et al
et al
et al
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
การสงถายดีเอ็นเอเขาสู<br />
Streptomyces ที่มีระบบการปองกัน<br />
โดยการทําลายดีเอ็นเอแปลกปลอม<br />
ที่มีการเติมหมูเมธิลไดดีกวา<br />
(Fl<strong>et</strong>t <strong>et</strong> <strong>al</strong>., 1997) พลาสมิดที่ใชสําหรับการคอนจูเกชันใน<br />
ปจจุบันลวนเปนพลาสมิดที่ไมสามารถจําลองตัวเองไดใน<br />
Streptomyces (non-replicative<br />
plasmid) ซึ่งจะสามารถเขาไปรวมตัวกับโครโมโซมไดก็ตอเมื่อเกิด<br />
site-specific recombination<br />
ของตําแหนง attachment site (attP) ของฝาจ φC31 ที่อยูบนพลาสมิดนั้นกับตําแหนง<br />
attB บน<br />
โครโมโซม (Bierman <strong>et</strong> <strong>al</strong>., 1992; Thorpe <strong>et</strong> <strong>al</strong>., 2000) หรือโดยการเกิดโฮโมโลกัสรีคอม<br />
บิเนชันของชิ้นดีเอ็นเอจาก<br />
Streptomyces ที่โคลนเขาไปในพลาสมิด<br />
(Bierman <strong>et</strong> <strong>al</strong>., 1992)<br />
วิธีการทําคอนจูเกชันตางสกุลระหวาง E. coli และ Streptomyces ทําไดงายโดยการ<br />
เตรียมเซลล E. coli ผูให<br />
และการเตรียมสปอรของ Streptomyces ผูรับ<br />
แลวนํามาผสมกันใน<br />
อัตราสวนที่เหมาะสม<br />
จากนั้นนําไปเกลี่ยบนจานอาหารเลี้ยงเชื้อ<br />
และคัดเลือกผูรับที่มีพลาสมิด<br />
หรือเอกซคอนจูแกนต (exconjugant) โดยใชยาปฏิชีวนะ (Kieser <strong>et</strong> <strong>al</strong>., 2000) ซึ่งเชื้อแตละ<br />
ชนิดมีสภาวะที่เหมาะสมที่สุดแตกตางกัน<br />
ทําใหตองศึกษาปรับปรุงวิธีการใหเหมาะสมกับเชื้อแต<br />
ละชนิด (Kitani <strong>et</strong> <strong>al</strong>., 2000)<br />
อัตราสวนของสปอรของ Streptomyces ผูรับตอเซลล<br />
E. coli ผูให<br />
เปนปจจัยหนึ่งที่<br />
สงผลตอประสิทธิภาพของการคอนจูเกชัน ตัวอยางเชน การทําคอนจูเกชันตางสกุลระหวาง S.<br />
lavendulae FRI-5 และ E. coli ET12567 (pUZ8002) บนอาหารแข็ง ISP2 ที่มี<br />
MgCl2 เขมขน 10 มิลลิโมลาร ประสิทธิภาพที่ไดจะสูงขึ้นเมื่อคาอัตราสวนของผูรับตอผูใหมีคาต่ําลง<br />
(ประสิทธิภาพอยูระหวาง<br />
1.6x10 -5 - 3.9x10 -8 exconjugant/reciepient) (Kitani <strong>et</strong> <strong>al</strong>.,<br />
2000) อยางไรก็ตามอัตราสวนของผูรับตอผูใหยังขึ้นกับชนิดของอาหาร<br />
ตัวอยางในการทดลอง<br />
เดียวกันเมื่อใชอาหารแข็ง<br />
MS ที่มี<br />
MgCl2 เขมขน 10 มิลลิโมลาร ประสิทธิภาพที่ไดจะใกลเคียง<br />
กันในทุกอัตราสวนของผูรับตอผูให<br />
(ประสิทธิภาพประมาณ 10 -6 exconjugant/reciepient) แต<br />
การคอนจูเกชันระหวาง S. toyocaensis และ E. coli S17-1 พบวาอัตราสวนของผูรับตอผูใหมี<br />
ผลตอประสิทธิภาพของการเกิดคอนจูเกชัน (Matsushima and B<strong>al</strong>tz, 1996)<br />
ชนิดของอาหารแข็งจึงเปนอีกปจจัยหนึ่ง<br />
ซึ่งสงผลตอประสิทธิภาพของการคอนจูเกชันตาง<br />
สกุล ตัวอยางเชน การคอนจูเกชันระหวาง S. lavendulae FRI-5 และ E. coli ET12567<br />
(pUZ8002) บนอาหารแข็ง R5 ที่มี<br />
MgCl2 10 มิลลิโมลาร พบวาไมมีการสงถายพลาสมิด<br />
แตสามารถเกิดการสงถายไดดีเมื่อใชอาหารแข็ง<br />
ISP2 และ MS ที่มี<br />
MgCl2 10 มิลลิโมลาร<br />
(Kitani <strong>et</strong> <strong>al</strong>., 2000) ในการคอนจูเกชันระหวาง S. fradiae และ E. coli S17-1 เมื่อศึกษาโดย<br />
ใชอาหารหลายชนิด คือ AS1, TS และ R2 พบวาอาหารแข็ง AS1 ใหผลดีที่สุด<br />
สวน R2 ไมเกิด<br />
การสงถายพลาสมิด (Bierman <strong>et</strong> <strong>al</strong>., 1992) ในการคอนจูเกชันระหวาง S. toyocaensis และ E.<br />
21
Change language