et al
et al
et al
Create successful ePaper yourself
Turn your PDF publications into a flip-book with our unique Google optimized e-Paper software.
นําชิ้นอาหารที่เจาะออกมา<br />
วางลงบนจานอาหารแข็ง MS ที่เททับดวยเชื้อแลว<br />
บมไวที่อุณหภูมิหอง<br />
เปนเวลา 2-3 วัน ตรวจสอบการเกิดวงใส เทียบกับ S. rimosus R7 สาย<br />
พันธุ<br />
wild type<br />
6.2 การคัดเลือกอาหารเลี้ยงที่เหมาะสมในการสรางสารไรโมซิดิน<br />
ทดสอบเบื้องตนโดยใชอาหารแข็งชนิดตางๆ<br />
โดยเกลี่ยเชื้อ<br />
S. rimosus R7 สาย<br />
พันธุ<br />
wild type ลงบนจานอาหารแข็ง บมไวที่อุณหภูมิ<br />
30 องศาเซลเซียส เปนเวลา 5 วัน กอน<br />
เจาะอาหารไปทดสอบการเกิดวงใสตามวิธีการขอ 6.1<br />
เมื่อคัดเลือกอาหารที่เหมาะสมไดแลว<br />
จึงนําไปทดสอบเลี้ยงเชื้อในอาหารเหลว<br />
ปริมาตร 100 มิลลิลิตร ในขวดรูปชมพูขนาด<br />
250 มิลลิลิตร ซึ่งมีขดลวดสปริงวนรอบกนขวด<br />
โดยบมที่อุณหภูมิหอง<br />
เขยา 200 รอบตอนาที เปนเวลา 3-5 วัน นําน้ําเลี้ยงที่มีเซลลแขวนลอย<br />
ไปทดสอบการผลิตสารไรโมซิดิน โดยตรวจสอบการเกิดวงใสดวยวิธี paper disk assay โดยหยด<br />
น้ําเลี้ยงปริมาตร<br />
50 ไมโครลิตร ลงบนกระดาษกรองเบอร 1 (Whatman, UK) ที่ตัดเปนวงกลม<br />
ขนาดเสนผานศูนยกลาง 5 มิลลิเมตร ซอนกัน 3 แผน ตากใหแหง แลววางลงบนจานอาหารแข็ง<br />
MS ที่เททับดวยเชื้อแลว<br />
ตามวิธีการในขอ 6.1 บมไวที่อุณหภูมิหอง<br />
เปนเวลา 2-3 วัน แลว<br />
ตรวจสอบการเกิดวงใส<br />
6.3 การสกัดสารไรโมซิดิน<br />
เลี้ยงเชื้อในอาหารเหลวที่เหมาะสม<br />
ปริมาตร 100 มิลลิลิตร ในขวดรูปชมพู<br />
ขนาด 250 มิลลิลิตร ซึ่งมีขดลวดสปริงวนรอบกนขวด<br />
โดยบมที่อุณหภูมิหอง<br />
เขยา 200 รอบ<br />
ตอนาที เปนเวลา 5 วัน แยกการสกัดไรโมซิดินเปน 2 สวน คือ น้ําเลี้ยงและเสนใย<br />
โดยกรอง<br />
ดวยกระดาษกรองเบอร 1 เพื่อแยกเสนใยและน้ําเลี้ยง<br />
สกัดไรโมซิดินจากน้ําเลี้ยง<br />
ในขวดรูปชมพูขนาด<br />
250 มิลลิลตร โดยเติม<br />
เอธิลอะซีเทต (<strong>et</strong>hyl ac<strong>et</strong>ate) ปริมาตร 100 มิลลิลิตร ปดฝาดวยแผนฟอยล (foil) ใหสนิด<br />
นําไปเขยา 200 รอบตอนาที เปนเวลา 1 ชั่วโมง<br />
ทิ้งใหแยกชั้นแลวดูดเก็บสวนบนไว<br />
นํา<br />
สวนลางไปสกัดซ้ําเชนเดิม<br />
นําของเหลวสวนบนมารวมกัน กําจัดน้ําที่มีอยูออกไปโดยเติม<br />
MgSO4.3H2O จนอิ่มตัว<br />
(ตกตะกอนดี) แลวกรอง MgSO4 ออกดวยกระดาษกรอง Whatman<br />
เบอร 1 นําไประเหยเอธิลอะซีเทตออกโดย เขยา 200 รอบตอนาที ในตูควัน<br />
(fume hood)<br />
35
Change language