Paulo Edson Santos da Silva - uea - pós graduação

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4.1.4.2 Método de difusão em ágar-técnica do poço
O teste para determinação da atividade antimicrobiana foi realizado pelo método de
difusão em ágar, com base na técnica do poço em camada dupla, conforme descrito por
Groove & Randall (1955).
4.1.4.3 Preparo do meio de cultura
Foram preparados 2L de ágar Mueller Hinton (MHA) desidratado (Himedia
Laboratories) para os testes bacterianos na proporção 34g/L de água deionizada, conforme
especificação do fabricante. O material foi deixado em repouso, durante 45 minutos, à
temperatura aproximada de 25ºC, para hidratar. Para o teste da levedura, foram preparados
500mL de ágar Sabouraud a 4% (Difco), os quais foram submetidos à esterilização, por calor
úmido, em autoclave a 121 o C por 15 minutos. Após a esterilização, deixou-se esfriar até a
temperatura de 50 o C. Com uma pipeta graduada esterilizada, dispensaram-se em placas de
Petri (90mm x 15mm) 25mL do ágar MH e 25mL do ágar Sabouraud a 4%.
4.2 Preparo das soluções (Extratos)
Foram preparadas soluções do extrato de raiz e caule de D. negrensis em três
concentrações diferentes, 300, 400 e 500mg/mL, utilizando como solvente água deionizada.
4.3 Preparo do inóculo microbianao
Com o auxílio de uma alça de platina esterilizada, as suspensões foram preparadas a
partir de cada micro-organismos testados (Quadro 1). No tubo de ensaio, previamente
preparado com 10mL de água deionizada estéril, partindo-se de culturas recentes (24 horas),
ajustou-se a densidade das suspensões ao equivalente à escala 1 de MacFarland (MF), para as
bactérias e levedura (Murray, 1999).
4.4 Controles utilizados
Foram utilizados como controles positivos, os antimicrobianos comerciais de
referência, respeitado o perfil de sensibilidade de cada grupo e individualidade dos microorganismos,
e como controle negativo, o solvente utilizado no preparo dos extratos.
Cloranfenicol foi utilizado para as bactérias gram-positivas e gram-negativas;
Itraconazol para a levedura.