et al
et al
et al
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
4.1.2 พลาสมิดสายผสมที่มาจาก<br />
pKC1132<br />
จากการหาประสิทธิภาพคอนจูเกชันของเชื้อ<br />
S. rimosus R7 ในผลการ<br />
ทดลองขอ 1.3 ทําใหทราบวา S. rimosus R7 ตานทานตอยาอะพรามัยซิน ไมสามารถใชยานี้ใน<br />
การคัดเลือกได การสรางพลาสมิดสายผสมเพื่อทํายีนดิสรัปชันโดยใช<br />
pKC1132 นี้<br />
จึงจะโคลน<br />
ยีนตานไธโอเสตรปทอน (tsr) ใสเขาไปดวย เนื่องจาก<br />
pKC1132 มียีนตานอะพรามัยซินเทานั้น<br />
ชิ้นยีน<br />
tsr ตัดจากพลาสมิด pIJ8671 (ภาพที่<br />
47) ดวยเอนไซมตัด<br />
จําเพาะ EcoRI ไดขนาด 2.0 กิโลเบส แลวโคลนเขาไปในพลาสมิด pUC18 ทรานสฟอรม<br />
พลาสมิดสายผสมเขาสู<br />
E. coli JM109 ไดโคลนที่มีทิศทางของยีน<br />
tsr สวนทางกับยีนตานแอมพิ<br />
ซิลลิน ใหชื่อวาพลาสมิด<br />
pATT412 (ตรวจสอบโคลนดังภาพที่<br />
48) จากนั้นตัดยีน<br />
tsr ขนาด<br />
1.3 กิโลเบส จากพลาสมิด pATT412 ดวยเอนไซมตัดจําเพาะ KpnI แลวโคลนเขาไปใน<br />
พลาสมิด pUC18 ทรานสฟอรมพลาสมิดสายผสมเขาสู E. coli JM109 ไดโคลนที่มีทิศทางของ<br />
ยีน tsr สวนทางกับยีนตานแอมพิซิลลิน ใหชื่อวาพลาสมิด<br />
pATT413 (ตรวจสอบโคลนดังภาพที่<br />
49) โดยพลาสมิดนี้จะมีตําแหนงตัดของ<br />
EcoRI อยูทั้ง<br />
2 ขางของยีน tsr ขนาด 1.3 กิโลเบส<br />
ภาพที่<br />
47 พลาสมิด pIJ8671 ที่นํายีนตานยาปฏิชีวนะไธโอสเตรปทอนมาใช<br />
สวนประกอบสําคัญ คือ oriT (จากพลาสมิด RK2) และยีนตานยาปฏิชีวนะไธ<br />
โอสเตรปทอน (tsr) และอะพรามัยซิน [acc(3)IV]<br />
ที่มา:<br />
Kieser <strong>et</strong> <strong>al</strong>., 2000<br />
95
Change language