azote U, son débit est de 3 mL.min -1 . Les extraits sont injectés
automatiquement à l’aide d’un passeur d’échantillons (HP-Injector modèle G1513A). Les
températures de l’injecteur et du détecteur sont respectivement de 250°C et 300°C. La
température du four est programmée de 60°C à 145°C à raison de 5°C par minute puis de 2°C
par minute jusqu’à 180°C. Les données sont analysées grâce au logiciel d’acquisition et
d’intégration HP-Chemstation (Agilent Technologies).
2.4. Analyses des stérols
Les stérols dans la cellule existent sous 2 formes soit libres dont dans la membrane
plasmique, soit estérifiés (forme réserve) qui sont de principaux composés des corps
lipidiques.
Nous avons estimé l’évolution des stérols en fonction du stress remis aux cellules. Les
stérols sont extraits en utilisant n-heptane puis quantifiés par HPLC et spectrométrie. Les
stérols libres sont extraits selon (Shobayashi et al., 2005). Les stérols totaux sont extraits
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