Oncognse des tumeurs respiratoires et urognitales - Service d ...

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exceptionnellement, de la betacaténine dans le cancer de la prostate. Les hypothèses actuelles sur les
altérations de la betacaténine dans la progression du cancer de la prostate, sont que la betacaténine est
capable d'entrer dans le noyau par un mécanisme indépendant du complexe APC et pourrait
éventuellement se lier aux récepteurs des androgènes et être responsable d'un des mécanismes de son
activation en l'absence du ligand. Nous avons envisagé d’etudier de façon plus précise la fonction de la
pPC, et de developper des outils pour bloquer son action.
Projet Actuel
L'objectif de notre démarche de recherche est de caractériser les modifications induites au
niveau du tissu prostatique par la privation androgénique et d’identifier des anomalies
moléculaires critiques impliquées dans l’acquisition de la résistance au traitement hormonal du
cancer prostatique afin de définir de nouvelles cibles thérapeutiques. Dans ce contexte, nous
avons récemment caractérisé un nouveau membre de la famille des protocadhérines, la
protocadhérine-PC. Son expression est induite au cours de l’acquisition de la résistance aux
stimuli apoptotiques et elle est sur exprimée dans le cancer en échappement hormonal. La
transfection des cellules prostatiques par un vecteur permettant l’expression de la
protocadhérine-PC leur confère une résistance à l’apoptose induite par le phorbol ester. Son
mécanisme d'action serait associé à la β-caténine qui vient d'être décrite comme nouveau coactivateur
du récepteur des androgènes
Les objectifs spécifiques de ce projet sont de préciser le rôle de la protocadhérine-PC dans la
transition vers l'hormonorésistance du cancer de la prostate et de placer cette altération
moléculaire parmi celles décrites à ce stade. Nous évaluerons également le rôle de marqueur de
la protocadhérine-PC.
Afin de répondre à ces objectifs, nous proposons de réaliser les expérimentations suivantes.
a- Relation Protocadhérine-PC, récepteur des androgènes et la β-caténine
Nous avons observé dans un modèle in vivo de xénogreffe que l’augmentation de la protocadhérine-
PC est associée avec la suppression des androgènes et nous avons démontré un rôle antiapoptotique de
cette protéine. En collaboration avec l’équipe de Ralph Buttyan (Columbia, NY) nous avons observé,
dans un modèle de double hybride chez la levure, que la protocadhérine-PC est capable de se lier avec
la protéine FHL2 qui est un co-activateur du RA.
Il nous semble important d'évaluer si l’activité de la protocadhérine-PC serait associée à l'activation du
récepteur des androgènes. Pour cela plusieurs approches seront étudiées. Dans un premier temps, les
cellules LNCaP, TR et SSR qui sont des lignées possédant une forme mutée du RA seront transfectées
avec un plasmide contenant les éléments de réponse au RA couplé à un gène reporter qui est la
luciférase. La mesure de l’activité de la luciférase nous indiquera si l’activité transcriptionnelle du RA
serait plus important ou non au niveau des cellules LNCaP-TR et SSR qui sont des lignées
surexprimant la protocadhérine-PC comparé à lignée parentale LNCaP. Par ailleurs les cellules
tumorales prostatiques (DU 145 et PC 3) ne possédant pas de RA, seront co-transfectées avec des
plasmides contenant les ADNc codant pour ces deux protéines. L'activation du RA sera visualisée
selon la technique décrite précédemment. Dans l'hypothèse où la protocadhérine-PC serait capable
d'activer les activités transcriptionnelles du RA, une immunoprécipitation sera réalisée afin d’étudier
les liaisons protocadhérine-PC et RA.
La β-caténine a été récemment décrite comme un nouveau co-activateur du RA. Nous disposons au
laboratoire des vecteurs d’expression exprimant la β-caténine (la forme sauvage et mutée). Selon le
protocole d’étude similaire de celui du récepteur des androgènes, nous étudierons le rôle de la
protocadhérine-PC dans la délocalisation de la β-caténine qui pourrait conduire à l'activation du RA.
Dans l’objectif de pouvoir contrôler l’expression de la protocadhérine-PC et de pouvoir ainsi étudier
sa régulation, nous créons, à partir des lignées LNCaP, PC-3 et DU 145, des lignées inductibles
utilisant les systèmes T-Rex et Ecdysone (Invitrogen). Nous avons obtenu 2 clones issus de la lignée
PC3 qui produisent de façon inductible la protocadhérine-PC. La sélection des clones issus des lignées
LNCaP et DU 145 transfectées avec le plasmide contenant l’ADNc de la protocadhérine-PC est
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