Paulo Edson Santos da Silva - uea - pós graduação

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estufa a 35 o C por 24 horas. O halo de inibição do crescimento foi medido em milímetros,
utilizando-se régua milimetrada, e o valor considerado foi a média dos halos das 10 repetições
(Groove & Randall, 1955).
4.6 Método de determinação da concentração inibitória mínima (CIM) em placa de
microdiluição
4.6.1 Preparo das soluções
Foram preparados 100mL do meio de cultura líquido Mueller Hinton Both (MHB)
desidratado (Difco), na proporção 2,1g/100mL de água deionizada. O material foi deixado em
repouso para hidratar. Em seguida, foi submetido à esterilização por calor úmido, em
autoclave a 121 o C, por 15 minutos;
Foram preparadas as soluções dos extratos de raiz e caule na concentração de
300mg/mL de água deionizada;
Pesou-se 1g de Cloreto de 2,3,5-Trifeniltetrazólio (Inlab) 1% (p/v) e adicionou-se
100mL de água deionizada.
4.6.2 Preparo do inóculo microbiano
Com auxílio de uma alça de platina esterilizada, inocularam-se as bactérias testadas
(Quadro 1) no tubo de ensaio, previamente preparado com 10mL de água deionizada estéril,
partindo-se de culturas recentes (24 horas). Ajustou-se a densidade da suspensão ao da escala
1 de MacFarland (MF) (Murray et al., 1999).
4.6.3 Procedimento
Em microplaca estéril de 96 orifícios, distribuídos em oito linhas identificadas de A
até H e doze colunas, dispensaram-se 100 de meio de cultura liquido (MHB) em todos os
orifícios. Na linha A da microplaca foram adicionados 100µL da solução do extrato vegetal,
na concentração de 300mg/mL. Em seguida, com uma pipeta de microdiluição, foram feitas
as diluições seriadas, transferindo-se 100µL da linha A para a linha B, e assim
sucessivamente, até a linha G da microplaca, sendo que a última linha, H, não se dispensou o
extrato, pois foi utilizada como controle do crescimento bacteriano. Foram inoculados, em
cada um dos orifícios da microplaca, 25 da suspensão bacteriana padronizada e da solução
indicadora TTC Cloreto de 2,3,5-Trifeniltetrazólio (Inlab) a 1% (p/v), o qual indicou uma
coloração vermelha nas microplacas que apresentaram crescimento bacteriano. A microplaca