et al
et al
et al
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
จนกวาจะแหง (1-2 วัน) ละลายตะกอนในเมธานอล 0.5-1 มิลลิลิตร ตามความเหมาะสม<br />
นําไปเก็บรักษาที่<br />
-20 องศาเซลเซียส<br />
สกัดไรโมซิดินจากเสนใยที่ติดอยูบนกระดาษกรอง<br />
โดยนําไปแชลงในขวดรูป<br />
ชมพูขนาด<br />
250 มิลลิลตร ที่มีบิวทานอล<br />
(n-butanol) ปริมาตร 100 มิลลิลิตร นําไปเขยา 200<br />
รอบตอนาที เปนเวลา 1 ชั่วโมง<br />
กรองแยกตะกอนและเก็บสวนสารละลายไว นําตะกอนไปสกัด<br />
ซ้ําเชนเดิม<br />
นําสารละลายมารวมกัน นําไประเหยบิวทานอลออกโดย เขยา 200 รอบตอนาที ใน<br />
ตูควัน<br />
จนกวาจะแหง แลวละลายตะกอนในเมธานอล 0.5-1 มิลลิลิตร ตามความเหมาะสม<br />
นําไปเก็บรักษาที่<br />
-20 องศาเซลเซียส<br />
6.4 ตรวจสอบโดยโครมาโทกราฟแบบแผนเคลือบ<br />
(Thin-Layer Chromatography; TLC)<br />
6.4.1 การคัดเลือกตัวพา (Mobile Phase)<br />
ทดสอบตัวพาในการแยกสารปฏิชีวนะมาโครไลด ชนิดโพลีอีน ดวย<br />
TLC ใชนัยสตาตินเปนสารทดสอบ และแผน TLC เปน Silica gel 60 F254 (Merck, USA) ทํา<br />
โดยจุดสารละลายนัยสตาติน เขมขน 10 มิลลิกรัมตอมิลลิลิตร ในเอธานอล ลงบนแผน TLC ที<br />
ละ 2 ไมโครลิตร ปริมาตรรวม 10 ไมโครลิตร (100 ไมโครกรัม) รอใหแหง จึงนําไปทํา TLC<br />
โดยใชตัวพาชนิดตางๆ และตรวจสอบการเคลื่อนที่ของนัยสตาตินภายใตแสงอัลตราไวโอเลต<br />
6.4.2 การทํา TLC และไบโอออโทกราฟ (Bioautography)<br />
นําสารสกัดซึ่งตองการตรวจสอบ<br />
จุดลงบนแผน TLC Silica gel 60<br />
F254 ทีละ 1 ไมโครลิตร รวม 3 ไมโครลิตร สูงจากขอบลาง 1.5 เซนติเมตร เปรียบเทียบกับ<br />
นัยสตาติน 100 ไมโครกรัม ทิ้งไวใหแผน<br />
TLC แหง แลวทํา TLC โดยใชตัวพาที่คัดเลือกได<br />
จากขอ 6.4.1 ตรวจสอบผลภายใตแสงอัลตราไวโอเลต<br />
ทําไบโอออโทกราฟ โดยนําแผน TLC ที่ระเหยตัวพาดีแลว<br />
วางลงใน<br />
กลองปลอดเชื้อ<br />
แลวเททับดวยอาหารกึ่งแข็ง<br />
PDA ที่แขวนลอยดวยสปอรของ<br />
A. niger ใหทั่วทั้ง<br />
แผน บมไวที่อุณหภูมิหอง<br />
เปนเวลา 2-3 วัน ตรวจสอบตําแหนงการเกิดวงใส (Brautas<strong>et</strong> <strong>et</strong> <strong>al</strong>.,<br />
2000)<br />
36
Change language