et al
et al
et al
You also want an ePaper? Increase the reach of your titles
YUMPU automatically turns print PDFs into web optimized ePapers that Google loves.
ซึ่งอยูเปนกลุม<br />
(cluster) ได แตถาตองการศึกษาหนาที่ของยีนใดยีนหนึ่ง<br />
โดยทําใหยีนที่ตองการ<br />
ศึกษากลายพันธุ<br />
ก็ตองอาศัยการเกิดรีคอมบิเนชันแบบ double crossing over เพื่อให<br />
แลกเปลี่ยนยีนกลายที่อยูบนพลาสมิดกับยีนปกติบนโครโมโซม<br />
การศึกษาหนาที่ของกลุมยีน<br />
Type I PKS ใน Streptomyces โดยใชวิธียีนดิสรัปชัน ไดมี<br />
การนําไปใชกันอยางแพรหลาย ตัวอยางเชน ในการตรวจสอบหนาที่ของยีน<br />
Type I PKS ในเชื้อ<br />
S. hygroscopicus ATCC 29253 วาเกี่ยวของกับการสังเคราะหราพามัยซินหรือไม<br />
เนื่องจาก<br />
เชื้อดังกลาวสามารถผลิตโพลีคีไทดชนิดที่<br />
1 ได 2 ชนิด คือราพามัยซินและไนเจอริซิน<br />
(nigericin) เมื่อทํายีนดีสรัปชันและการแทนที่ยีนโดยอาศัยฝาจเปนดีเอ็นเอพาหะ<br />
ทําใหเชื้อไม<br />
สามารถสังเคราะหราพามัยซิน และไมสงผลตอลักษณะสัณฐานของเชื้อ<br />
(Lomovskaya <strong>et</strong> <strong>al</strong>.,<br />
1997) นอกจากนั้นยังใชในการวิเคราะหยีน<br />
Type I PKS ของการสังเคราะหนิดดามัยซิน จาก<br />
เชื้อ<br />
S. caelestis (Kakavas <strong>et</strong> <strong>al</strong>., 1997), พิมาริซิน จากเชื้อ<br />
S. nat<strong>al</strong>ensis (Aparicio <strong>et</strong> <strong>al</strong>.,<br />
1999) และ แอมโฟเทอริซิน จากเชื้อ<br />
S. nodosus (Caffrey <strong>et</strong> <strong>al</strong>., 2001) เปนตน<br />
ขนาดของดีเอ็นเอที่จะนําไปใชเพื่อทํายีนดิสรัปชันก็มีความสําคัญเชนกัน<br />
พบวาชิ้นดีเอ็น<br />
เอขนาดเล็กที่สุดที่จะสามารถเกิดการรีคอมบิเนชันไดใน<br />
S. viridochromogenes มีขนาดประมาณ<br />
200 คูเบส<br />
ซึ่งนําไปใชทําใหเกิดการกลายของยีน<br />
pat เปนผลใหเกิดการยับยั้งการสังเคราะหสาร<br />
ฟอสฟโนธริซิน-ไทรเปปไทด (phosphinothricin-tripeptide)ใน S. griseus DSM40695<br />
(Hillemann <strong>et</strong> <strong>al</strong>., 1991) สําหรับการทํายีนดิสรัปชันของการสังเคราะหมาโครเทโทรไลด<br />
(macrot<strong>et</strong>rolide) ใน S. nat<strong>al</strong>ensis สามารถไดสายพันธุกลายโดยใชชิ้นดีเอ็นเอขนาด<br />
700 คูเบส<br />
ที่ไดจากการเพิ่มปริมาณยีน<br />
nonS ดวยวิธีพีซีอาร (Smith <strong>et</strong> <strong>al</strong>., 2000) การทํายีนดิสรัปชันของ<br />
ยีน pimD ที่คาดวาเกี่ยวของกับการดัดแปลงภายหลังของสารพิมาริซิน<br />
โดยใชชิ้นสวนของยีน<br />
ขนาด 667 คูเบส<br />
ทําใหพิสูจนไดวายีนดังกลาวทําหนาที่สรางเอนไซม<br />
cytochrome P450<br />
epoxidase (Mendes <strong>et</strong> <strong>al</strong>., 2001) วิธียีนดิสรัปชันใน S. maritimus ก็ไดใชศึกษาการทํางานของ<br />
ยีน encP ซึ่งเกี่ยวของกับการสังเคราะหหนวยเริ่มตนของสารเอนเทอโรซิน<br />
(enterocin) โดยใช<br />
ชิ้นสวนของยีนขนาด<br />
800 คูเบส<br />
และสงถายพลาสมิดดวยการคอนจูเกชันระหวาง E. coli และ<br />
Streptomyces พบวาสายพันธุ กลายที่ไดไมสามารถสังเคราะหหนวยเริ่มตนได<br />
(Xiang and<br />
Moore; 2002)<br />
23
Change language