n. 80 Aprile 2013
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documenti<br />
da colpita, risultavano invece indenni. Va rilevato che anche le<br />
manifestazioni simili osservate in Grecia negli anni ’<strong>80</strong> avevano<br />
interessato la cv. Abate Fètel, oltre alla Passa Crassana ed alla<br />
Santa Maria.<br />
L’osservazione, sempre allo stereomicroscopio, di piccoli frammenti<br />
di tessuto vegetale prelevato dalla superficie delle macchie<br />
fogliari rivelava la presenza di fruttificazioni conidiche in<br />
catene che, esaminate al microscopio ottico, risultavano appartenere<br />
al genere Alternaria.<br />
Questi esami iniziali, quindi, portavano tendenzialmente ad<br />
escludere che si potesse trattare di comuni infezioni di Stemphylium<br />
vesicarium o di Septoria pyricola.<br />
Indagini di laboratorio<br />
Per individuare con certezza l’agente eziologico delle alterazioni<br />
osservate, si sono effettuati isolamenti e camere umide.<br />
Per quanto concerne gli isolamenti alcune foglie ed alcuni frutti<br />
sono stati disinfettati in ipoclorito al 1% per 5 minuti; successivamente<br />
risciacquati sotto acqua corrente e poi fatti asciugare<br />
sotto cappa a flusso laminare.<br />
L’isolamento del fungo è stato effettuato prelevando dai margini<br />
delle macchie piccole porzioni di tessuto alterato. Queste<br />
sono state deposte su Water Agar (WA), terreno generico per<br />
miceti che, essendo molto trasparente, permette l’osservazione,<br />
al microscopio rovesciato, del fungo in crescita e , spesso, anche<br />
la sua identificazione a livello generico una volta fruttificato. Le<br />
capsule Petri con gli espianti sono state incubate con un ciclo<br />
giornaliero di 25 °C con 12 ore di illuminazione e di 20 °C con<br />
12 ore di buio.<br />
Dagli isolamenti effettuati, si sono costantemente sviluppate, sia<br />
dai frutti che dalle foglie, colonie fungine di forma circolare, ad<br />
accrescimento abbastanza rapido, che sono state trapiantate sul<br />
substrato di crescita Potato Dextrose Agar (PDA). Su quest’ultimo,<br />
dopo 7 giorni, le colonie presentavano un diametro di circa<br />
5 cm ed erano di colore tra il grigio e il marrone con sfumature<br />
verdastre e con presenza di 4 paia di anelli concentrici di crescita<br />
e sporulazione più o meno evidenti. L’osservazione al microscopio<br />
rovesciato delle colture su WA, dopo 7 giorni dall’isolamento, rivelava<br />
la presenza di abbondanti fruttificazioni ifali catenulate di<br />
Alternaria sp. La struttura ramificata delle catene, le dimensioni<br />
(12-47 x 5-16 µ, mediamente 25,5 x 10,3 µ) e la morfologia dei<br />
conidi muriformi, che apparivano di colore olivaceo, verruculosi,<br />
generalmente con 3 setti trasversali, 1 setto longitudinale e dotati<br />
spesso di un rostro piuttosto breve, risultavano compatibili<br />
con le caratteristiche delle fruttificazioni della specie A. alternata.<br />
Occorreranno però ulteriori approfondimenti per confermare tale<br />
classificazione.<br />
Per quanto concerne le camere umide le foglie, una volta inserite<br />
nei capsuloni ed incubate con un ciclo giornaliero di 12 ore di<br />
illuminazione a 25 °C seguito da 12 ore di buio a 20 °C, sviluppavano<br />
a livello delle macchie, dopo pochi giorni, abbondantissime<br />
fruttificazioni del tutto analoghe a quelle osservate su WA.<br />
Test di patogenicità<br />
Per confermare la patogenicità del fungo, nel mese di settembre<br />
2012 si sono preparate su WA delle colture monosporiche<br />
sia dagli isolati da frutto che dagli isolati da foglia Con un’ansa<br />
sterile si sono prelevati, da colture allestite su PDA, conidi del<br />
fungo con i quali sono state preparate delle sospensioni in 10<br />
ml di acqua distillata sterile. Queste sono poi state versate su<br />
piastre di WA e lasciate riposare per 1 minuto. Successivamente<br />
Figura 1: Sintomi fogliari<br />
Figura 2: Sintomi su frutto<br />
Agricoltura <strong>80</strong><br />
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