et al
et al
et al
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
การสงถายพลาสมิดเขาสู<br />
Streptomyces<br />
การสงถายพลาสมิดเขาสู<br />
Streptomyces สามารถทําไดหลายวิธี อาทิ ทรานสฟอรเมชัน<br />
(transformation), ทรานสดักชัน (transduction) และคอนจูเกชัน (conjugation) ซึ่งจะพบ<br />
ขอจํากัดอยูหลายประการ<br />
เชน การทําทรานสฟอรเมชันจะมีประสิทธิภาพต่ํา<br />
การทําทรานสดัก<br />
ชันทําไดไมแพรหลายเนื่องจากขาดแคลนฝาจ<br />
(phage) ที่สามารถใชกับเชื้อไดหลายชนิด<br />
(Kieser<br />
<strong>et</strong> <strong>al</strong>., 2000) จึงมีการพัฒนาวิธีการใหมใหสามารถสงถายพลาสมิด เขาสู<br />
Streptomyces ได<br />
อยางมีประสิทธิภาพ ดังที่จะไดกลาวตอไป<br />
Streptomyces หลายชนิดมีระบบการปองกัน โดยการทําลายดีเอ็นเอแปลกปลอม<br />
(restriction-modification system) (Sanchez <strong>et</strong> <strong>al</strong>., 1985; MacNeil, 1988; Rodicio and<br />
Chater, 1988) ดังนั้นการสงถายดีเอ็นเอที่ไมมีการเติมหมูเมธิลโดยผานดีเอ็นเอนั้นเขาสู<br />
E. coli<br />
สายพันธุที่ขาดการเติมหมูเมธิล<br />
เชน สายพันธุ<br />
ET12567 (MacNeil <strong>et</strong> <strong>al</strong>., 1992) เสียกอนแลว<br />
จึงนํามาถายเขาสู<br />
Streptomyces จะทําใหประสิทธิภาพในการสงถายพลาสมิดสูงขึ้น<br />
(MacNeil <strong>et</strong><br />
<strong>al</strong>., 1992; Fl<strong>et</strong>t <strong>et</strong> <strong>al</strong>., 1997)<br />
วิธีการสงถายพลาสมิดเขาสู<br />
Streptomyces ในปจจุบัน<br />
Bibb <strong>et</strong> <strong>al</strong>. (1978) ไดพัฒนาวิธีการทรานสฟอรเมชันของ Streptomyces โดยใชไลโซ<br />
ไซม (lysozyme) ทําใหเสนใยอยูในรูปโพรโทพลาสต<br />
(protoplast) แลวนําดีเอ็นเอเขาสูโพรโท<br />
พลาสตโดยอาศัยการเหนี่ยวนําของโพลีเอธิลีนไกลคอล<br />
(poly<strong>et</strong>hylene glycol; PEG) ซึ่งไดมีการ<br />
นําไปดัดแปลงใชกันอยางกวางขวาง วิธีนี้ตองหาสภาวะที่เหมาะสมในการเตรียมโพรโทพลาสต<br />
และการทําใหคืนสภาพ (regeneration) ซึ่งมีความแตกตางกันไปในแตละสายพันธุ<br />
โดยความถี่<br />
ของการเกิดทรานสฟอรแมนต (transformant) อยูระหวาง<br />
10 6 -10 7 ทรานสฟอรแมนตตอ<br />
ไมโครกรัมของดีเอ็นเอ (Matsushima and B<strong>al</strong>tz, 1985; Kieser <strong>et</strong> <strong>al</strong>., 2000)<br />
อยางไรก็ตาม Streptomyces บางสายพันธุไมสามารถใชวิธีดังกลาวไดอยางมี<br />
ประสิทธิภาพเนื่องจากความเปราะบางของโพรโทพลาสต<br />
หรือบางสายพันธุก็ไมสามารถเตรียม<br />
โพรโทพลาสตได Pigac and Schrempf (1995) จึงไดพัฒนาวิธีการทรานสฟอรเมชันเขาสูเสน<br />
ใยโดยอาศัยอิเล็กโทรโพเรชัน (electroporation) ซึ่งใหความถี่ของการเกิดทรานสฟอรแมนตสูง<br />
กวาวิธีการทรานสฟอรเมชันของโพรโทพลาสต 10 2 -10 3 เทา โดยแสดงใหเห็นวาสามารถนําดี<br />
เอ็นเอเขาสู<br />
S. venezuelae 13S และสายพันธุกลาย<br />
554W, 601 และ 615 ของ S. rimosus R6<br />
ได ซึ่งทั้ง<br />
4 สายพันธุ<br />
ใชวิธีการทรานสฟอรเมชันของโพรโทพลาสตโดยอาศัยโพลีเอธิลีนไกล<br />
19
Change language