analytica 100

REVISTA
Mídia oficial da Instrumentação e
Controle de Qualidade Industrial
Ano 17 - Edição 100 - Abr/Mai 2019

Analisadores de COT Sievers
Líder
Analisadores
no mercado
de
mundial
COT Sievers
oferece
Líder no mercado mundial oferece
tecnologia inigualável para
tecnologia inigualável para
soluções farmacêuticas:
soluções farmacêuticas:
Total Compliance nas Farmacopeias Globais
Total Integridade Compliance de dados nas Farmacopeias e conformidade: Globais atendendo à CRF 21.11
Validação e verificação de limpeza
Integridade de dados e conformidade: atendendo à CRF 21.11
Atende a USP para medições de condutividade
Validação e verificação de limpeza
Documentação completa de validação
Atende a USP para medições de condutividade
Documentação completa de validação
analiticaweb.com.br

REVISTA
Ano 17 - Edição 100 - Abr/Mai 2019
EDITORIAL
Chegamos à edição de número 100 da revista Analytica, que continua se consolidando como a revista referência
no setor de controle de qualidade industrial. Nesta edição simbólica, trazemos dois grandes artigos para fornecer
bases científicas para todos que atuam na área. No ramo da qualidade dos alimentos, um dos artigos trata sobre a
qualidade de um dos produtos brasileiros que mais se destaca nos mercados europeus e norte-americanos: o mel.
Produzido com baixo custo, o consumo de mel vem aumentando entre os brasileiros, e assim, se faz cada dia mais
necessário o controle de qualidade para evitar a disseminação de patógenos, zelando pela constante qualidade dos
alimentos consumidos.
Em um segundo momento, iremos explorar um ramo completamente diferente: produtos biotecnológicos, como
o anticorpo bevacizumabe, um dos compostos de suma importância do medicamento Avastin. O estudo multicêntrico
focou na demonstração da capacidade de produzir resultados robustos, para dar suporte para a qualidade deste
princípio. Todos os artigos serão acompanhados do complemento normativo, uma inovação na revista que estamos
construindo para melhor informar o leitor sobre as demandas legais em torno das temáticas retratadas.
Na seção de Microbiologia, o leitor encontrará um tema que transita entre diversos ramos da indústria, e se
faz importante em todas elas: os aspectos microbiológicos do estudo de estabilidade de produtos farmacêuticos.
Pautado nas definições da ANVISA e nos manuais que regem nossa legislação, a seção traz um importante panorama
sobre o cuidado com contaminação de amostras segundo as normas de qualidade vigentes.
Na seção de Análises de minerais desta edição traremos uma discussão importante acerca dos erros sistemáticos
e aleatórios, bem como da importância de identificá-los e reduzi-los, parte fundamental da garantia da qualidade e
confiabilidade dos resultados. Em espectrometria de massas, traremos uma análise acerca dos isótopos, sua história
e importância industrial.
Tudo isso associado à importantes informes de mercado e uma agenda de eventos, planejados para embasar
todos que atuam nos mais diversos campos do setor industrial, priorizando custo, benefício e qualidade.
Boa Leitura!
AMANDA NAVARRO
Esta publicação é dirigida a laboratórios analíticos e de controle de qualidade dos setores:
FARMACÊUTICO | ALIMENTÍCIO | QUÍMICO | MINERAÇÃO | AMBIENTAL | COSMÉTICO | PETROQUÍMICO | TINTAS
Os artigos assinados sâo de responsabilidade de seus autores e não representam, necessariamente a opinião da Editora.
Fale com a gente
Comercial | Para Assinaturas | Renovação | Para Anunciar: Daniela Faria | 11 98357-9843 | assinatura@revistaanalytica.com.br
11 3900-2390 | Dúvidas, críticas e ou sugestões, entre em contato, teremos prazer em atendê-lo.
Expediente
Realização: DEN Editora
Conselho Editorial: Sylvain Kernbaum | revista@revistaanalytica.com.br
Jornalista Responsável: Amanda Navarro | redação@newslab.com.br
Publicidade e Redação: Daniela Faria | 11 98357-9843 | assinatura@revistaanalytica.com.br
Coordenação de Arte: HDesign - arte@hdesign.com.br
Produção de conteúdo: Hdesign Comunicação - arte@hdesign.com.br
Impressão: Gráfica Vox | Periodicidade: Bimestral
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
3

REVISTA
Ano 17 - Edição 100 - Abr/Mai 2019
ÍNDICE
03 Editorial
Artigo 1 12
11 Agenda
Avaliação da qualidade microbiológica e físico-química de
méis comercializados em munícipios do estado de Alagoas
Autores: João Paulo dos Santos 1 , Lucas Pedrosa Souto Maior 2 ,
Eliane Costa Souza 3 , Tatiana Almeida Omura de Paula 4 ,
Lúcia Helena Ferreira Santos 5 , Karwhory Wallas Lins da Silva 6 ,
Yáskara Veruska Ribeiro Barros 7 , Velber Xavier Nascimento 8 ,
Alessandra Valério de Almeida Guedes 9 .
Artigo 2 22
Sequenciamento das regiões F(ab)-12 LC e F(ab)-12 HC do anticorpo
monoclonal humanizado bevacizumabe: um estudo multicêntrico
Autores: Eduardo de Souza Matos 1 , Ronaldo Mohana-Borges *1 ,
Vitor Marcel Faça*2, Fábio César Gozzo *3 ,
Wagner Fontes4, Carlos André O. Ricart 4 ,
Fábio César Sousa Nogueira 5 ,
Mário Sérgio Palma §6 ,
Marcelo Valle de Sousa *4 .
Matéria de Capa 36
Vantagens do Método Rápido
na Microbiologia
42 Espectrometria
de Massa
44 Análise de
Minerais
6
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
Microbiologia 46
48 Informe
Científico
50 Em Foco

A RDC nº 234, de 20 de Junho
de 2018 autoriza as Indústrias
Farmacêuticas 280 a terceirizarem as
análises de MATÉRIAS-PRIMAS
ÍNDICE
Terceirize suas análises com o laboratório Reblas
de maior escopo de ensaios específicos em
matérias-primas do país.
Contamos com profissionais qualificados, estrutura
de mais de 1.600m² de área útil de laboratórios e um
parque de mais de 280 equipamentos para atuação
em análises Físico-químicas e Microbiológicas com
área limpa.
Análises Físico-químicas e Microbiológicas:
- Efluentes e águas tratadas.
- Alimentos.
- Ambientais.
- Cosméticos.
- Correlatos.
- Medicamentos.
Estudos de Equivalência Farmacêutica para Registros
de Produtos.
Estudos de Estabilidade de Medicamentos de Uso
Humano e Veterinário para Registros de Produtos.
Centralize suas Rotinas em um Laboratório com
Capacidade de Analisar as monografias por
Completo. Ganhe em Segurança, Prazo e Preço.

QC
R&D
Grupo APS Brasil
Austra Pharmaceutical Solutions Group

IPC
q-doc ®

REVISTA
Ano 17 - Edição 100 - Abr/Mai 2019
Índice remissivo de anunciantes
ordem alfabética
Anunciante
pág
Altmann 19
Analítica LAB 7
Arena Técnica 35
BCQ Consultoria e Qualidade Ltda 21
Bio Scie 45
Disotax 8-9 | 60
FCE Pharma 55
Feira Analítica 51
Anunciante
pág
Greiner Bio-One 53
Las do Brasil 1
Nova Analítica 2
Polar 27
Prime Cargo 59
Sartorius 47
Veolia 4-5
Esta publicação é dirigida a laboratórios analíticos e de controle de qualidade dos setores:
FARMACÊUTICO | ALIMENTÍCIO | QUÍMICO | MINERAÇÃO | AMBIENTAL | COSMÉTICO | PETROQUÍMICO | TINTAS
Os artigos assinados sâo de responsabilidade de seus autores e não representam, necessariamente a opinião da Editora.
10
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
Conselho Editorial
Carla Utecher, Pesquisadora Científica e chefe da seção de controle Microbiológico do serviço de controle de Qualidade do I.Butantan - Chefia Gonçalvez Mothé, Prof ª Titular da Escola de Química
da Escola de Química da Universidade Federal do Rio de Janeiro - Elisabeth de Oliveira, Profª. Titular IQ-USP - Fernando Mauro Lanças, Profª. Titular da Universidade de São Paulo e Fundador do
Grupo de Cromatografia (CROMA) do Instituto de Química de São Carlos - Helena Godoy, FEA / Unicamp - Marcos E berlin, Profª de Química da Unicamp, Vice-Presidente das Sociedade Brasileira de
Espectrometria de Massas e Sociedade Internacional de Especteometria de Massas - Margarete Okazaki, Pesquisadora Cientifica do Centro de Ciências e Qualidade de Alimentos do Ital - Margareth
Marques, U.S Pharmacopeia - Maria Aparecida Carvalho de Medeiros, Profª. Depto. de Saneamento Ambiental-CESET/UNICAMP - Maria Tavares, Profª do Instituto de Química da Universidade de
São Paulo - Shirley Abrantes Pesquisadora titular em Saúde Pública do INCQS da Fundação Oswaldo Cruz - Ubaldinho Dantas, Diretor Presidente de OSCIP Biotema, Ciência e Tecnologia, e Secretário
Executivo da Associação Brasileira de Agribusiness.
Colaboraram nesta Edição:
Eduardo de Souza Matos, Ronaldo Mohana-Borges, Vitor Marcel Faça, Fábio César Gozzo,Wagner Fontes, Carlos André O. Ricart, Fábio César Sousa
Nogueira, Mário Sérgio Palma, Marcelo Valle de Sousa, João Paulo dos Santos, Lucas Pedrosa Souto Maior, Eliane Costa Souza, Tatiana Almeida Omura de
Paula, Lúcia Helena Ferreira Santos, Karwhory Wallas Lins da Silva, Yáskara Veruska Ribeiro Barros, Velber Xavier Nascimento, Alessandra Valério de Almeida
Guedes, Arena Técnica, Claudio Kiyoshi Hirai, Oscar Vegas Bustillos, Eduardo Pimenta de Almeida Melo.

agenda
Agenda 2019
42ª Reunião Anual da Sociedade Brasileira de Química
Data: 27 a 30/05/2019
Local: Expoville - Joinville, Santa Catarina
Informações: http://www.sbq.org.br/42ra/
42º Encontro de Outono da Sociedade Brasileira de Física
Data: 26 a 31/05/2019
Local: Aracaju, Sergipe.
Informações: http://www.sbfisica.org.br/~eosbf/2019/index.php/pt/
XIV Congresso da Associação Brasileira de Mutagênese e Genômica Ambiental
Data: 03 a 06/06/2019
Local: Dall’Onder Grande Hotel – Bento Gonçalves, Rio grande do Sul
Informações: https://congressomutagen.org/index.php
Ecoenergy 2019
Data: 21 a 23/05/2019
Local: São Paulo Expo – São Paulo, SP.
Informações: http://feiraecoenergy.com.br/16/
9º Seminário e 3ª Feira de Engenharia de Fundações Especiais e Geotecnia
Data: 03 a 06/06/2019
Local: Transamérica ExpoCenter – São Paulo, SP
Informações: https://www.sefe.eng.br/
CURSOS
Sociedade Brasileira de Metrologia (SBM)
Cursos presenciais
23 a 24/05/2019 – Calibração de instrumento de área – Massa
06 a 07/06/2019 – Interpretação dos requisitos da NBR ISO/IEC 17025:2017
Informações: http://metrologia.org.br/wpsite/
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
11

artigo 1
Avaliação da qualidade
microbiológica e
físico-química de méis
comercializados em munícipios
do estado de Alagoas
Imagem Ilustrativa
Autores:
João Paulo dos Santos 1 ,
Lucas Pedrosa Souto Maior 2 ,
Eliane Costa Souza 3 ,
Tatiana Almeida Omura de Paula 4 ,
Lúcia Helena Ferreira Santos 5 ,
Karwhory Wallas Lins da Silva 6 ,
Yáskara Veruska Ribeiro Barros 7 ,
Velber Xavier Nascimento 8 ,
Alessandra Valério de Almeida Guedes 9 .
1. Biomédico, Centro de Estudos Superíores de Maceió - CESMAC,
Especialista em Hemoterapia e Imuno-Hematologia, Departamento
de Oncologia Clínica e Experimental, Disciplina de Hematologia e
Hemoterapia da Universidade Federal de São Paulo- UNIFESP –
EPM, Mestrando em Reumatologia, Universidade Federal de São
Paulo UNIFESP – EPM, Analista de Hemoterapia, Hospital Israelita
Albert Einstein-HMVSC.
2. Biomédico Graduada pelo Centro Universitário Cesmac.
3. Nutricionista, Hospital Escola Dr. Hélvio Auto- UNCISAL.
Especialista em Qualidade na Produção de Alimentos. Mestre em
Nutrição Humana-Universidade Federal de Alagoas (UFAL).
4. Bióloga, Especialista em Hemoterapia, SENAC-SP, Coordenadora
Hemoterapia,Hospital Israelita Albert Einstein-HMVSC.
5. Biomédica Graduada pelo Centro Universitário Cesmac.
6. Biomédico Graduada pelo Centro Universitário Cesmac.
7. Biomédica, Universidade Federal de Pernambuco (UFPE).
Professora assistente de Bioquímica na Universidade Estadual
de Ciências da Saúde de Alagoas e de Microbiologia no Centro
Universitário Cesmac.
8. Doutor em Biotecnologia em Saúde, Rede Nordeste de
Biotecnologia – RENORBIO, Pós-Doutorado, Universidade Federal
de Alagoas, UFAL. Professor do Curso de Nutrição do CESMAC.
9. Bióloga, Universidade de Guarulhos - SP
Instituição: Centro de Estudos Superiores de Maceió-CESMAC.
Rua. Cônego Machado, nº 918, CEP 57051 -160 – Maceió-AL.
Correspondência para: João Paulo dos Santos. Rua Jornal de
Alagoas, 41, Farol. Maceió-AL, CEP: 57051-420. Email: joaobiome@
hotmail.com. Tel. (11) 96473-7972.
12
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
Resumo
O mel é um dos alimentos mais puros da natureza,
com mais de 180 substancias distintas e alta proporção
de carboidratos, que apresenta baixo investimento para
sua produção, e que mesmo pouco consumido pela população
brasileira, teve leve aumento de vendas nos últimos
anos, com isso se faz necessário um controle de
sua comercialização, evitando a disseminação de patógenos,
com isso este estudo contribuiu na avaliação da
qualidade sanitária e físico-química dos méis comercializados
no Estado de Alagoas. Sendo analisadas 32
amostras de méis de diversos municípios através da
quantificando bactérias do grupo coliformes, utilizando
a metodologia de número mais provável e analises
de pH, °brix e umidade, onde quatro méis apresentaram
valor para coliforme maior que 100 NMP/mL e 13
amostras apresentaram-se fora do padrão físico-químico
para umidade, além do fato da necessidade de
uma revisão da legislação atual, já que a mesma não
preconiza parâmetros oficiais para pH e °Brix.
Palavras-chave:
Mel, microbiológico, Físico-químico, Coliformes.
Abstract
Title: Evaluation of microbiological quality and
physicochemical of honey sold in the municipalities of
the state of Alagoas
Honey is one of nature's purest foods, with more than 180
different substances and high proportion of carbohydrates,
which has low investment for their production, and even
a little consumed by the Brazilian population had slightly
increased sales in recent years, with it is necessary to
control its marketing, preventing the spread of pathogens,
thus this study contributed to the assessment of the health
and physical-chemistry of honey sold in the State of Alagoas
quality. Being analyzed 32 honey samples from various
municipalities through the quantification of coliform bacteria,
using the most probable number methodology and analysis
of pH, ° Brix and moisture, where four honeys present
value greater than 100 MPN / mL and 13 coliform samples
presented themselves outside the physical-chemical pattern
for moisture, beyond the fact of the need for a revision of the
current legislation, since it does not seek official parameters
for pH and ° Brix.
Keywords: honey, microbiological, physicochemical,
coliforms.

João Paulo dos Santos1,
Bacharel em Biomedicina pelo Centro de Estudos Superiores de Maceió
(2008) e mestrando em Ciências da Saúde aplicadas à Reumatologia,
pela Universidade Federal de São Paulo, (UNIFESP-EPM).
Introdução
O mel é um dos alimentos mais
puros da natureza, sendo este muito
apreciado por seu sabor característico.
Sua composição complexa
pode apresentar mais de 180
substancias distintas e sua grande
quantidade de carboidratos e outras
substancias como enzimas,
vitaminas, grãos de pólen, cera e
muitas outras dependem basicamente,
da composição do néctar
da espécie vegetal produtora e da
espécie de abelha que o produz,
conferindo-lhe características específicas,
enquanto que as condições
edafo-climáticas e o manejo
do apicultor têm menor influência
nesta composição 1, 2 .
Sua produção não requer altos
volumes de investimentos iniciais
nem grandes áreas de terra. Também
não requer dos produtores
rurais, técnicas especializadas e
nem dedicação exclusiva. Os fatores
culturais, e de acessibilidade ao
mel reflete no baixo consumo por
parte da população brasileira, que
é um dos mais baixos do mundo, 3
mesmo o Brasil apresentando segundo
Lieven 4 um clima considerado
quase perfeito para o manejo do
mel e uma flora bastante ampla.
Com isso segundo IBGE 5 o Brasil
produziu 33.931,5 toneladas
de mel em 2012 destinado ao comercio,
tendo o estado de Alagoas
representado 0,4% de toda produção
de mel Brasileiro e 1,7% da
produção do nordeste com 133,7
toneladas e 7700 toneladas respectivamente.
Porém segundo SEBRAE 6 seu
comercio tem tido um leve aumento
desde 2011, devido à grande
procura da sociedade a produtos
naturais e saudáveis, em busca
de uma melhor qualidade de vida
e segundo SILVIA 7 pelo seu potencial
antimicrobiano evidente no
tratamento diante a uma gama de
infecções microbianas e fúngicas
como infecções cutâneas, pneumonia,
meningites e sinusites.
E mesmo o mel apresentando
uma grande propriedade antimicrobiana,
é possível se visualizar no
mel grupos de microrganismos que
podem se originar da flora intestinal
da própria abelha produtora,
esses que na maioria participam de
uma maneira simbiôntica, recebendo
nutrientes e vitaminas para seu
metabolismo em troca de participação
do processo de metabolismo
do mel e do organismo da abelha,
tendo mais destaque para as bactérias
do grupo que tem capacidade
de produzir ácido glucônico e os
localizados na vesícula melífera 8 .
Enquanto isso, o mel dos favos
pode apresentar além microrganismos
do trato intestinal da abelha
como Bacteridiums spp., Bacilluss
spp., Streptococcus spp. e Clostridium
spp., microrganismos oriundos
do ambiente ao redor da colmeia
como leveduras e bactérias
formadoras de esporos 9 .
Mais a presença de coliformes
totais e fecais, principalmente no
mel pós-extração ou com suspeita
de adulteração é indicador de mal
conformidade higiênica-sanitária
da cadeia produtora do mel, por
isso se faz necessário uma avaliação
constante do produtor da
qualidade microbiológica de seu
produto para uma melhor garantia
de minimização dos riscos de patógenos
se disseminarem para o
consumidor através do mel, tendo
o produtor várias regulamentações
nacionais e locais referentes ao
produção de mel como exemplo a
instrução normativa nº 11, de 20
de outubro de 2000 e a norma técnica
do MERCOSUL como referências
atuais 10,11,12 .
E juntamente com diversos parâmetros
físico-químicos se vêm
sendo utilizados na caracterização
do mel. A composição físico-química
varia em função de fatores
que interferem na qualidade, entre
elas estão as condições climáticas,
estágio de maturação, espécie de
abelhas, processamento e armazenamento
13 .
A partir destas informações, o
estudo contribui para: avaliar a
qualidade sanitária e físico-química
dos méis comercializados no Estado
de Alagoas, verificando pH,
°Brix, Umidade e quantificando
bactérias do grupo coliformes.
Material e Métodos
Coleta de Amostras
Foram coletadas Amostras de
méis artesanais produzidos e comercializados
nos municípios de
Barra de Santo Antônio, Barra de
São Miguel, Batalha, Branquinha,
Capela, Coruripe, Feliz Deserto,
Fleixeras, Inhapí, Jequiá da Praia,
Maceió, Marechal Deodoro, Maribondo,
Matriz do Camaragibe, Pão
de Açúcar, Penedo, Piaçabuçu, Porto
Calvo, Porto de Pedras, Roteiro,
Santana do Ipanema, São Luiz do
Quitunde e Senador Ruy Palmeira,
todos pertencentes ao estado de
Alagoas, onde foram submetidas
análises bacteriológicas e físico-
-químicas.
As amostras foram adquiridas
em forma de doação e compra em
suas embalagens originais contendo
no mínimo 200 mL de mel
e classificadas em embalagens
padronizadas e embalagens reutilizadas
de acordo com os critérios
da instrução normativa nº 11 de 20
de outubro de 2000, sendo em seguida
registradas em ficha de cadastro
padrão (Apêndice A) e transportadas
em caixa de isopor até o
Laboratório de Pesquisas do Centro
Universitário CESMAC.
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
13

artigo 1
Autores:
RESULTADOS E DISCUSSÃO
João Paulo dos Santos 1 ,
Lucas Pedrosa Souto Maior 2 ,
COLETA DE AMOSTRAS
Eliane Costa Souza 3 ,
Tatiana Almeida Omura de Paula 4 ,
Lúcia Helena Ferreira Santos 5 ,
Foram coletadas 32 amostras de méis em suas embalagens Karwhory originais, Wallas Lins tendo da Silva 6 ,
Yáskara Veruska Ribeiro Barros 7 ,
somente 11 amostras (34,38%) comercializadas em embalagens Velber padronizadas,
Xavier Nascimento 8 ,
Alessandra Valério de Almeida Guedes
segundo a legislação brasileira em vigor (IN nº 11, de 20 de outubro de 2000),
9 .
Imagem Ilustrativa
enquanto 21 amostras (65,63%) se apresentaram para comercio em embalagens
Análises de Bactérias do alização de uma nova encubação ômetro da marca DIGIMED, modelo
reutilizadas Grupo Coliforme ou fora dos padrões até completar da legislação 48±2h onde Brasileira foi repetir
a leitura.
de precisão, enquanto a concentra-
em DM-20, vigor com 11 duas . casas decimais
De cada amostra foi retirado 25
mL de Sendo mel em capela confirmada de fluxo la-minar e adicionados a 225 mL de confirmativa para a presença de e a Umidade foram determinadas
ausência Em seguida de foi informação realizada a etapa ou rotulo ção de sólidos prático solúveis e objetivo totais (ºBrix) para
o solução consumidor salina a 0,85%, sobre obtendo o produto coliformes em totais todas e termotolerantes. as embalagens refratômetro que foram portátil classificadas
OPPuma
diluição inicial de 10
como improprias de acordo -1 e a De cada tubo de LST considerado TECH, modelo RCZ, com escala a IN nº 11, de 20 de outubro de 2000, demonstrando
partir desta foi preparada diluições
decimais uma não até 10 -3 conformidade , tendo o de LST de através acordo de alça a de legislação platina para de °Brix envase e escala de de 10% produtos a 27%
positivo, foi transferido alíquotas 55% a 95% e precisão de ±0,2%
assim
uma parte do volume restante repartido
em 3 tubos do de centrifuga Mercosul Verde (GMC Brilhante 36/93), Lactose Bile enquanto 2% dade. todas Sendo todas as embalagens
análises re-
estéril para tubos contendo Caldo e precisão de ±0,5% para a Umi-
alimentícios
de fundo cônico estéreis de 25 ml (Caldo VB) e Caldo Escherichia coli alizadas em triplicata 15 .
padronizadas para caráter de análises estiveram futuras. dentro (Caldo dos EC), padrões os tubos foram estabelecidos incubados
em
pelo Mercosul e presença
Para a realização da etapa presuntiva
selo foi do inoculado ministério 1 mL de da cada agricultura 11,16 estufa 35º±0,5C/48±2h Resultados e
de e 45,5±0,2°C/48±2h . respectivamente.
E foram considerados po-
Coleta de Amostras
Discussão
diluição em três tubos de ensaio
O maior percentual de comercialização do mel em embalagens reutilizadas e
contendo 9 mL de caldo Lauril sitivos aqueles que apresentaram Foram coletadas 32 amostras de
inapropriadas Sulfato Triptose (LST) e com tubo ausência de turvação de rotulagem do caldo e correta produção de é confirmada méis em suas em embalagens outra literatura, originais,
tendo somente 11 amostras
Durhan invertido. Sendo em seguida
segundo incubados em Junior temperatura 17 muitos do utilizado consumidores a tabela de NMP os para preferem (34,38%) por comercializadas ser visualizado em em-
na
gás dentro do tubo de Durhan, sen-
onde
de 35°±0,5C/24±2h, sendo considerados
dos positivos casos pela recorrente turvação NMP/mL ao não 14 . tratamento do mel o legislação resíduo brasileira de cera, em vigor trazendo (IN nº
expressão final do resultado em balagens padronizadas, segundo a
maioria
do meio de cultura com produção
11, de 20 de outubro de 2000), enquanto
torna 21 amostras mais “puro”. (65,63%) Sendo se
uma de gás maior no interior confiança dos tubos e propriedade de Ph, Sólidos para Solúveis o produto Totais que se
Durhan, tendo nos casos que não (ºbrix) e Umidade
apresentaram para comercio em
também confirmado entre os municípios analisados, como mostra a figura 1, a
ocorreram a produção de gás no O potencial de hidrogênio (pH) foi embalagens reutilizadas ou fora
prevalência interior dos tubos de de comercio Durhan, a re-
de embalagens medido a 25ºC, reutilizáveis.
utilizando potenci-
dos padrões da legislação Brasileira
em vigor 11 .
Padronizada
Reutilizado
14
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
4
3
2
1
0
Figura 1 – Municípios pesquisados e quantidade de amostras comercializadas em embalagens reutilizadas e
Fig.1 Padronizadas – Municípios de acordo pesquisados a legislação brasileira e quantidade em vigor. de amostras comercializadas em embalagens
reutilizadas e Padronizadas de acordo a legislação brasileira em vigor.

Sendo confirmada a ausência
de informação ou rotulo prático e
objetivo para o consumidor sobre o
produto em todas as embalagens
que foram classificadas como improprias
de acordo a IN nº 11, de
20 de outubro de 2000, demonstrando
assim uma não conformidade
de acordo a legislação de
envase de produtos alimentícios do
Mercosul (GMC 36/93), enquanto
todas as embalagens padronizadas
estiveram dentro dos padrões
estabelecidos pelo Mercosul e
presença de selo do ministério da
agricultura 11,16 .
O maior percentual de comercialização
do mel em embalagens
reutilizadas e inapropriadas e com
ausência de rotulagem correta é
confirmada em outra literatura,
onde segundo Junior 17 muitos
consumidores os preferem por ser
visualizado na maioria dos casos
recorrente ao não tratamento do
mel o resíduo de cera, trazendo
uma maior confiança e propriedade
para o produto que se torna mais
“puro”. Sendo também confirmado
entre os municípios analisados,
como mostra a figura 1, a prevalência
de comercio de embalagens
reutilizáveis.
Também foi constatada a presença
de sujidade, como insetos,
resíduos de plantas e entre outros,
em cinco amostras ou 23,8% do
total de méis comercializados em
embalagens reutilizadas ou inapropriadas,
representando assim
um indicador de baixa higiene no
armazenamento do produto, onde
Lieven 4 também visualizou a presença
de sujidade em suas amostras,
tendo 4 amostras de um total
de 18 com presença de resíduos
de plantas e insetos.
Análises de Bactérias do
Grupo Coliformes
Como é observado na tabela
1, das 32 amostras de méis analisados,
13 amostras (40,63%)
apresentaram resultados maiores
ou iguais a 3 NMP/mL de coliformes
totais (35°C) e termotolerantes
(45°C), enquanto 19 amostras
(59,37%) apresentaram resultados
< 3 NMP/mL caracterizando ausência
de Coliformes totais (35°C)
e termotolerantes (45°C).
Também foi constatando que das
13 amostras com resultado igual
ou superior a 3 NMP/mL, as amostras
A3, A16 e A28, apresentaram
o valor máximo em NMP/mL encontrados
em um alimento.
Desde a revogação da portaria
N° 367 de 04 de setembro de
1994 pelo atual regulamento técnico
de identidade e qualidade do
mel nº 11, de 20 de outubro de
2000, não se visualiza valores de
referência e parâmetros microbiológicos
para avaliação da qualidade
microbiológica do mel, que na portaria
revogada se considerava qualquer
mel com valor igual ou maior
que 3 NMP/mL como improprio
para comercio e consumo, onde
também é encontrada ausência de
valores microbiológicos específicos
para o mel na regulamentação
técnica sobre padrões microbiológicos
para alimentos de consumo
humano (RDC N° 12 de 02 de janeiro
2001), se fazendo necessário
a atualização dos padrões técnicos
do país para o produto, deixando
mais claro para o produtor o limar
de segurança de seu alimento 18 .
Com tudo, mesmo que a legislação
brasileira não apresente referências
microbiológicas para o
mel, a análise microbiológica foi
baseada segundo outras literaturas,
que fixam o limiar de aceitação
de acordo aos padrões da RDC
N° 12 de 02 de janeiro 2001 em
relação ao melado e o melaço que
é de 100NMP/mL, pois levam em
conta a sua similaridade físico-
-química, levando cinco amostras
da tabela 1 com resultados de coliformes
a 45°C maiores que 100
NMP/mL a se enquadrarem como
impróprias para consumo, já que
a presença de coliformes a 45° ou
Termotolerantes segundo Alves 19 e
JAY 20 nos alimentos revelam uma
baixa condição higiênica-sanitária
os tornando um causador de enfermidades,
e em outras literaturas
padrões microbiológicos parecidos
foram visualizados, mesmo em um
alimento com propriedades anti-
-microbianas 21, 22 .
Vide Tabela 1 – Valores dos micro-
-organismos nas amostras analisadas e seus
respectivos municípios.
Outros estudos apresentaram divergência
em relação a valores de
coliformes a 45° em relação a este
estudo, onde Pires 23 e Souza 10 encontraram
em todas as suas amostras
ausência de coliformes a 45°,
porem ambos focaram seu processo
de análise em méis retirados
diretamente da coméia, sugerindo
para os resultados do quadro 1
positivos para coliformes a 45° de
contaminação no processo de envase
do mel tanto nas embalagens
reutilizadas como nas embalagens
padronizadas.
A maior positividade microbiana
em recipientes reutilizados também
foi constatada por Lieven 4 ,
tendo uma maior positividade microbiológica
em méis comercializados
em recipientes reutilizados,
já que a forma rustica e artesanal
do envase contribui para um maior
contato entre o produto e produtor.
Foi visualizado nas amostras A3,
A4, A9, A14, A29 da tabela 1 tanto
uma positividade microbiológica
como a presença de sujidade no
produto comercializado sugerindo
assim uma relação entre os dois
quadros.
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
15

16
artigo 1
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
Autores:
João Paulo dos Santos 1 ,
Lucas Pedrosa Souto Maior 2 ,
Eliane Costa Souza 3 ,
como impróprias para consumo, já que a presença de coliformes Tatiana Almeida a 45° Omura ou de Paula 4 ,
Lúcia Helena Ferreira Santos 5 ,
Termotolerantes segundo Alves 19 e JAY 20 nos alimentos revelam Karwhory uma Wallas baixa Lins da Silva 6 ,
Yáskara Veruska Ribeiro Barros
condição higiênica-sanitária os tornando um causador de enfermidades, e em outras
7 ,
Velber Xavier Nascimento 8 ,
literaturas padrões microbiológicos parecidos foram visualizados,
Alessandra
mesmo
Valério
em
de Almeida
um
Guedes 9 .
alimento com propriedades anti-microbianas 21, 22 .
Tabela. 1 – Valores dos micro-organismos nas amostras analisadas e seus
respectivos Tabela 1 – Valores municípios. dos micro-organismos nas amostras analisadas e seus respectivos municípios.
N° da
Micro-organismos
Municípios
Amostra
Coliformes a 35°C
(NMP/mL)
Coliformes a 45°C
(NMP/mL)
Barra de Santo Antônio A1 1100
Branquinha A4 6,2 6,2
Capela A5

O potencial de hidrogênio (pH) dos lotes analisados, representados na tabela
2 demonstram um padrão predominante de pH ácido com média de 4,01, onde o
menor e maior valor de pH respectivamente foram 2,27 e 5,03, enquanto o valor
médio encontrado para sólidos solúveis (°Brix) foi de 78,12%, apresentando uma
variação Determinações que ficou de PH, entre Sólidos
Solúveis (°Brix) e Umidade e maior valor de pH respectivamenmetro
descrito na legislação atual
74% com e 82%. média de 4,01, onde o menor A Umidade (%H2O) único parâ-
(%H2o) A Umidade (%H2O) único te foram parâmetro 2,27 e 5,03, descrito enquanto o na legislação em vigor apresentou atual em uma variação vigor
O potencial de hidrogênio (pH) valor médio encontrado para sólidos
solúveis
média de 19,88%, tendo o valor
dos
apresentou
lotes analisados,
uma
representados
variação média de 19,88%,
(°Brix) foi
tendo
de 78,12%,
o valor
máximo
máximo
encontrado
encontrado
de 24,50%
de
e
24,50% na tabela e o 2 valor demonstram mínimo um de 10,50%. apresentando uma variação que o valor mínimo de 10,50%.
padrão predominante de pH ácido ficou entre 74% e 82%.
Tabela 2 – Parâmetros de pH, °Brix e %H2O encontrados em amostras de méis
comercializados Tabela 2 – Parâmetros no de estado pH, °Brix de e %H2O Alagoas. encontrados em amostras de méis comercializados no estado de Alagoas.
Parâmetros pH °Brix %H2O
Máximo 5,03 82,00% 24,50%
Mínimo 2,27 74,00% 10,50%
Medias 4,01 78,12% 19,88%
O resultado
O resultado
médio e a
médio
faixa de
e a a faixa temperatura de resultados de armazenamento para o pH padrão demonstrados parecido pH na e tabela °Brix em
resultados 2, também para o pH são demonstrados visualizados para em comercio outras do mel literaturas, 26,xxx . relação a outras literaturas publicadas
21,27,31,32 , e uma relação entre
onde ANDRIGHETTO 24 e
na tabela 2, também são visualizados
CAMPOS em outras 25 visualizaram literaturas, onde respectivamente solúveis (°Brix) também um padrão foram ob-
ácido o com pH e valor a umidade média com de a vida 4,18 de
E além do pH, valores de sólidos
ANDRIGHETTO
e 4,08 de 24 e CAMPOS
pH das amostras 25 visualizaram
respectivamente um dos não na legislação atual, onde o desenvolvimento microbiológico.
servados, entretanto não são cita-
prateleira do mel, já que propicia o
estudadas. Porém, não se visualiza na legislação atual
padrão (IN nº ácido 11, com de 20 valor de média outubro de de °Brix 2000) se revela uma como faixa a quantidade de pH ideal para a comercialização
4,18 e 4,08 de pH das amostras de sólidos encontrados dissolvidos Conclusão
estudadas. do mel, Porém, já que não seu visualiza
na legislação atual (IN nº 11, de
pH está na ligado água dos diretamente alimentos e tem a gran-
florada De usada acordo pela com abelha os resultados na
encontrados, a uma necessidade
20 de outubro de 2000) uma faixa
de maior revisão da legislação em
de pH ideal para a comercialização
vigor, principalmente no quesito
do mel, já que seu pH está ligado
microbiológico e que o envase do
diretamente a florada usada pela
mel e seus parâmetros físico-químicos
devem ser observados para
abelha na produção do mel, sendo
assim a análise de pH baseada segundo
outras literaturas, que estão
conservação de sua vida de prateleira
em especial a umidade, já
estabelecendo uma faixa ideal para
que valores elevados podem além
o produto entre 2,3 e 5,5 de pH,
de acarretar uma menor segurança
sendo mais recomendado méis
microbiológica, gerar a suspeita de
com valores inferiores a 4, já que
adulteração.
valores muito altos diminuem sua
capacidade bactericida e sua vida
Referências
de prateleira 8,24,26 1 White Júnior JWH. Honey. New York: Advances in Food
. Valores de pH,
Research. 1978. v. 22, p.287-374.
°Brix e Umidade das amostras e
2 Vargas T. Avaliação da qualidade do mel produzido na região
dos Campos Gerais do Paraná. [Monografia de conclusão
seus respectivos municípios estão
de curso de Mestrado em Ciência e tecnologia de alimentos].
Ponta Grossa: Universidade Federal de Ponta Grossa, 2006.
descritos na tabela 3.
Tabela 3 – Valores de pH, °Brix
e Umidade das amostras analisadas
e seus respectivos municípios.
Com isso todos os méis da tabela
3 estão de acordo com os
valores de pH estabelecidos pelas
literaturas atuais, onde está grande
faixa de variação do pH pode ser
explicada pela variedade da flora
de cada município e a temperatura
de armazenamento dos méis,
já que estudos demonstram uma
variação do pH original de acordo
de importância para a agroindústria
na qualidade final do produto e seu
controle de ingredientes, sendo
esse parâmetro realizado como
mais uma variável de comparação
analítica, onde comparativos
a outras literaturas demonstram
uma faixa de resultados dentre
as visualizadas na tabela 3, tendo
Meireles 27 e Silva 28 apresentado
respectivamente uma variação entre
81,55% a 83,85% e 76,07%
a 80,80%.
Porem diferente do pH e do °Brix
a umidade se enquadra como único
parâmetro analisado que apresenta
descrição na legislação atual,
não podendo passar de 20%, já
que valores elevados afetam tanto
a atividade antimicrobiana como o
valor de pH 18,25,27,29 .
Com isso, os méis A2, A11, A21,
A22, A23, A28, A29 E A32 da tabela
3 estão classificados como inadequados
para comercialização, já
que estão com valores superiores
ao exigido pela legislação, sendo
também visualizado em Pires 21 e
Silva 28 valores acima do aceitável,
levando assim ao aumento do pH
e da diminuição do tempo de plateleira
29,30,31 .
Sendo assim demostrado um
3 Oliveira JTCO, Santos AF, Freitas WR, Almeida OC, Junior
JPS. O Mercado de mel e produtos apícolas no município de
Garanhuns-Pe. Garanhuns: Universidade Federal Rural de
Pernambuco, 2009. [Acesso em 15 de abril de 2013]. Disponível
em .
4 Lieven M, Correia KR, Flor TL, Fortuna JL. Avaliação da
qualidade microbiológica do mel comercializado no extremo
sul da Bahia. Bahia: Revista Baiana de Saúde Pública. 2009.
v.33, p.544-552.
5 IBGE - Instituto Brasileiro de Geografia e Estatística.
Produção de origem animal, por tipo de produto. Rio de
Janeiro, 2013. [Acesso em 11 de Julho de 2014]. Disponível
em .
6 Sebrae. Produções de ovos, lã e mel crescem, enquanto
caem casulos de bicho da seda. São Paulo, 2012. [Acesso em
03 de Maio de 2014]. Disponível em: .
7 Lorenzetti ER, Marques P, Caldas RG. Microbiologia
do mel. São Paulo, 2009. [Acesso em 03 de Maio de 2014].
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
17

18
artigo 1
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
Autores:
João Paulo dos Santos 1 ,
Lucas Pedrosa Souto Maior 2 ,
Eliane Costa Souza 3 ,
Tatiana Almeida Omura de Paula 4 ,
produção do mel, sendo assim a análise de pH baseada segundo outras Lúcia literaturas,
Helena Ferreira Santos 5 ,
Karwhory Wallas Lins da Silva 6 ,
que estão estabelecendo uma faixa ideal para o produto entre 2,3 Yáskara e 5,5 Veruska de Ribeiro pH, Barros 7 ,
Velber Xavier Nascimento 8 ,
sendo mais recomendado méis com valores inferiores a 4, já que Alessandra valores Valério muito de Almeida altos Guedes 9 .
diminuem sua capacidade bactericida e sua vida de prateleira 8,24,26 . Valores de pH,
Imagem Ilustrativa
°Brix e Umidade das amostras e seus respectivos municípios estão descritos na
tabela 3.
Tabela 3 – Valores de pH, °Brix e Umidade das amostras analisadas e seus
Tabela 3 – Valores de pH, °Brix e Umidade das amostras analisadas e seus respectivos municípios.
respectivos municípios.
N° da
Físico-Químico
Municípios
Amostra
pH °Brix % H 2O Umidade
Barra de Santo Antônio A1 4,18 79,00% (±0,5%) 20,00% (±0,5%)
Barra de São Miguel A2 3,85 76,00% (±0,5%) 21,00% (±0,5%)
Batalha A3 4,08 78,00% (±0,5%) 19,50% (±0,5%)
Branquinha A4 3,75 80,00% (±0,5%) 18,00% (±0,5%)
Capela A5 4,1 77,50% (±0,5%) 20,50% (±0,5%)
Coruripe A6 4,46 79,00% (±0,5%) 19,00% (±0,5%)
Feliz Deserto A7 4,02 79,00% (±0,5%) 19,00% (±0,5%)
Flexeiras A8 5,03 78,00% (±0,5%) 20,00% (±0,5%)
Inhapi A9 3,3 76,00% (±0,5%) 20,25% (±0,5%)
A10 4,18 78,00% (±0,5%) 20,00% (±0,5%)
Jequiá da Praia
A11 4,19 77,50% (±0,5%) 21,50% (±0,5%)
Maceió A12 3,84 79,00% (±0,5%) 20,50% (±0,5%)
Marechal Deodoro A13 4,29 78,50% (±0,5%) 20,00% (±0,5%)
Maribondo A14 4,08 79,56% (±0,5%) 20,50% (±0,5%)
Matriz do Camaragibe A15 4,18 80,00% (±0,5%) 10,50% (±0,5%)
A16 3,62 80,00% (±0,5%) 19,50% (±0,5%)
Pão de Açúcar
Penedo
A17 3,61 79,00% (±0,5%) 19,00% (±0,5%)
A18 3,65 79,90% (±0,5%) 19,50% (±0,5%)
A19 4,19 82,00% (±0,5%) 18,00% (±0,5%)
A20 3,66 80,00% (±0,5%) 18,50% (±0,5%)
A21 3,63 74,00% (±0,5%) 23,50% (±0,5%)
A22 4,25 77,00% (±0,5%) 21,00% (±0,5%)
A23 3,8 76,00% (±0,5%) 22,00% (±0,5%)
Piaçabuçu
A24 4,12 78,30% (±0,5%) 20,00% (±0,5%)
Porto Calvo A25 4,36 79,50% (±0,5%) 18,50% (±0,5%)
Porto de Pedras A26 3,84 76,00% (±0,5%) 20,00% (±0,5%)
Roteiro A27 3,65 79,50% (±0,5%) 19,50% (±0,5%)
A28 2,77 74,00% (±0,5%) 24,50% (±0,5%)
Santana do Ipanema
A29 4,02 77,00% (±0,5%) 21,00% (±0,5%)
São Luís do Quitunde A30 4,35 79,00% (±0,5%) 19,00% (±0,5%)
A31 4,5 77,50% (±0,5%) 20,25% (±0,5%)
Senador Rui Palmeira
A32 5 76,00% (±0,5%) 22,20% (±0,5%)

Disponível em:
8 Silva RA, Maia GA, Sousa, PHM, Costa, JMC. Composição
e propriedades terapêuticas do mel de abelha. Araraquara:
Alim. Nutr. 2006. V.17, n.1, p.113-120.
9 Barros LB. Perfil sensorial e de qualidade do mel de abelha
(apismellifera) produzido no estado do Rio de Janeiro.
[Monografia de conclusão de curso Doutorado em medicina
veterinária]. Niterói: Universidade Federal Fluminense, 2011.
10 Souza BA, Marchini LC, Dias CTS, Oda-Souza M, Carvalho
CAL, Alves RMO. Avaliação microbiológica de amostras de mel
de trigoníneos (apidae: trigonini) do estado da Bahia. Campinas:
Ciênc. Tecnol. Aliment. 2009. V.29, n.4, p798-802.
11 Brasil. Ministério da Agricultura e do Abastecimento.
Instrução Normativa Nº 11, DE 20 DE OUTUBRO DE 2000.
12 Santos DC, Martins JN, Silva KFNL. Aspectos físico-
-químicos e microbiológicos do mel comercializado na cidade
de Tabuleiro Do Norte-Ceará. Mossoró: Revista Verde. 2009.
V.5, n.1, p.79-85.
13 Franco BDGM, Landegraf M. Microbiologia de alimentos.
São Paulo: Atheneu. 2003. 182p.
14 Silva N, Junqueira VCA, Silveira NFA. Manual de métodos
de análise microbiológica de alimentos e água. São Paulo:
Varela. 2010. 295p.
15 LANARA - Laboratório Nacional de Referência Animal.
Métodos Analíticos. II – Métodos físico-químicos para Mel.
Brasília: Ministério da Agricultura. 1981. cap. 25, p. 1-15.
16 Mercosur. GMC 36/93 - Reglamento Tecnico Mercosur
Para Rotulacion Dealimentos Envasados. Asunción, 1993
[Acesso em 18 de outubro de 2014]. Disponível em:
17 Júnior, JZS. Qualidade do mel em unidade de beneficiamento
de apicultores familiares. [Monografia de conclusão de
curso - Especialista em gestão da defesa sanitária agropecuária].
Curitiba: Universidade Federal do Paraná, 2011.
18 Brasil - Ministério da Saúde. Agência Nacional de Vigilância
Sanitária. Resolução RDC n°275, de 21 de outubro de
2002.
19 Alves TTL, Meneses ARV, Silva JN, Parente GDL, Holanda
neto, JP. Caracterização físico-química e avaliação microbiológica
de méis de abelhas nativas do nordeste brasileiro. Mossoró:
Revista Verde. v.6, n.3, p.91-97, 2011.
20 Jay JM. Microbiologia de alimentos. Porto Alegre: Artmed.
2005. 6. ed.
21 Matos ITSR, Nunes MT, Mota DA, Laureano MMM. Qualidade
microbiológica do mel de melípona sp. produzido na
Amazônia central (Parintins – AM – Brasil). Mossoró: Revista
Verde. 2011. V.6, n.4, p.91-95.
22 Sales DP, Souza PB, Brito LBS, Alves LMC, Bezerra JMD.
Avaliação da qualidade microbiológica de amostras de mel de
Melipona compressipese de apismelliferano estado do Maranhão.
Maranhão, 2011. [Acesso em 25 de Agosto de 2014].
Disponível em:
23 Pires RMC. Qualidade do mel de abelhas apismelliferalinnaeus,
1758 produzido no Piauí. [Monografia de conclusão
de curso - Mestre em alimentos e nutrição pelo programa de
Pós-Graduação em Alimentos em Nutrição]. Teresina: Universidade
Federal Do Piauí, 2011.
24 Andrighetto AJ, Andrighetto RM, Sarzi, MIV, Marque,
MS. Avaliação da qualidade físico-química do mel comercializado
em Santo Augusto- RS. In: Fórum Nacional de Iniciação
Científica no Ensino Médio e Técnico. Anais. Santa Catarina:
Universidade Federal de Santa Catarina, 2009.
25 Campos FS, Gois GC, Carneiro GG. Parâmetros físico-
-químicos do mel de abelhas Meliponas cutellaris produzido
no estado da Paraíba. Uberaba: FAZU em Revista. 2010. p.186
– 190.
26 Capuci K, Honorato CA. Efeito Da Temperatura De Estocagem
Na Qualidade Do Mel .Dourados : Revista de Ciências
Exatas e da Terra. 2012, v1, n.1.
27 Meireles S, Cançado IAC. Mel: Parâmetros de qualidade
e suas implicações para a saúde. Pará de Minas :Revista Digital
FAPAM. 2013. v.4, n.4, p207-219.
28 Silva CL, Queiroz AJM, Figueiredo RMF. Caracterização
físico-química de méis produzidos no Estado do Piauí para
diferentes floradas. Campina Grande: Revista Brasileira de Engenharia
Agrícola e Ambiental. 2004. v. 8, n. 2/3. [Acesso em
25 de Agosto de 2014]. Disponível em:
29 Bera A. Efeitos nas características físico-químicas, microbiológicas
e sensoriais em amostras de mel de abelhas
submetidas à radiação gama. [Monografia de conclusão de
curso - Doutorado em Ciências na Área de tecnologia Nuclear].
São Paulo: Universidade Federal de São Paulo, 2010.
30 Europen Commission. Opinion of the Scientific Committee
on Veterinary Measures Relting to Public Health on Honey
and Microbiological Hazards. Bruxelas. 2002.
31 Pinto CCOA, Lima LRP. Análises físico-químicas de méis
consumidos no Vale do Aço/ MG. Coronel Fabriciano: Farmácia
& Ciência. 2010. v.1, p.27-40.
32 Schlabitz C, Silva, SAF, Souza, CFV. Avaliação de parâmetros
físico-químicos e microbiológicos em mel. Lajeado: Revista
Brasileira de Tecnologia Agroindustrial. 2010. v. 04, n. 01.

Complemento Normativo
Referente ao artigo: 1
Disponibilizado por Analytica em parceria com
Arena Técnica
artigo 1
Avaliação da qualidade microbiológica
e físico-química de méis comercializados em
munícipios do estado de Alagoas
ABNT NBR 16581
Meliponicultura — Mel — Classificação e características
Norma publicada em: 05/2017. / Status: Vigente.
Classificação 1: Apicultura. Classificação 2: Norma recomendada.
Artigo: Avaliação da qualidade microbiológica e físico-química de méis comercializados em
municípios do estado de Alagoas.
Entidade: ABNT.
País de procedência/Região: Brasil. Resumo: Esta Norma estabelece um sistema para classificação
do mel produzido pelas abelhas sem ferrão, especificando suas características e
definindo as suas formas de apresentação, métodos de processamento e conservação. https://
www.abntcatalogo.com.br/norma.aspx?ID=370936
ABNT NBR 16573
Apicultura - Materiais - Vestimentas apícolas
Norma publicada em: 12/2016. / Status: Vigente.
Classificação 1: Apicultura. Classificação 2: Norma recomendada.
Artigo: Avaliação da qualidade microbiológica e físico-química de méis comercializados em
municípios do estado de Alagoas.
Entidade: ABNT.
País de procedência/Região: Brasil. Resumo: Esta Norma especifica os
requisitos de confecção, segurança e conforto para as vestimentas apícolas.
https://www.abntcatalogo.com.br/norma.aspx?ID=364601
ABNT NBR 16572
Apicultura - Equipamento - Centrífuga apícola.
Norma publicada em: 12/2016. / Status: Vigente.
Classificação 1: Apicultura. Classificação 2: Norma recomendada.
Artigo: Avaliação da qualidade microbiológica e físico-química de méis comercializados em
municípios do estado de Alagoas.
Entidade: ABNT.
País de procedência/Região: Brasil. Resumo: Esta Norma especifica os
requisitos para industrialização de centrífuga apícola.
https://www.abntcatalogo.com.br/norma.aspx?ID=364601
ABNT NBR 16576
Apicultura — Pólen apícola — Sistema de produção no campo
Norma publicada em: 05/2017. / Status: Vigente.
Classificação 1: Apicultura. Classificação 2: Norma recomendada.
Artigo: Avaliação da qualidade microbiológica e físico-química de méis comercializados em
municípios do estado de Alagoas.
Entidade: ABNT.
País de procedência/Região: Brasil. Resumo: Esta Norma estabelece os requisitos para instalação
de apiário, manejo das colmeias, coleta, acondicionamento, transporte e armazenamento
de pólen apícola. https://www.abntcatalogo.com.br/norma.aspx?ID=370927
DIN 10755
Analysis of honey - Determination of mineral content
Norma publicada em: 04/2001. / Status: Vigente. Classificação 1: Norma recomendada.
Artigo: Avaliação da qualidade microbiológica e físico-química de méis comercializados em
municípios do estado de Alagoas.
Entidade: DIN. País de procedência/Região: Alemanha.
https://www.beuth.de/en/standard/din-10755/38095701
DIN 10756
Analysis of honey - Determination of free acidity
Norma publicada em: 08/2009. / Status: Vigente. Classificação 1: Norma recomendada.
Artigo: Avaliação da qualidade microbiológica e físico-química de méis comercializados em
municípios do estado de Alagoas.
Entidade: DIN. País de procedência/Região: Alemanha.
https://www.beuth.de/en/standard/din-10756/117797171
DIN 10758
Analysis of honey - Determination of the content of saccharides fructose, glucose, saccharose,
turanose and altose - HPLC method
Norma publicada em: 05/1997. / Status: Vigente. Classificação 1: Norma recomendada.
Artigo: Avaliação da qualidade microbiológica e físico-química de méis comercializados em
municípios do estado de Alagoas.
Entidade: DIN. País de procedência/Região: Alemanha.
https://www.beuth.de/en/standard/din-10758/2949226
20
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
DIN 10741
Analysis of honey - General guidelines for the ad hoc validation of analysis methods for organic
residues or contaminants
Norma publicada em: 08/2010. / Status: Vigente. Classificação 1: Norma recomendada.
Artigo: Avaliação da qualidade microbiológica e físico-química de méis comercializados em
municípios do estado de Alagoas.
Entidade: DIN. País de procedência/Região: Alemanha.
https://www.beuth.de/en/standard/din-10741/128420142
DIN 10762
Analysis of honey - Determination of ethanol content - Enzymatic method
Norma publicada em: 06/2004. / Status: Vigente. Classificação 1: Norma recomendada.
Artigo: Avaliação da qualidade microbiológica e físico-química de méis comercializados em
municípios do estado de Alagoas.
Entidade: DIN. País de procedência/Região: Alemanha.
https://www.beuth.de/en/standard/din-10762/71075024
DIN 10763
Analysis of honey - Determination of glycerol content - Enzymatic method
Norma publicada em: 06/2004. / Status: Vigente. Classificação 1: Norma recomendada.
Artigo: Avaliação da qualidade microbiológica e físico-química de méis comercializados em
municípios do estado de Alagoas.
Entidade: DIN. País de procedência/Região: Alemanha.
https://www.beuth.de/en/standard/din-10763/71076913
DIN 10759
Analysis of honey - Determination of saccharase activity - Siegenthaler method
Norma publicada em: 12/2016. / Status: Vigente. Classificação 1: Norma recomendada.
Artigo: Avaliação da qualidade microbiológica e físico-química de méis comercializados em
municípios do estado de Alagoas.
Entidade: DIN. País de procedência/Região: Alemanha.
https://www.beuth.de/en/standard/din-10759/264017752
DIN 10750-1
Analysis of honey - Determination of diastase activity - Part 1: Schade method
Norma publicada em: 09/2018. / Status: Vigente
Classificação 1: Norma recomendada.
Artigo: Avaliação da qualidade microbiológica e físico-química de méis comercializados em
municípios do estado de Alagoas.
Entidade: DIN.
País de procedência/Região: Alemanha.
https://www.beuth.de/en/standard/din-10750-1/292262555
Safety & Risk Strategy report é um relatório reservado produzido pela Arena Técnica conforme acordo com a Editora.
Os resumos aqui expostos foram retirados da internet dos sites das entidades respectivas, portanto, deverão ser consultadas em caso de
publicação em sua íntegra por estarem protegidos por copyright.

DESDE 2000
Conceito de qualidade em Microbiologia
Novas e modernas instalações
Equipe capacitada e comprometida
Acreditações: REBLAS / CGCRE-INMETRO /ABNT NBR ISO/IEC 17025:2017
comercial@bcq.com.br - www.bcq.com.br - TEL.: 55 11 5083-5444

artigo 2
Sequenciamento das regiões
F(ab)-12 LC e F(ab)-12
HC do anticorpo monoclonal
humanizado bevacizumabe: um
estudo multicêntrico
Autores:
Eduardo de Souza Matos 1 ,
Ronaldo Mohana-Borges *1 ,
Vitor Marcel Faça*2, Fábio César Gozzo *3 ,
Wagner Fontes4, Carlos André O. Ricart 4 ,
Fábio César Sousa Nogueira 5 ,
Mário Sérgio Palma §6 ,
Marcelo Valle de Sousa *4 .
1- Centro de Espectrometria de Massas de Biomoléculas (CEMBIO),
Instituto de Biofísica Carlos Chagas Filho (IBCCF), UFRJ
2- Laboratório de Proteômica do Câncer - Faculdade de Medicina de
Ribeirão Preto – USP.
3- Instituto de Química, Unicamp.
4- Núcleo de Proteômica, Laboratório de Bioquímica e Química de
Proteínas, Departamento de Biologia Celular, UnB.
5- Unidade de Proteômica, Instituto de Química, UFRJ e Laboratório de
Proteômica, LADETEC, Instituto de Química, UFRJ.
6- Laboratório de Biologia Estrutural e Zooquímica; CEIS/Instituto de
Biociências de Rio Claro-UNESP.
* Estes laboratórios contribuíram igualmente para o trabalho.
(§) Autor correspondente: Prof. Dr. Mario Sergio Palma;
e-mail: mario.palma@unesp.br; Fone : (19) 3526 4163
Imagem Ilustrativa
22
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
Resumo
Produtos biotecnologicos, como o anticorpo bevacizumabe,
o ingrediente ativo do medicamento
Avastin, dependem de sua estrutura tridimensional
perfeita para serem terapeuticamente ativos. Sua
característica biológica de ligação muito específica
ao Fator de Crescimento Endotelial Vascular (VEGF)
é definida pela sequência de aminoácidos da proteína.
Quatro laboratórios diferentes especialistas em
espectrometria de massas de proteínas no Brasil
desenvolveram estratégias independentes para
sequenciar as cadeias pesada e leve do anticorpo
bevacizumabe. Usando diferentes tipos de instrumentação,
enzimas proteolíticas e ferramentas de
bioinformática para interpretação dos espectros de
massa, os quatro grupos foram capazes de confirmar
de forma independente as sequências dos
domínios que contêm as regiões hipervariáveis do
bevacizumabe em três diferentes lotes do produto
comercial Avastin. Desta forma, os laboratórios
envolvidos neste estudo multicêntrico, demonstraram
capacidade em fornecer resultados analíticos
robustos, que suportam a qualidade de tal princípio
ativo complexo em uso clínico.
Palavras-chave: anticorpos; espectrometria
de massas; sequenciamento de proteínas; peptídeos;
proteoma; bioinformática
Abstract
Biotechnology products such as the antibody
bevacizumab, the active ingredient of the drug
Avastin, depend on its perfect three-dimensional
structure to be therapeutically active. The
biological feature of the antibody bevacizumab
to bind very specifically to the Vascular
Endothelial Growth Factor (VEGF) is defined by
the amino acid sequence of the protein. Four
different laboratories specialized in protein mass
spectrometry in Brazil developed independent
strategies to sequence the heavy and light
chains of the antibody bevacizumab. Using
different types of instrumentation, proteolytic
enzymes and bioinformatics tools for mass
spectra interpretation, all four groups were able
to independently confirm the complete sequence
of the domains that contain the hypervariable
regions of bevacizumab in three different batches
of the commercial product Avastin. In conclusion,
the laboratories involved in this multicentric
study demonstrated capacity to provide robust
analytical results that support the quality of such
a complex active principle in clinical use.
Keywords: antibodies; mass spectrometry;
protein sequencing; peptides; proteomics;
bioinformatics.

Professor Dr. Mario Sergio Palma, químico, doutor em Bioquímica
pela USP e pós-doutorado em Quimica Bio-Orgânica pelo Instituto
SUNBOR em Osaka, Japão. Professor titular da UNESP.
1 Introdução
Desde que Kohler e Milstein
desenvolveram um procedimento
para produção de anticorpos
monoclonais (MAbs) (KÖHLER &
MILSTEIN, 1975) os cientistas reconheceram
que anticorpos em
geral poderiam potencialmente se
tornar ferramentas muito potentes
para o tratamento de muitas doenças
(SMITH, 1996). MAbs são
tipicamente modelados à forma/
função das imunoglobulinas (Igs),
que são tipicamente grandes proteínas
homodiméricas, de massa
molecular da ordem de 150 kDa,
em que cada molécula é constituída
de duas cadeias pesadas idênticas
(50 a 70 kDa), e duas cadeias
leves também idênticas entre si (22
a 24 kDa). As cadeias leves e pesadas
são ligadas entre si através
de pontes dissulfeto. As regiões
N-terminais destas cadeias contêm
as sequências hipervariáveis
de aminoácidos que determinam
a especificidade de ligação das Igs
aos antígenos específicos (Fab); já
as regiões C-terminais de ambas
as cadeias (Fc) contêm sequências
constantes, que caracterizam as
Igs por isotipo e classe.
Devido ao crescente uso terapêutico
de anticorpos, agências
regulatórias de muitos países desenvolvidos
têm estabelecido rígidos
padrões de controle de qualidade
para essas proteínas. As
características estruturais dessas
macromoléculas biológicas descritas
acima são fontes conhecidas
de heterogeneidade intrínseca,
que frequentemente resultam em
questionamentos tais como: i) quão
reprodutíveis são os diferentes lotes,
quando comparados entre si?;
ii) quão “pura” é cada preparação
(lote)?; iii) qual a homogeneidade
do produto final?; iv) Existem diferentes
padrões de modificações
pós-traducionais (glicosilações)
nessas preparações?; ou ainda v)
qual a concentração real de proteína
em cada preparação? Atualmente,
a espectrometria de massas
(EM) tem um papel central no
controle de qualidade da produção
e na caracterização estrutural de
proteínas e em especial dos MAbs
(LADWIG et al., 2017; SEN et al.,
2017).
A proteômica estuda o complemento
proteico do genoma das
células, ou seja, o proteoma (WA-
SINGER et al., 1995), incluindo a
identificação, modificação, quantificação
e localização das proteínas
(ZHANG et al., 2013). A proteômica
se vale da EM para caracterizar
as proteínas, através da obtenção
de suas sequências de aminoácidos
(AEBERSOLD & MANN, 2016).
O progresso da proteômica tem
sido impulsionado pelo desenvolvimento
de novas tecnologias de
separação de proteínas/peptídeos,
de espectrômetros de massa de
alta resolução e desempenho e
da análise de dados empregando
ferramentas de bioinformática. A
principal abordagem empregada
para a identificação e a caracterização
de proteínas por EM se
baseia na hidrólise enzimática por
peptidases específicas como, por
exemplo, tripsina, endoproteinase
Glu-C e quimiotripsina. Acoplada
à cromatografia liquida (CL-EM), a
EM se torna ainda mais poderosa
para a análise e a identificação de
misturas complexas de peptídeos,
como por exemplo, um hidrolisado
enzimático de uma grande proteína
como um Mab. A bioinformática
tem um papel essencial na identificação
dos peptídeos e na inferência
e quantificação das proteínas
(ZHANG et al., 2013).
Historicamente, o Brasil tem uma
ampla atuação na área de química
de proteínas e EM. Esta experiência
tornou, recentemente, o Brasil reconhecido
internacionalmente (PA-
DRÓN & DOMONT 2014). Este reconhecimento
foi evidenciado nas
duas edições especiais publicadas
nas revistas internacionais Proteomics
e Journal of Proteomics, que
reuniram artigos de laboratórios
brasileiros que trabalham com
técnicas estado-da-arte em diferentes
áreas (MARTINS-DE-SOUZA,
2012; NOGUEIRA et al., 2017). Os
laboratórios brasileiros são bem
equipados com espectrômetros de
massas híbridos, que apresentam
na sua configuração analisadores
do tipo Tempo-de-Voo (TOF), Orbitrap
e ICR. Estes instrumentos
têm medidas de massa com alta
acurácia, resolução e velocidade
de varredura, o que faz destes
instrumentos ideais para a análise
da sequência de cadeias leves e
pesadas de anticorpos (LADWIG et
al., 2017).
O estabelecimento de análises
multicomplexas, como as descritas
acima, para fomentar o desenvolvimento
de biofármacos do tipo
MAbs no Brasil, é imperativo para
o desenvolvimento dessa área no
Brasil; e para isso, é importante
avaliar a comunidade analítica brasileira
com relação à infraestrutura
laboratorial, expertise e experiência
no meio acadêmico. Este trabalho
teve a finalidade de desenvolver
um estudo multicêntrico (prospectivo),
envolvendo quatro diferentes
laboratórios acadêmicos brasileiros,
para confirmar a sequência
de aminoácidos dos domínios que
contêm as regiões hipervariáveis
das cadeias leve e pesada do
MAb bevacizumabe (Avastin®) de
acordo com a publicação de Presta
e colaboradores (PRESTA et al.,
1997). Estes domínios são fundamentais
para a determinação da
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
23

artigo 2
Imagem Ilustrativa
Autores:
Eduardo de Souza Matos 1 ,
Ronaldo Mohana-Borges *1 ,
Vitor Marcel Faça*2, Fábio César Gozzo *3 ,
Wagner Fontes4, Carlos André O. Ricart 4 ,
Fábio César Sousa Nogueira 5 ,
Mário Sérgio Palma §6 ,
Marcelo Valle de Sousa *4 .
24
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
especificidade do anticorpo e serão
denominadas de agora em diante
como F(ab)-12 LC para a cadeia
leve e F(ab)-12 HC para a cadeia
pesada (PRESTA et al, 1997). Os
resultados entre os laboratórios
foram convergentes, mesmo desenvolvendo
estratégias independentes
e utilizando diferentes
espectrômetros de massa, peptidases
e ferramentas bioinformáticas.
Materiais e Métodos
Laboratórios
participantes do Estudo
Foram convidados quatro laboratórios
brasileiros para participar
desse estudo multicêntrico:
1- Laboratório 1: Centro de Espectrometria
de massas de Biomoléculas
(CEMBIO) da Universidade
Federal do Rio de Janeiro;
2- Laboratório 2: Laboratório
de Bioquímica e Química de Proteínas,
Departamento de Biologia
Celular, Instituto de Ciências Biológicas,
Universidade de Brasília,
Brasília, DF;
3- Laboratório 3: Instituto de
Química, Universidade de Campinas,
Campinas, SP;
4- Laboratório 4: Laboratório
de Proteômica do Câncer, Departamento
de Bioquímica e Imunologia,
Faculdade de Medicina de Ribeirão
Preto - USP.
Descrição das amostras
Três frascos do medicamento
Avastin 100 mg/4mL, de três
diferentes lotes (B7233B21,
B7234B07 e B7234B12), produzidos
pelo grupo Roche, foram adquiridos
no mercado diretamente
por cada laboratório. Para cada
lote de Avastin (princípio ativo bevacizumabe),
foram aliquotados 20
tubos contendo 100 µL e 40 tubos
contendo 50 µL da amostra. O procedimento
foi realizado em câmara
de segurança biológica estéril com
fluxo laminar (Classe 2 BSC). Os
lotes aliquotados foram estocados
em freezer a -80 °C.
Estratégias experimentais
adotada pelos laboratórios
Cada laboratório teve a
liberdade de escolher os métodos
e estratégias experimentais que
julgassem mais adequados para se
alcançar os objetivos pretendidos.
Três laboratórios verificaram
a pureza e integridade dos
lotes recebidos por eletroforese
em gel de poliacrilamida com dodecilsulfato
de sódio (SDS-PAGE)
sob condições não redutoras e
redutoras. O Laboratório 2 utilizou
espectrometria de massa do tipo
MALDI-TOF para tal fim. Sendo
verificada a integridade e pureza
dos três lotes, cada laboratório desenhou
e executou separadamente
o sequenciamento dos aminoácidos
dos lotes de bevacizumabe.
Os procedimentos adotados serão
descritos a seguir.
Laboratório 1
O protocolo de digestão e a
análise por CL-EM foram realizados
em dois momentos diferentes.
Alíquotas dos três lotes de bevacizumabe
foram diluídas utilizando-
-se água grau HPLC para atingir
a concentração de 2 µg/µL. Dois
volumes de 50 µL de cada lote do
bevacizumabe foram diluídos como
duas amostras distintas, sendo
uma dessas submetida a protocolo
com digestão por tripsina e a outra
submetida a protocolo de digestão
simultânea por tripsina (Promega) e
endoproteinase Glu-C (Sigma).
Foram adicionados 10 µL de
solução de bicarbonato de amônio
a 50 mM e de cloreto de cálcio a
1 mM às amostras destinadas à
digestão por tripsina e 10 µL de
solução de bicarbonato de amônio
a 50 mM às amostras destinadas
à digestão simultânea por tripsina
e endoproteínase Glu-C. Adicionaram-se
a todas as amostras 10 µL
de solução RapiGest SF a 0,2%,
homogeneizou-se e aqueceu-se
durante 15 minutos a 80 °C. Para
a redução de pontes de sulfeto e
alquilação dos radicais de cisteína,
adicionaram-se 2,5 µL de DTT a
100 mM às amostras, aquecendo-
-as durante 30 minutos a 60 °C.
Após isso, as amostras foram resfriadas
à temperatura ambiente.
Em seguida, adicionaram-se 2,5
µL de iodoacetamida 300 a mM,
deixando reagir em temperatura
ambiente durante 30 minutos ao
abrigo da luz.
Adicionaram-se 20 µL da solução
de enzima proteolítica (tripsina

ou tripsina + Glu-C) e homogeneizou-se,
deixando a digestão ocorrer
durante 15 horas a 37 °C. Em
seguida, adicionaram-se 10 µL de
solução de ácido trifluoroacético a
5%, incubando-se as amostras por
90 minutos a 37 °C para a precipitação
do RapiGest SF. Em seguida,
centrifugou-se a mesma a 14000
g durante 15 minutos a 4 °C. Os
sobrenadantes foram transferidos
para microtubos, sendo as amostras
secas por liofilização. Para a
análise por CL-EM, cada amostra
foi ressuspensa em 100 μL de uma
mistura de ácido fórmico a 0,1%
com acetonitrila a 3% em água
grau HPLC. As amostras foram
transferidas para frascos de 1,5
mL e acondicionadas a temperatura
de 2 a 8°C até sua injeção no
cromatógrafo líquido.
A análise das digestões em solução
foi realizada no sistema de
cromatografia líquida de ultra alta
eficiência (UHPLC) Nexera X2, do
fabricante Shimadzu. A coluna cromatográfica
utilizada foi a Acquity
UPLC CSH C18, 150 x 1 mm, 1,7
µm de tamanho de partícula, do
fabricante Waters. A temperatura
de forno na análise foi de 50 ºC. As
fases móveis A e B usadas foram
respectivamente solução de ácido
fórmico a 0,1% em água e solução
de ácido fórmico a 0,1% em acetonitrila.
A cromatografia foi acoplada ao
espectrômetro de massas espectrômetro
de massas modelo Maxis
Impact, configuração ESI-Q-TOF,
do fabricante Bruker. Foram utilizadas
duas estratégias de aquisição
para análise espectrométrica dos
peptídeos eluídos da corrida cromatográfica:
estratégia de aquisição
por DDA (seleção automática
de três íons de maior abundância)
e estratégia de aquisição guiada,
que realizou a seleção de íons de
peptídeos para análise sequencial
a partir de uma lista de m/z previamente
determinada, baseada
em m/z de peptídeos gerados pela
digestão por tripsina ou gerados
pela co-digestão por tripsina e
endoproteinase Glu-C. Todas as
aquisições realizadas em ambas as
estratégias foram configuradas na
polaridade positiva, com faixa de
m/z medida foi de 50 a 1500 nas
varreduras em MS e MS2.
As listas de picos referentes às
análises realizadas com os métodos
de abordagem guiada e por
DDA do mesmo dia foram agrupadas
para cada lote e para cada
tipo de digestão, constituindo uma
única lista de picos para submissão
em softwares. As listas geradas
foram analisadas no software
Biotools versão 3.2 SR4, da Bruker
Daltonics, utilizando-se duas abordagens.
A primeira abordagem foi
a comparação dos conjuntos de
espectros de íon precursor e íons
produtos respectivos, com perfil de
fragmentação esperado de peptídeos
gerados pela digestão in silico
das cadeias leve e pesada do bevacizumabe.
A segunda abordagem
foi a análise dos mesmos conjuntos
de espectros pelo algoritmo de
identificação proteômica Mascot,
versão 2.4, tendo como referência
a combinação de três bancos de
dados: i) banco de dados curado
de proteínas Swissprot (atualizado
no dia 29/06/2018), disponível
na internet (www.uniprot.org); ii)
banco de dados de contaminantes
proteicos (disponível no próprio
servidor Mascot) e iii) banco de dados
criado a partir das sequências
das cadeias leve e pesada do bevacizumabe
contida no DrugBank
(https://www.drugbank.ca/drugs/
DB00112).
Laboratório 2
Os lotes de Avastin® tinham entre
seus excipientes o detergente
polissorbato 20 (Tween 20), que
poderia diminuir a eficiência das
etapas posteriores de digestão
enzimática, separação de peptídeos
em coluna de fase reversa e
de análises por EM. Tween 20 foi
então removido por ultrafiltração
em Amicon Ultra 0,5 mL – Ultracel
30 k, seguindo recomendações do
fabricante). Análise por MALDI-TOF
MS confirmou a redução do conteúdo
de Tween 20 nas amostras, assim
como a pureza e a integridade
estrutural da proteína.
As amostras foram então submetidas
a etapas de redução das
pontes dissulfeto com DTT e posterior
alquilação das cadeias laterais
de resíduos de cisteína com iodacetamida.
As amostras reduzidas
e alquiladas foram submetidas a
digestão com 3 diferentes proteases:
tripsina (Promega), Lys-C
(Promega) e quimotripsina (Sigma-
-Aldrich). Paralelamente, amostras
reduzidas e alquiladas foram submetidas
a cromatografia em fase
reversa (C4) para separação das
cadeias leve e pesada. Foram obtidas
duas frações principais que
foram analisadas por MALDI-TOF
EM. Verificou-se assim, que a cromatografia
não separou totalmente
a cadeia leve da pesada, mas proporcionou
um enriquecimento da
cadeia leve no pico 1 e da cadeia
pesada no pico 2. A fração obtida
no pico 1 foi submetida a digestão
proteolítica com as três enzimas
anteriores e adicionalmente com
a enzima Glu-C (protease V8 de
Staphylococcus aureus, Promega).
A utilização do pico 1, após digestão
com as quatro diferentes proteases,
contribuiu para a obtenção
da sequência completa da proteína.
As amostras digeridas foram dessalinizadas
em microcolunas C18
antes da etapa seguinte de LC-MS/
MS. A eficácia e a reprodutibilidade
das digestões enzimáticas foram
verificadas e comprovadas por
MALDI-TOF EM antes da análise
por CL-EM.
Os digestos foram submetidos
a CL-EM usando cromatógrafo
(UHPLC) Dionex Ultimate
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
25

artigo 2
Imagem Ilustrativa
Autores:
Eduardo de Souza Matos 1 ,
Ronaldo Mohana-Borges *1 ,
Vitor Marcel Faça*2, Fábio César Gozzo *3 ,
Wagner Fontes4, Carlos André O. Ricart 4 ,
Fábio César Sousa Nogueira 5 ,
Mário Sérgio Palma §6 ,
Marcelo Valle de Sousa *4 .
26
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
300 (Thermo Scientific) acoplado
a espectrômetro de massas LTQ
Orbitrap Elite (Thermo Scientific).
Foram utilizadas as técnicas de
fragmentação “collision induced
dissociation “(CID), “higher-energy
collisional dissociation” (HCD) e
“electron transfer dissociation”
(ETD) e a combinação entre HCD
e ETD com auxílio de software que
define o método a ser usado após a
ionização (“decision tree”). Os dados
de íons precursores (MS 1 ) e de
fragmentos (MS 2 ) foram gravados
em formato “.raw” para posterior
análise.
Os arquivos “.raw” contendo os
espectros das quatro modalidades
de fragmentação, de cada uma das
quatro digestões de cada amostra,
foram analisados de forma combinada
utilizando-se o software
Peaks versão 7.0. Foi realizado
sequenciamento de novo de todos
os peptídeos fragmentados e
seu alinhamento com a sequência
esperada para cada uma das
cadeias. Foram selecionados os
peptídeos com score de sequenciamento
global de, no mínimo,
50, parâmetro recomendado pelo
software. As sequências obtidas
foram comparadas com a sequência
esperada para o bevacizumabe.
Ao final de todos os procedimentos
experimentais descritos, foi
possível determinar, para os três
lotes analisados, 100% da sequência
de aminoácidos do anticorpo.
Para tanto, foi necessário analisar
independentemente, para cada
amostra, os digestos com tripsina,
quimotripsina e com protease
Lys-C das amostras reduzidas e
alquiladas contendo a mistura das
cadeias leve e pesada. Como ainda
restavam alguns resíduos de aminoácidos
não sequenciados, utilizou-se
dados de sequência do pico
1 conforme descrito anteriormente.
Laboratório 3
As digestões em solução com
ambas as enzimas (tripsina e quimotripsina)
foram conduzidas em
tampão bicarbonato de amônio 50
mM, pH = 8, a 37 ºC por 16h. Foi
mantida constante, em 50:1 (m/m),
a proporção amostra:protease,
sendo aliquotadas 1 mg de amostra
para digestões com tripsina e
quimiotripsina. Após o período de
digestão, as amostras foram dessalinizadas
utilizando-se cartuchos
de extração em fase sólida (SPE)
Oasis HLB (Waters Co.), cujo procedimento
consistiu na lavagem
das amostras com 1 mL de água
contendo 0,1% (V/V) de ácido
fórmico por 4 vezes e posterior
eluição com 2 mL de uma mistura
água:acetonitrila 20:80 (v/v). A
amostra foi concentrada por evaporação
rotativa a vácuo até um
volume final de 50 µL.
Para a análise por EM, 2 µg de
cada amostra foram injetados no
LC EasyLC 1200 acoplado a um
espectrômetro LTQ Orbitrap Velos
(Thermo Scientific). O método cromatográfico
teve duração de 90
minutos, com aquisição de dados
de MS1 no orbitrap e MS2 no ion
trap. Os dados foram adquiridos
em modo DDA (data dependent
analysis) selecionando os top 10
precursores com cargas 2+, 3+ e
4+. Alternativamente, as amostras
foram analisadas em um espectrômetro
de massas Xevo Q-Tof G2X
acoplado a um cromatógrafo Nano-
Acquity com um método cromatográfico
de 90 minutos de duração.
Os dados foram adquirido em modo
DDA (data dependent analysis) selecionando
os top 5 precursores
com cargas 2+, 3+ e 4+.
O processamento das amostras
foi feito utilizando-se o software
Mascot 2.6 (Matrix Science) utilizando
os bancos de dados de E.
coli acrescida das sequências do
anticorpo além de sequências de
contaminantes comuns. Os parâmetros
de busca foram a enzima
utilizada para cada amostra (semi-
-específica), com o número de sítios
de clivagem não-digeridos de
3 para a tripsina e 5 para a quimiotripsina.
Foi adicionada a oxidação
de metionina como uma modificação
variável e carbamidometilcisteína
como modificação fixa. Os erros
utilizados foram de 100 ppm para
MS e 0,8 Da para MS2 para os dados
do Orbitrap Velos e 50 ppm tanto
para o precursor quanto para os
fragmentos. Os arquivos de dados
utilizados na busca foram arquivos
MGF gerados pelo software Mascot
Distiller 2.6 (Matrix Science). Para
as amostras digeridas com tripsina,
foram realizadas buscas com os
seguintes parâmetros: 25 ppm de
erro para o precursor, 50 ppm de
erro para os fragmentos, nenhum

artigo 2
Imagem Ilustrativa
Autores:
Eduardo de Souza Matos 1 ,
Ronaldo Mohana-Borges *1 ,
Vitor Marcel Faça*2, Fábio César Gozzo *3 ,
Wagner Fontes4, Carlos André O. Ricart 4 ,
Fábio César Sousa Nogueira 5 ,
Mário Sérgio Palma §6 ,
Marcelo Valle de Sousa *4 .
28
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
sítio de clivagem perdido, carbamidometilcisteína
como modificação
fixa e oxidação de metionina como
modificação variável. Os dados
foram processados para um intervalo
de significância de p

ácidos contido nas cadeias leves
e pesadas do anticorpo bevacizumabe.
Ambiguidades na verificação
da sequência foram resolvidas utilizando-se
espectros redundantes
dos peptídeos.
Resultados
Laboratório 1
Perfil cromatográfico dos peptídeos
obtidos após hidrólise enzimática
do bevacizumabe
Após uma digestão teórica in silico
das sequências F(ab)-12 LC e
F(ab)-12 HC por tripsina verificou-
-se que alguns peptídeos poderiam
ser de difícil caracterização por
apresentarem massa molecular
muito próxima a 3kDa. Desta forma,
decidiu-se também realizar a
co-digestão do anticorpo com duas
enzimas, a tripsina e endoproteínase
Glu-C. A co-digestão gerou peptídeos
menores que os obtidos por
digestão única com tripsina. A separação
cromatográfica em coluna
de fase reversa C18 dos peptídeos
obtidos da hidrólise enzimática dos
3 lotes do bevacizumabe por digestão
com tripsina ou pela co-digestão
tripsina + endoproteinase
Glu-C (resultados não mostrados),
geraram um perfil cromatográfico
muito similar, demonstrando alta
reprodutibilidade do método de separação
entre os diferentes lotes.
Um segundo processo de hidrólise,
separação e análise por EM foi necessário
porque alguns pequenos
peptídeos obtidos durante a hidrólise
enzimática não foram selecionados
para sequenciamento MS2
pela estratégia automática (DDA),
sendo necessário o uso também da
estratégia guiada (vide abaixo).
Verificação da presença das sequências
F(ab)-12 LC e F(ab)-12
HC, nas amostras do bevacizumabe
À medida que os peptídeos foram
eluídos da coluna cromatográfica,
eles foram injetados imediatamente
no espectrômetro de massas configuração
ESI-q-TOF, que mediu a
sua razão massa/carga (m/z). Além
disso, o equipamento foi ajustado
para realizar o sequenciamento
MS 2 de forma automática dos peptídeos
mais abundantes DDA ou de
forma guiada dos peptídeos previamente
selecionados. Os cromatogramas
e os espectros MS e MS 2
de cada amostra de bevacizumabe
foram compilados e processados
pelo software Biotools. A primeira
análise realizada comparou as sequências
de aminoácidos obtidas
experimentalmente a partir deste
programa com as sequências teóricas
do bevacizumabe depositada
no DrugBank.
As tabelas 1 e 2 (representativa
para os três lotes analisados)
compilam as sequências hipervariáveis
de aminoácidos identificados
em cada uma destas análises, i.e.,
os primeiros 123 resíduos de aminoácidos
da cadeia pesada e os
primeiros 108 resíduos da cadeia
leve .
Identificação do bevacizumabe a
partir de busca de larga escala em
bancos de dados usando algoritmo
Mascot
Uma alternativa ao protocolo
experimental usado acima para
a confirmação das sequências
F(ab)-12 LC e F(ab)-12 HC foi feita
utilizando-se o software Mascot.
Assim, o objetivo da análise por
este software foi verificar se as
sequências dos peptídeos obtidos
por EM neste projeto iriam identificar
o anticorpo bevacizumabe
Tabela 1: Dados de caracterização da sequência primária da sequência C com análise LC-MS dos peptídeos gerados por hidrólise do lote
B7234B07 de Avastin.
Tabela 1: Dados de caracterização da sequência primária da sequência C com análise LC-MS dos peptídeos gerados por hidrólise do lote
B7234B07 de Avastin.
No. de
Tabela 1: Dados de caracterização da sequência primária da sequência F(ab)-12 HC com análise LC-MS dos
aminoácidos
Enzima Data de
peptídeos gerados por No. de hidrólise do lote B7234B07 de Avastin.
utilizada análise identificados na
Sequência identificada
região de
aminoácidos
Enzima Data de
interesse
identificados na
Sequência identificada
utilizada Tripsina 06/06/2018 análise No. 118/123
região de aminoácidos EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVR_____GLEWVGWINTYTGEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFDVWGQGTLVTVSS
de
Enzima
interesse
Sequência identificada
Tripsina + Glu-C Data 06/06/2018 de identificados 118/123 na região EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVR_____GLEWVGWINTYTGEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFDVWGQGTLVTVSS
utilizada Tripsina 06/06/2018 análise de interesse 118/123 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVR_____GLEWVGWINTYTGEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFDVWGQGTLVTVSS
Tripsina 27/06/2018 123/123 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFDVWGQGTLVTVSS
Tripsina + Glu-C 06/06/2018 118/123 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVR_____GLEWVGWINTYTGEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFDVWGQGTLVTVSS
Tripsina + Glu-C 27/06/2018 123/123 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFDVWGQGTLVTVSS
Tripsina 27/06/2018 123/123 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFDVWGQGTLVTVSS
Compilação de todas as
123/123 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFDVWGQGTLVTVSS
Tripsina + Glu-C
análises
27/06/2018 123/123 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFDVWGQGTLVTVSS
Sequência F(ab)-12 HC
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFDVWGQGTLVTVSS
Compilação de todas as
123/123 EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFDVWGQGTLVTVSS
análises
Sequência F(ab)-12 HC
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGYTFTNYGMNWVRQAPGKGLEWVGWINTYTGEPTYAADFKRRFTFSLDTSKSTAYLQMNSLRAEDTAVYYCAKYPHYYGSSHWYFDVWGQGTLVTVSS
Tabela 2: Dados de caracterização da sequência primária da sequência F(ab)-12 LC com análise LC-MS dos peptídeos gerados por hidrólise do lote
Tabela B7234B07
Tabela 2: Dados de Avastin.
2: de Dados caracterização de caracterização da sequência primária da da sequência F(ab)-12 primária LC com da análise sequência LC-MS dos F(ab)-12 peptídeos gerados LC com por análise hidrólise do LC-MS lote dos
B7234B07 peptídeos Avastin. gerados por hidrólise do lote B7234B07 de Avastin.
No. de
aminoácidos
Enzima Data de
identificados na
Sequência identificada
utilizada análise No. No. de de aminoácidos
região de
Enzima Data de identificados aminoácidos
Enzima Data de
interesse na região
utilizada
identificados na
Sequência identificada
utilizada análise análise
Tripsina 06/06/2018 interesse
Sequência identificada
66/108 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSR__________________________________________VEIKR
região de
Tripsina + Glu-C 06/06/2018
interesse
105/108 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGK___VLIYFTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKR
Tripsina 06/06/2018 66/108 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSR__________________________________________VEIKR
Tripsina 27/06/2018 63/108 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGK___VLIYFTSSLHSGVPSR__________________________________________VEIKR
Tripsina + Glu-C 06/06/2018 105/108 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGK___VLIYFTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKR
Tripsina + Glu-C 27/06/2018 108/108 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKR
Tripsina 27/06/2018 63/108 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGK___VLIYFTSSLHSGVPSR__________________________________________VEIKR
Compilação de todas as análises 108/108 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKR
Tripsina + Glu-C 27/06/2018 108/108
Sequência F(ab)-12 LC
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKR
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKR
Compilação de todas as análises 108/108 DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKR
Sequência F(ab)-12 LC
DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCSASQDISNYLNWYQQKPGKAPKVLIYFTSSLHSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYSTVPWTFGQGTKVEIKR
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
29

artigo 2
Imagem Ilustrativa
Autores:
Eduardo de Souza Matos 1 ,
Ronaldo Mohana-Borges *1 ,
Vitor Marcel Faça*2, Fábio César Gozzo *3 ,
Wagner Fontes4, Carlos André O. Ricart 4 ,
Fábio César Sousa Nogueira 5 ,
Mário Sérgio Palma §6 ,
Marcelo Valle de Sousa *4 .
Tabela 3 – Compilação dos resultados de identificação do bevacizumabe obtida pelo software Mascot para todos os lotes de Avastin
Lote
Data de
análise
Enzima Proteínas identificadas Colocação Score
No. de
peptídeos
identificados
B7234B07 06/06/2018 Tripsina
Bev_HC-Bevacizumab_heavy_chain
Bev_LC-Bevacizumab_light_chain
1
2
1578
707
29
11
B7234B07 06/06/2018
Tripsina
+ Glu-C
B7234B07 27/06/2018 Tripsina
B7234B07 27/06/2018
Tripsina
+ Glu-C
Bev_HC-Bevacizumab_heavy_chain
Bev_LC-Bevacizumab_light_chain
Immunoglobulin heavy constant gamma 4 OS=Homo sapiens OX=9606 GN=IGHG4 PE=1
SV=1
Immunoglobulin heavy variable 3-48 OS=Homo sapiens OX=9606 GN=IGHV3-48 PE=1 SV=2
Glutamyl endopeptidase OS=Staphylococcus aureus (strain MRSA252) OX=282458 GN=sspA
PE=3 SV=1
Sarcoplasmic calcium-binding protein (Fragment) OS=Chionoecetes opilio OX=41210 PE=1
SV=1
Bev_HC-Bevacizumab_heavy_chain
Bev_LC-Bevacizumab_light_chain
Immunoglobulin kappa light chain OS=Homo sapiens OX=9606 PE=1 SV=1
Sarcoplasmic calcium-binding protein (Fragment) OS=Chionoecetes opilio OX=41210 PE=1
SV=1
Bev_HC-Bevacizumab_heavy_chain
Bev_LC-Bevacizumab_light_chain
Immunoglobulin kappa light chain OS=Homo sapiens OX=9606 PE=1 SV=1
Girdin OS=Mus musculus OX=10090 GN=Ccdc88a PE=1 SV=2
1
2
3
4
5
6
1
2
3
4
1
2
3
4
1946
971
294
72
54
45
1447
782
498
59
1981
1225
641
52
44
17
10
2
3
1
27
13
8
1
48
24
13
2
dentro de um conjunto enorme de
outras centenas de milhares de sequências
de peptídeos. Para isto,
necessitou-se incluir no banco de
dados Swissprot tanto as sequências
de aminoácidos das cadeias
leve e pesada do bevacizumabe
quanto os peptídeos contaminantes
provenientes da auto-hidrólise
da tripsina e endoproteinase Glu-C.
Após a execução de busca com
o algoritmo Mascot, utilizando-se
o conjunto de espectro para cada
lote de bevacizumabe , obtido nas
duas análises, e tanto para a digestão
com tripsina quanto para a
co-digestão com tripsina e endoproteinase
Glu-C, verificou-se que
os resultados destas buscas foram
a identificação das cadeias leve e
pesada do bevacizumabe , com a
obtenção de scores elevados (p <
0,01) em todas condições analisadas.
Os resultados de identificação
de proteínas obtidas a partir da
análise do Mascot foram compilados
na tabela 3, onde os scores de
proteínas e os números de peptídeos
encontrados na sequência do
bevacizumabe foram explicitados.
Os dados do conjunto de peptídeos
sequenciados com relevância
estatística para as cadeias leve e
pesada do bevacizumabe , nos três
lotes, foram todos compilados. Observou-se
que, para os três lotes, o
sequenciamento de peptídeos que
cobrem as sequências F(ab)-12 LC
e F(ab)-12 HC gerou score individual
superior ao limite mínimo significativo
calculado pelo software.
Os resultados experimentais
completos exigem um grande número
de páginas no formato de tabelas,
que não podem ser mostradas
no formato do presente manuscrito.
Por essa razão, esses dados
estão disponibilizados acessando
30
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
Tabela 4 - Proteínas identificadas nos Lotes 1, 2 e 3 de Avastin® mostrando que houve cobertura (coverage) completa de sequência
das cadeias leve e pesada de Bevacizumabe para todos.
Lote Proteína Descrição -10lgP Cobertura (%) Peptídeos Massa média
1
2
3
1 Bevacizumabe, cadeia pesada 1048.59 100 528 49847
2 Bevacizumabe, cadeia leve 872.93 100 257 23451
1 Bevacizumabe, cadeia pesada 1056.35 100 513 49847
2 Bevacizumabe, cadeia leve 910.33 100 236 23451
1 Bevacizumabe, cadeia pesada 1064.82 100 459 49847
2 Bevacizumabe, cadeia leve 915.97 100 230 23451

o link: https://www.dropbox.com/
sh/1h1ybok5wqs5jid/AABEUa-
-uGFWNx7iqmKotezu7a?dl=0-- .
Laboratório 2
A tabela 4 (representativa para
os três lotes analisados) apresenta
os dados resultantes da análise
computacional gerados pelos
experimentos de LC-MS/MS para
os produtos de proteólise com as
enzimas tripsina, quimotripsina,
Lys-C e Glu-C (V8), mostrando que
100% das sequências das cadeias
leve e pesada de bevacizumabe
foram confirmadas. A título de
ilustração, a figura 1 (representativa
para os três lotes analisados)
mostra as sequências das cadeias
pesada e leve do princípio ativo do
Avastin®, indicando os peptídeos
sequenciados que proporcionaram
a cobertura de 100% da sequência
de aminoácidos do anticorpo
bevacizumabe. Dados similares
foram obtidos para os lotes 2 e 3
de Avastin®. Vale ressaltar que um
alto grau de redundância foi obtido
neste trabalho. Ou seja, os peptídeos
foram sequenciados muitas e
repetidas vezes e se sobrepuseram
exaustivamente à sequência de
aminoácidos do bevacizumabe.
Os resultados experimentais
completos exigem um grande número
de páginas no formato de
tabelas, que não podem ser mostradas
no formato do presente
manuscrito. Por essa razão, esses
dados estão disponibilizados acessando
o link: https://massive.ucsd.
edu/ProteoSAFe/dataset.jsp?task
=8a5ad7a21ac14139a474146f8
c4fe268. Para isso, deve-se utilizar
o login: LBQP_MAb, e a senha:
bevacizumabe.
Laboratório 3
A figura 2 (representativa para
os três lotes analisados) apresenta
os dados resultantes da análise
computacional gerados pelos
experimentos de LC-MS/MS para
os produtos de proteólise com as
enzimas tripsina, quimotripsina,
mostrando que 100% das sequências
das cadeias leve e pesada de
bevacizumabe foram confirmadas.
Os resultados experimentais
completos exigem um grande número
de páginas no formato de
tabelas, que não podem ser mostradas
no formato do presente
manuscrito. Por essa razão, esses
dados estão disponibilizados
acessando-se o link: http://dalton-
-server.iqm.unicamp.br/MSData/ .
Laboratório 4
A estratégia de sequenciamento
completo das regiões que contêm
as sequências F(ab)-12 LC e F(ab)-
12 HC baseou-se na produção de
peptídeos pelas enzimas tripsina
e quimotripsina, o que permite a
sobreposição por diferentes peptídeos
em regiões de ambiguidade
de sequência, devido às diferenças
de especificidade por aminoácidos
no ponto de clivagem. Ainda assim,
a análise de peptídeos específicos
produzidos pelas enzimas tripsina
e quimotripsina, não permitiu uma
cobertura completa da região de
interesse. Vários pontos da sequencia
não puderam ser comprovados
apenas pela sobreposição dos peptídeos
produzidos por ambas as enzimas.
Utilizando-se de ferramentas
de processamento dos dados
de EM mais poderosas, adotou-se
a estratégia de análise combinada
de peptídeos específicos e inespecíficos,
onde considera-se pontos
de clivagens em aminoácidos não
específicos ou perdas de pontos
de clivagens. Primeiramente ficou
claro que ambas as enzimas (tripsina
e quimotripsina), adquiridas
comercialmente em altos graus
de qualidade, não são totalmente
específicas, produzindo peptídeos
pela fragmentação da cadeia
em aminoácidos inespecíficos e a
incapacidade de clivagem em sítios
tidos como específicos. Esta
imperfeição enzimática, foi vista
neste estudo em particular como
importante e interessante para
o estabelecimento da sequência
completa da região de interesse,
visto que alguns desses peptídeos
permitiram completar posições na
sequência do bevacizumabe que
não haviam sido identificadas ou
ainda apresentavam-se ambíguas.
Este processo de clivagem inespecífica
é conhecido para as enzimas
proteolíticas, e dependem de vários
fatores, que incluem a sequência
da cadeia proteica e acessibilidade
às ligações químicas que serão
clivadas.
As sequências completas das
cadeias, bem como os peptídeos
utilizados para a confirmação da
estrutura primária do bevacizumabe
são apresentadas na figura 3
(representativa para os três lotes
analisados). Assim, a identificação
de peptídeos por estratégias de EM
combinada com métodos computacionais
de interpretação de espectros
de fragmentação permitiu
avaliar diferentes lotes do produto
comercial Avastin, através de um
processo simples e reprodutível, e
demostrar que princípio ativo do
produto comercial Avastin é uma
proteína única com sequência de
aminoácidos perfeitamente correspondente
ao anticorpo bevacizumabe
descrito na literatura (PRES-
TA et al., 1997).
Os resultados experimentais
completos exigem um grande
número de páginas no formato
de tabelas, que não podem
ser mostradas no formato do
presente manuscrito. Por essa
razão, esses dados estão disponibilizados
acessando o link:
http://143.107.199.97:8080. Para
isso, deve-se utilizar o login: conveniolicks@lpcfmrp.br,
e a senha:
DIQMTQSPSS.
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
31

artigo 2
Imagem Ilustrativa
Autores:
Eduardo de Souza Matos 1 ,
Ronaldo Mohana-Borges *1 ,
Vitor Marcel Faça*2, Fábio César Gozzo *3 ,
Wagner Fontes4, Carlos André O. Ricart 4 ,
Fábio César Sousa Nogueira 5 ,
Mário Sérgio Palma §6 ,
Marcelo Valle de Sousa *4 .
Figura 1 - Cobertura de sequência das cadeias pesada e leve (representativa para o três lotes de Avastin®). Em azul, estão peptídeos sequenciados por espectrometria
de massa com “False Discovery Rate” (FDR) < 1 %. Em cinza, estão peptídeos sequenciados por espectrometria de massa com “False Discovery Rate” (FDR) > 1 %. Caixas
vermelhas correspondem a modificação (carbamidometilação) de cisteínas introduzidas durante o preparo da amostra para a separação das pontes dissulfeto. Caixas azuis
correspondem a oxidação de aminoácidos de ocorrência natural na amostra ou durante o preparo por exposição ao oxigênio atmosférico. Caixas amarelas correspondem a
deamidação de aminoácidos de ocorrência natural.
32
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
Discussão
Com a finalidade de identificar
a sequência completa dos aminoácidos
correspondentes as sequências
F(ab)-12 LC e F(ab)-12 HC
do anticorpo monoclonal humanizado
bevacizumabe princípio ativo
do medicamento Avastin®, quatro
laboratórios brasileiros, reconhecidamente
proficientes na análise
de peptídeos e proteínas por EM,
desenvolveram estratégias independentes
para obter a sequência
de aminoácidos das cadeias leve e
pesada do bevacizumabe em três
diferentes lotes do produto comercial
Avastin®. Estas estratégias
compreendiam o uso de diferentes
espectrômetros de massas, métodos
de fracionamento das cadeias
do anticorpo (por exemplo, eletroforese
em gel de poliacrilamida com
SDS e agente redutor e cromatografia
líquida), precipitação de proteínas
com solvente orgânico, uso
de enzimas proteolíticas com distintos
sítios de clivagem, métodos
de fragmentação complementares
(CID, Collision Induced Dissociation;
HCD, Higher-energy Collisional
Dissociation; e ETD, Electron
Transfer Dissociation) e variadas
ferramentas bioinformáticas para
interpretação dos espectros de
fragmentação dos íons peptídicos e
inferência da sequência de aminoácidos
do anticorpo.
Todos os quatro laboratórios
alcançaram autonomamente
êxito na obtenção de 100% das
sequências F(ab)-12 LC e F(ab)-
12 HC do anticorpo monoclonal
humanizado bevacizumabe. Estes
resultados confirmam a sequência
publicada para os aminoácidos do
anticorpo (PRESTA et al., 1997),
em lotes diferentes e usando estratégias
variadas, além de demonstrar
a capacidade analítica
dos laboratórios brasileiros em
fornecer resultados robustos e de
qualidade mesmo em questões
complexas, como na caracterização
de biofármacos.
Conclusão
O Brasil dispõe de laboratórios
de proteômica muito bem
equipados e qualificados, para a
realização de análises multicomplexas
de química de proteínas,
aplicadas ao desenvolvimento e
controle de qualidade de anticorpos
monoclonais de uso terapêutico,
em apoio às indústrias farmacêuticas
interessadas.
Agradecimentos:
Nuno Manuel Domingues e Jaques
Ferreira de Souza, do Laboratório
de Bioquímica e Química
de Proteínas, Departamento de
Biologia Celular, Instituto de Ciências
Biológicas, Universidade de
Brasília, Brasília, DF.

Figura 2. Mapa de cobertura das cadeias leve e pesada do anticorpo monoclonal humanizado bevacizumabe, obtido por hidrolise com tripsina e quimotripsina e
sequenciamento feito por espectrometria de massas.
Figura 3. Sequência descrita para o anticorpo bevacizumabe. As sequências como F(ab)-12 LC e F(ab)-12 HC correspondente às cadeias leve (no painel superior) e
pesada (no painel inferior) têm suas destacadas em negrito (Presta e cols, 1997). Os segmentos, delimitados por bordas pretas representam os peptídeos observados
com as clivagens proteolíticas específicas produzidas pelas enzimas tripsina (segmentos verdes) e quimotripsina (segmentos vermelhos). Os segmentos azuis representam
os peptídeos identificados utilizando a estratégia de busca por clivagens enzimáticas inespecíficas. As linhas pretas verticais ao lado dos aminoácidos nas regiões variáveis
indicam a confirmação da sequência de aminoácidos pela análise do espectro de fragmentação dos peptídeos.
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
33

artigo 2
Imagem Ilustrativa
Autores:
Eduardo de Souza Matos 1 ,
Ronaldo Mohana-Borges *1 ,
Vitor Marcel Faça*2, Fábio César Gozzo *3 ,
Wagner Fontes4, Carlos André O. Ricart 4 ,
Fábio César Sousa Nogueira 5 ,
Mário Sérgio Palma §6 ,
Marcelo Valle de Sousa *4 .
Agradecimentos:
O Laboratório 1 foi apoiado financeiramente pela
Licks Advogados Associados para a execução deste
projeto através de convênio de número 22075-2 firmado
com a Universidade Federal do Rio de Janeiro (UFRJ)
e a Fundação Universitária José Bonifácio (FUJB).
O Laboratório 2 foi apoiado financeiramente pela
Licks Advogados Associados para a execução deste
projeto através de contrato de número 054/2018 firmado
com a Universidade de Brasília e a Fundação de
Empreendimentos Científicos e Tecnológicos.
O Laboratório 3 foi apoiado financeiramente pela
Licks Advogados Associados para a execução deste
projeto através de convênio de número 588 firmado
com a UNICAMP e a Fundação de Desenvolvimento da
Unicamp – FUNCAMP.
O Laboratório 4 foi apoiado financeiramente pela
Licks Advogados Associados para a execução deste projeto
através de convênio de número 7056 firmado com
a Universidade de São Paulo e a Fundação Hemocentro
de Ribeirão Preto.
Complemento Normativo
Referências
bibliográficas
KÖHLER, G. & MILSTEIN, C. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined
specificity. Nature 256, 495–497 (1975).
SMITH, S. L. Ten Years of Orthoclone OKT3 (Muromonab-CD3): A Review. Journal of Transplant
Coordination: Official Publication of the North American Transplant Coordinators Organization
(NATCO) 6 (3): 109–119. 1996; quiz 120–21.
AGGARWAL, S. What’s Fueling the Biotech Engine—2009–2010. Nature Biotechnology 28
(11): 1165–1171. https://doi.org/10.1038/nbt1110-1165, 2010.
LADWIG, P. M.; BARNIDGE, D.R.; WILLRICH, M.A.V. Mass Spectrometry Approaches for Identification
and Quantitation of Therapeutic Monoclonal Antibodies in the Clinical Laboratory.”
Edited by Christopher J. Papasian. Clinical and Vaccine Immunology 24 (5)., 2017. https://doi.
org/10.1128/CVI.00545-16.
SEN, K.; ILKER, TANG, W.H.; NAYAK, S.; KIL, Y.J.; BERN, M.; OZOGLU,B.; UEBERHEIDE, B.; DAVIS,
D.; BECKER, C. Automated Antibody De Novo Sequencing and Its Utility in Biopharmaceutical Discovery.
Journal of The American Society for Mass Spectrometry 28 (5): 803–810, 2017. https://
doi.org/10.1007/s13361-016-1580-0.
WASINGER, V.C.; CORDWELL, S.J.; CERPA-POLJAK, A.; YAN, J.X.; GOOLEY, A.A.; WILKINS, M.R.;
DUNCAN, M.W.; HARRIS, R.; WILLIAMS, K; HUMPHERY-SMITH, I. Progress with Gene-Product
Mapping of the Mollicutes:Mycoplasma genitaliu. Electrophoresis 16 (1): 1090–1094, 1995.
https://doi.org/10.1002/elps.11501601185.
ZHANG, Y.; FONSLOW, B.R.; SHAN, B.; BAEK, M.C. YATES, J.R. Protein Analysis by Shotgun/
Bottom-up Proteomics. Chemical Reviews 113 (4): 2343–2394, 2013 https://doi.org/10.1021/
cr3003533.
AEBERSOLD, R.; MANN, M. 2016. Mass-Spectrometric Exploration of Proteome Structure and
Function. Nature 537 (7620): 347–55, 1016. https://doi.org/10.1038/nature19949.
PADRÓN, G.; DOMONT, G.B. 2014. Two Decades of Proteomics in Latin America: A Personal View.
Journal of Proteomics 107 (July): 83–92, 2014. https://doi.org/10.1016/j.jprot.2014.03.045.
MARTINS-DE-SOUZA, D. Brazil: The Country of Proteomics. PROTEOMICS 12 (17): 2599–2600,
2012. https://doi.org/10.1002/pmic.201270114.
NOGUEIRA, F.C.S.; JUNQUEIRA, M.; DOMONT, G.B. Editorial: Special Issue on Brazilian Proteomics.
Journal of Proteomics, Brazilian Proteomics, 151 (January): 1, 2017. https://doi.
org/10.1016/j.jprot.2016.11.015.
PRESTA, L.G.; CHEN, H.; O’CONNOR, S.J.; CHISHOLM, V.; MENG, Y.G.; KRUMMEN, L.; WINKLER,
M.; FERRARA, N. Humanization of an anti-vascular endothelial growth factor monoclonal antibody
for the therapy of solid tumors and other disorders. Cancer Res. 57(20): 4593-4599, 1997.
Referente ao artigo: 2
34
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
artigo 2
Disponibilizado por Analytica em parceria com
Arena Técnica
Sequenciamento das regiões
F(ab)-12 LC e F(ab)-12
HC do anticorpo monoclonal
humanizado bevacizumabe: um
estudo multicêntrico
ISO 21572
Foodstuffs -- Molecular biomarker analysis -- Protein-based methods
Norma publicada em: 02/2013. / Status: Vigente.
Classificação 1: Métodos gerais de testes e análises para produtos alimentícios.
Classificação 2: Norma recomendada.
Artigo: Sequenciamento das regiões F(ab)-12 LC e F(ab)-12 HC do anticorpo monoclonal
humanizado bevacizumabe: um estudo multicêntrico.
Entidade: ISO.
País de procedência/Região: Suiça.
Resumo: ISO 21572:2013 provides general guidelines and performance criteria for methods
for the detection and/or quantification of specific proteins or protein(s) of interest [POI(s)] in
a specified matrix
https://www.iso.org/standard/51005.html
DIN 51002-1
Inductively coupled plasma mass spectrometry (ICP-MS) - Part 1: Principles
and definitions
Norma publicada em: 11/2004. / Status: Vigente. Classificação 1: Norma recomendada.
Artigo: Sequenciamento das regiões F(ab)-12 LC e F(ab)-12 HC do anticorpo monoclonal
humanizado bevacizumabe: um estudo multicêntrico.
Entidade: DIN. País de procedência/Região: Alemanha.
https://www.beuth.de/en/standard/din-51002-1/64088589
Safety & Risk Strategy report é um relatório reservado produzido pela Arena Técnica conforme acordo com a Editora.
Os resumos aqui expostos foram retirados da internet dos sites das entidades respectivas, portanto, deverão ser consultadas em caso de
publicação em sua íntegra por estarem protegidos por copyright.

REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
35

Matéria de capa
Matéria de capa
VANTAGENS DO MÉTODO RÁPIDO
NA MICROBIOLOGIA
Uma tecnologia criada originalmente para detectar o crescimento
Uma de tecnologia microrganismos criada originalmente em amostras para de detectar sangue o está crescimento ganhando
de microrganismos terreno no Brasil, porém em amostras com outra de finalidade: sangue reduzir está o ganhando tempo de
terreno quarentena no Brasil, no porém controle com de outra qualidade finalidade: de produtos reduzir farmacêuticos o tempo de
quarentena estéreis. no controle de qualidade de produtos farmacêuticos
estéreis. A utilização desse sistema, embora ainda seja considerado um
A utilização método desse alternativo*, sistema, está embora atraindo ainda a atenção seja dos considerado farmacêuticos um
método visto alternativo*, que, ao automatizar está atraindo o processo a atenção manual e dos retirar farmacêuticos a interferência
visto humana que, ao automatizar de leitura dos o testes, processo praticamente manual e retirar diminui a pela interferência metade a
humana quarentena de leitura para dos liberação testes, de praticamente lotes de seus diminui produtos. pela Com metade isso, as a
quarentena
companhias
para liberação
ganham eficiência
de lotes
em
de seus
seus trâmites
produtos.
logísticos.
Com isso, as
companhias No Brasil, ganham a Anvisa eficiência exige validação em seus do trâmites método rápido logísticos. no controle
de qualidade de cada produto, assim como em outros países.
No Brasil, a Anvisa exige validação do método rápido no controle
Porém, em mercados desenvolvidos, como os EUA e Europa, o
de qualidade
método rápido
de cada
já é usado
produto,
a mais
assim
tempo,
como
sendo
em
habituais
outros países.
e mais
Porém, frequentes em mercados essas validações desenvolvidos, para o uso. como os EUA e Europa, o
método rápido já é usado a mais tempo, sendo habituais e mais
Além da rapidez, os projetos já avaliados e autorizados pela
frequentes
ANVISA,
essas
demonstraram
validações
dados
para
estatísticos
o uso.
que comprovam ainda,
Além a superioridade rapidez, dos projetos métodos já alternativos, avaliados em e limite autorizados de detecção, pela
ANVISA, em relação demonstraram ao sistema dados de estatísticos cultura manual. que comprovam O reflexo disso ainda, é o
a superioridade aumento de dos segurança métodos para alternativos, consumidores em limite e pacientes. de detecção,
em relação “Os métodos ao sistema tradicionais de cultura são baratos manual. e bem O reflexo conhecidos, disso é mas o
aumento consomem de segurança muito tempo para os e consumidores têm detecção e limitada. pacientes. Por outro
“Os métodos lado, estão tradicionais disponíveis são diversas baratos tecnologias e bem conhecidos, alternativas, mas que
consomem
são rápidas
muito
e têm
tempo
maior
e
poder
têm detecção detecção.
limitada.
Como
Por
estatístico,
outro
tive a oportunidade de acompanhar a performance de algumas
lado, estão disponíveis diversas tecnologias alternativas, que
metodologias alternativas versus a metodologia tradicional.
são rápidas e têm maior poder de detecção. Como estatístico,
Principalmente em níveis baixos de contaminação, a performance
tive a
dos
oportunidade
métodos alternativos
de acompanhar
é bem melhor
a performance
que a performance
de algumas
dos
metodologias métodos tradicionais”, alternativas disse versus o estatístico a metodologia Dorival Leão tradicional. proprietário
Principalmente da Estatcamp, em uma níveis empresa baixos de consultoria contaminação, que suporta a performance projetos
dos métodos de validação alternativos nesta área. é bem melhor que a performance dos
métodos Uma tradicionais”, das companhias disse a o se estatístico beneficiar Dorival do método Leão automatizado proprietário
da Estatcamp, produz soluções uma empresa parenterais de e consultoria atende hospitais que suporta e farmácias projetos em
de validação todo território nesta nacional. área. Pioneira em validar e utilizar o método
Uma das companhias a se beneficiar do método automatizado
produz soluções parenterais e atende hospitais e farmácias em
todo território nacional. Pioneira em validar e utilizar o método
36
alternativo, libera seus produtos com registros aprovados pela
alternativo, ANVISA desde libera 2016. seus “Inicialmente, produtos com optamos registros por aprovados validar um pela
ANVISA método alternativo desde 2016. pela “Inicialmente, necessidade de optamos continuar por liberando validar um
método nossos produtos alternativo em pela um prazo necessidade de 7 dias. de Após continuar a publicação liberando
nossos da RDC- produtos 17, em em 2010, um obrigando prazo de a 7 extensão dias. Após do a prazo publicação de
da testes RDC- microbiológicos 17, em 2010, para obrigando 14 dias, enfrentamos a extensão um do desafio prazo de
testes logístico, microbiológicos de armazenagem para e prazos 14 dias, de entrega, enfrentamos que nos um forçou desafio
logístico, a buscar alternativas de armazenagem que aumentassem e prazos de a velocidade entrega, que dos ensaios nos forçou
a microbiológicos. buscar alternativas que aumentassem a velocidade dos ensaios
microbiológicos.
Consultamos quais eram as tecnologias rápidas disponíveis,
Consultamos
e optamos por
quais
iniciar
eram
a validação
as tecnologias
com o sistema
rápidas
baseado
disponíveis,
em
cultivo. Para nossa surpresa, após finalizada a validação, ao
e optamos por iniciar a validação com o sistema baseado em
analisar os dados estatísticos, além do ganho de velocidade em
cultivo. Para nossa surpresa, após finalizada a validação, ao
nosso ensaio, houve expressivo ganho de precisão, comparado
analisar
ao método
os dados
anterior,
estatísticos,
tradicionalmente
além do
utilizado
ganho de
no
velocidade
mercado
em
nosso farmacêutico. ensaio, Visto houve a eficiência expressivo deste ganho novo de método, precisão, e o comparado rápido
ao retorno método de investimento anterior, do tradicionalmente projeto, prosseguimos utilizado para no registrar mercado
farmacêutico. nossos produtos Visto com a sua eficiência utilização”, deste aponta novo os método, líderes técnicos e o rápido
retorno do projeto. de investimento do projeto, prosseguimos para registrar
nossos A gerente produtos de qualidade, com sua responsável utilização”, pelo aponta projeto os líderes se orgulha técnicos
do em projeto. ter assumido este desafio e poder ter contribuído com sua
A empresa gerente para de esse qualidade, processo responsável de melhoria, e pelo ainda projeto acrescenta se que orgulha
em a escolha ter assumido pelo método este foi desafio sustentada e poder pela facilidade ter contribuído de operacao com sua
empresa do sistema para e pela esse analise processo de payback de melhoria, do projeto, e ainda visto acrescenta que o custo que
a total escolha do investimento pelo método gerou foi um sustentada balanco significantemente pela facilidade de positivo. operacao
Com um sistema optico ultrassensível e algoritmos otimizados
do sistema e pela analise de payback do projeto, visto que o custo
para alertar qualquer presenca de microrganismos de forma
total do investimento gerou um balanco significantemente positivo.
rapida e definitiva, o sistema proporcionou ao setor de qualidade
Com um sistema optico ultrassensível e algoritmos otimizados
atuar ativamente, na realidade e na dinâmica de atendimento do
para
mercado,
alertar
contribuindo
qualquer
para
presenca
linearizar
de
a distribuição
microrganismos
de produtos,
de forma
rapida resultando e definitiva, em ganho o de sistema eficiencia proporcionou operacional. ao setor de qualidade
atuar ativamente, na realidade e na dinâmica de atendimento do
*Metodo Alternativo = Metodo Rápido
mercado, contribuindo para linearizar a distribuição de produtos,
resultando em ganho de eficiencia operacional.
Tiago Simões, Ph.D.
*Metodo Alternativo = Metodo Rápido Sales Execuive BD Life Science
Tiago Simões, Ph.D.
Sales Execuive BD Life Science

SOLUÇÃO SOLUÇÃO BD BD BACTEC BD BACTEC FX FX FX PARA PARA TESTE TESTE DE DE ESTERILIDADE DE ESTERILIDADE AUTOMATIZADO.
AUTOMATIZADO.
Proporciona Proporciona um um ambiente um ambiente favorável favorável de de crescimento de crescimento para para uma uma para comunidade uma comunidade microbiana microbiana que que rapidamente que rapidamente detecta sua sua presença detecta sua presença
através através de de um um de sistema um sistema sensível sensível à à variação à variação do do sinal sinal de do de luz sinal luz e, e, de por por luz meio meio e, de por de alarme meio de sonoro alarme e e indicadores sonoro e luminosos, indicadores alerta alerta luminosos, alerta
prontamente prontamente o o usuário o usuário a a detecção a detecção uma uma cultura de uma positiva. cultura positiva.
COMO COMO O O BD BD O BACTEC BD BACTEC FX FX IMPACTA FX IMPACTA POSITIVAMENTE POSITIVAMENTE A A SUA ROTINA?
A SUA ROTINA?
11
Promove redução significativa do do tempo de de preparo de de meios e e ensaio;
1 Promove redução significativa do tempo de preparo de meios e ensaio;
22
Procedimento simples, com com rastreabilidade das das ações passo a a passo, e e resultados definitivos, independentes de de análises
posteriores; 2 Procedimento simples, com rastreabilidade das ações passo a passo, e resultados definitivos, independentes de análises
posteriores;
33
Detecta em em até até 5h 5h e e libera libera em em até até 55 dias, dias, reduzindo período de de quarentena em em inventário.
3 Detecta em até 5h e libera em até 5 dias, reduzindo período de quarentena em inventário.
44
Ensaio robusto em em rotina, sem sem interferentes de de método, não não havendo necessidade de de materiais específicos ou ou cuidado em em
monitoramento 4
Ensaio robusto ambiental em intensivo. rotina, sem interferentes de método, não havendo necessidade de materiais específicos ou cuidado em
monitoramento ambiental intensivo.
CARACTERÍSTICAS & BENEFÍCIOS DIRETOS
CARACTERÍSTICAS & BENEFÍCIOS DIRETOS
Tecnologia de de
fluorescência
Tecnologia de
Sistema
fluorescência
automatizado
Sistema
Qualitativo
automatizado
automatizado
Qualitativo
High High Throughput
automatizado
(200 ensaios simultâneos)
High Throughput
Bactérias, (200 ensaios
fungos
simultâneos)
e e leveduras
Bactérias, fungos
e leveduras
Precisão de de 1UFC
nos nos ensaios
Precisão de 1UFC
Praticidade
nos ensaios
operacional
Praticidade
Segurança na operacional
liberação de de produtos
Segurança na
Rapidez na na liberação validação
de produtos
e e implementação
Rapidez na validação
Monitoramento e implementação
para para
controle efetivo
Monitoramento para
controle efetivo
Solicite uma visita com
nossos especialistas.
Solicite uma visita com
nossos especialistas.
+55 62 623085-1900
www.lasdobrasil.com.br
comercial@lasdobrasil.com.br
+55 62 3085-1900
www.lasdobrasil.com.br
comercial@lasdobrasil.com.br
37

38
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19

POR QUE ESCOLHER A LAS DO BRASIL COMO SEU FORNECEDOR?
A LAS do Brasil, buscando melhor atender seus clientes, vem aprimorando
cada vez mais a prestação de serviços com entregas de
produtos analíticos e prazos de importação recorde, utilizando de
processos novos e inteligentes.
Com um portfólio completo de produtos e serviços qualificados,
procura dar suporte e entender as peculiaridades de seus clientes
em todo o processo de compra. A LAS do Brasil possui todos os
requisitos legais para atender em todos os aspectos a legislação de
importação e entregar seus produtos de forma ágil e segura.
Toda a documentação de funcionamento da LAS do Brasil está
disponível no site: http://www.lasdobrasil.com.br/downloads.
Tenha em mãos essas informações e faça a avaliação do atendimento
aos requisitos legais de seu
fornecedor (licenças e alvarás), frente
à vigilância sanitária local, ANVISA
(AFE), Autorização Especial (AE) para
substâncias normais e sujeitas a controle
especial pela Portaria 344/98, licença
ambiental, da Prefeitura, Bombeiro,
CRF, entre outros.
Consolidação de remessas.
Empresa totalmente licenciada.
O cliente garante que o processo de importação
estará em conformidade com as normas brasileiras.
Decisões estratégicas em menor tempo.
Produtos entregues com documentação completa.
Presença em todas as indústrias
farmacêuticas brasileiras.
Emissão de faturas customizadas de acordo com
os requisitos das autoridades brasileiras.
Despacho mais rápido de bens com Alfândega
no Brasil devido a execução do processo de
forma coerente.
Crescimento nos segmentos de mercado
farmacêutico, clínico, químico e alimentos.
Vendedores capacitados.
Importação especializada
Equipe técnica especializada e dedicada.
Radar (Autorizado pelo Governo Federal para importar)
lançado pelo IRS, sem limites de restrições
de valores, para importar.
Gestão sustentável e globalizada.
39
Seu distribuidor autorizado no Brasil.
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19

Tecnologia inovadora que utiliza
Água Ultrapura
Destaque para atuação da água ultrapura
O MasSpec Pen® é uma espécie de “caneta” que analisa os
tecidos em 10 segundos e dá um diagnóstico com 96% de
precisão, de acordo com o estudo desenvolvido pelo Instituto de
Química da Universidade do Texas.
Esse dispositivo de ionização portátil e descartável libera uma
pequena gota de água ultrapura sobre o tecido com suspeita de
câncer. O conteúdo molecular é analisado por um espectrômetro
de massas conectado à “caneta” para determinar se o perfil
biomolecular é correspondente ao tecido canceroso.
Utilizando essa tecnologia, médicos podem saber em tempo real,
como eliminar todo o rastro do câncer em uma operação. Explica
Lívia Schiavianato Eberlin, Professora de Química na Universidade
do Texas e diretora do estudo.
A detecção do câncer com uma gota de água ultrapura ressalta
o avanço da tecnologia de precisão e tem um papel crucial no
desenvolvimento de testes em diagnósticos clínicos.
Informe de Mercado
Atrelando a utilização da água ultrapura como tecnologias
cada vez mais rápidas e precisas, as indústrias farmacêuticas
também se beneficiam com o uso dessa ciência.
Todo tipo de produto, principalmente vinculado ao consumo
humano como medicamentos demanda muita pesquisa. A LAS
do Brasil pensando em atender esse ritmo de desenvolvimento
dos laboratórios industriais, traz ao mercado, purificadores e
ultrapurificadores de alta qualidade.
A indústria farmacêutica aumentou significativamente sua
produção ao longo dos anos utilizando equipamentos
altamente sensíveis de HPLC (Cromatografia Líquida de Alta
Eficiência) e como consequência ao aumento do número
de análises. A demanda de água ultrapura se extende para
abastecer esses equipamentos. Portanto, a água ultrapura é
o reagente com melhor custo benefício comparada a outros
como acetonitrila ou metanol.
40
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
Conheça a linha de purificadores de água
THERMO FISHER.
Uma linha completa de purificadores de água para o seu
laboratório. Água tipo I e II que abrangem inúmeras aplicações
laboratoriais.
Conte com o time de Especialistas da LAS do Brasil para escolher o melhor sistema de purificação e
ultrapurificação que você precisa!

REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
41

Espectrometria de Massa
Os isótopos e a espectrometria de massas
Por Oscar Vega Bustillos*
42
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
Muitos elementos químicos coexistem
na natureza com diferentes
massas denominadas isótopos. O
termo isótopo é usado para descrever
átomos de um mesmo elemento,
isto é com mesmo número de
prótons, porém pode conter número
variado de nêutrons. A palavra isótopo
provem do grego, “iso” significa
“igual” e topos significa “lugar”,
assim os isótopos de um único elemento
ocupam a mesma posição na
tabela periódica. A doutora escocesa
Margaret Todd sugeriu o nome
isótopo em 1913, a pedido do rádio
químico inglês Frederick Soddy que
ganhou o prêmio Nobel de Química
em 1921.
Os isótopos podem ser radiativos
ou não radiativos. Os isótopos não
radiativos são chamados de isótopos
estáveis. Os isótopos radiativos
são isótopos que sofrem decaimento
radioativo espontaneamente e são
capazes de emitir algum tipo de radiação.
Os isótopos radiativos transformam-se
em outros elementos
químicos tal como explicou F. Soddy
na transformação do U-238 para Pb-
206, que passa por várias etapas de
decaimento, emitindo radiação alfa
e beta. Cada etapa do decaimento
acontece em um tempo especifico
denominada meia-vida equivalente a
um relógio natural. Este fenômeno é
usado para datação de eventos naturais.
Graças aos estudos da datação
por radioisótopos, sabemos que
o planeta Terra foi formado há 4,2
bilhões de anos, que os dinossauros
desapareceram da face da Terra há
65 milhões de anos e que existem pirâmides
do Egito com idade de 4.500
anos.
O primeiro cientista que descobriu
a existência dos isótopos foi
J.J. Thomson em 1912. Ele mesmo
construiu um espectrômetro de
massas e explorou os íons positivos
de Neônio, ele descobre a existência
de dois isótopos Ne-20 e Ne-22.
Thomson conclui que alguns átomos
do gás Neônio possuem massas
maiores que o resto do gás. Este
descobrimento incitou seu aluno
Francis Willian Aston à construção
de um novo espectrômetro de massas,
especifico para pesquisar as
massas dos isótopos dos elementos
químicos conhecidos até então.
Aston descobre que a massa molar
do elemento Cloro, representada na
tabela periódica com massa 35,45 é
na realidade a média ponderada da
contribuição de seus isótopos Cl-35
e Cl-37, tendo abundancias de 76%
e 24%, respectivamente. Por este
feitio, Aston recebe o Premio Nobel
de Química em 1922.
O estudo da Química é dividido em
dois universos: inorgânica e orgânica.
Os isótopos tem um papel muito importante
nos dois ramos desta Ciência.
Na Química Inorgânica é explorado
com maiores detalhes os efeitos
isotópicos.
Existem vários tipos de espectrômetros
de massas comercialmente
ofertados para análise de elementos
inorgânicos. Os mais conhecidos
são:
1) A Espectrometria de Massa com
Plasma Indutivamente Acoplado ICP-
-MS “Inductively Coupled Plasma
Mass Spectrometry”; é um método
sensível para análise e confirmação
de íons metálicos com uma alta faixa
dinâmica linear. O ICP-MS é capaz de
analisar quase todos os elementos da
tabela periódica e pode ser aplicado
em soluções, sólidos e gases. Uma
configuração típica de um ICP-MS é
mostrada na Figura 1. As amostras,
na forma de solução são vaporizadas
usando um nebulizador. Amostras na
forma sólida são analisadas usando
ablação a laser e amostras na forma
gasosa são introduzidas diretamente
no espectrômetro. Todas as amostras
são introduzidos em um plasma
de argônio composto de elétrons e
íons de argônio carregados positivamente.
No plasma que atinge a
temperatura de 10.000 K, o material
se divide em átomos individuais que
perdem elétrons e se tornam íons
carregados positivamente (os ânions
não são detectados pela ICP-MS). O
feixe de íons positivos entra em um
analisador de massa quadrupolo,
onde os íons são separados de acordo
com sua relação massa/carga. O
ICP-MS permite análises qualitativas
de quase 100 metais em várias matrizes,
em um tempo relativamente
curto e em concentrações inferiores
à 1 parte por 1015 (1 ppq).
2) A Espectrometria de Massa
por Ionização Térmica, TIMS “Thermal
Ionization Mass Spectrometry”
é uma técnica de caracterização de
espectrometria de massa de isótopos
altamente sensível. As razões isotópicas
de radionuclídeos são usadas
para obter uma medida precisa para
a análise elementar de uma amostra.
A diluição isotópica permite este cálculo.
Íons da amostra são formados
pelo efeito de ionização térmica. Uma
amostra líquida quimicamente pura
é colocada num filamento de metal
que é então aquecido para evaporar
o solvente (Figura 2). A remoção de
um elétron da amostra purificada é
obtida aquecendo o filamento o suficiente
para liberar um elétron, o que
consequentemente ioniza os átomos
da amostra. Os íons ganham veloci-

ser ocupado por estes espectrômetros, devendo os laboratórios manter uma
elevada limpeza para evitar interferentes nas análises. Exige-se também,
analistas com excelente treinamento para atingir resultados consistentes.
Fonte: Research Gate
dade por um gradiente de potencial
elétrico e são focados em um feixe
por lentes eletrostáticas. O feixe de
íons passa então pelo campo magnético
do eletroímã, onde é dividido
em feixes de íons separados com
base na razão massa/carga.
3) O Espectrômetro de Massas
de Íons Secundários, SIMS “Secondary-ion
mass spectrometry” é
uma técnica utilizada para analisar a
composição de superfícies sólidas e
filmes finos através da aplicação de
“sputtering” na superfície da amostra
com um feixe de íon primário, focalizado,
coletando e analisando os íons
secundários ejetados da mesma.
A razão massa/carga destes íons
secundários é medida com um espectrômetro
de massas a fim de determinar
a composição isotópica ou
molecular da superfície em profundidades
de 1 a 2 nm. SIMS é a técnica
de análise mais sensitiva à superfície,
o espectrômetro de massas SHRIMP
“Sensitive High-Resolution Ion Microprobe”
(Figura 3) é dedicado para
análises de geocronologia podendo
medir abundâncias isotópicas em
minerais a uma escala de 30 micrômetros.
A Geologia da Universidade
de São Paulo USP possui o referido
analisador.
As vantagens do ICP-MS comparadas
com o TIMS e SIMS são: A versatilidade
de utilizar diferentes matrizes
e estados físicos, graças à tocha
plasma como fonte de íons. Rapidez
de concretizar um ciclo analítico desde
a preparação da amostra até a
leitura dos espectros de massas.
A vantagem do TIMS, comparada
com o ICP-MS é na maior exatidão
de medidas isotópicas tornando este
espectrômetro um referencial para
matérias.
Fonte: Research Gate
Figura 1. Diagrama esquemático do Espectrômetro de Massa
A vantagem Fonte: do Research SIMS Gate comparada Figura 1. Diagrama esquemático do Espec-
Indutivamente com o ICP-MS é na maior Acoplado reprodu-
(ICP-MS)
Figura 1. Diagrama esquemático trômetro de do Massa Espectrômetro com Plasma de Indutivamente Massa com Plasma
tibilidade das análises, já que por
Indutivamente Acoplado (ICP-MS) Acoplado (ICP-MS)
ablação de Laser utilizado no ICP-MS
a amostra é destruída no local de coleta,
no caso do SIMS a amostra não
é destruída podendo repetir várias
vezes a análise da mesma amostra
além da robustez analítica.
As desvantagens dos três espectrômetros
de massa em discussão
são: Elevado custo dos analisadores
e da manutenção. Exige um grande
espaço
Fonte:
a ser
Research
ocupado
Gate.
por estes
espectrômetros, devendo os laboratórios
manter Figura uma 2: elevada Diagrama limpeza esquemático da fonte de íons com duplo filamento utilizada
Fonte: Research Gate.
para evitar na interferentes Espectrometria nas análises. de Massa por Ionização Térmica TIMS
Fonte: Exige-se Research também, Gate. analistas com
Figura 2: Diagrama esquemático da fonte
excelente treinamento para atingir
de íons com duplo filamento utilizada na Espectrometria
de Massa por Ionização Térmica
resultados consistentes.
TIMS
Figura 2: Diagrama esquemático da fonte de íons com duplo fila
na Espectrometria de Massa por Ionização Térmica TIMS
Referências Bibliográficas
• Walczyk, T. TIMS versus
multicollector-ICP-MS: coexistence
or struggle for survival? Anal. Bioanal.
Chem. (2004) 378 : 229–231.
• Taylor, H. Inductively Coupled
Plasma Mass Spectrometry.
Academic Press. 2001.
• Moraes, N.M.P. Aplicação
e avalição da técnica de diluição isotópica
por espectrometria de massas
na determinação de elementos de
Terras Raras em materiais geológicos.
Tese IPEN 1988.
Fonte: Australian Scientific Instruments.
Figura 3: Diagrama do espectrômetro de massas SHRIMP “Sensitive High-
Resolution Ion
Microprobe”
Microprobe”
Referências bibliográficas
*Oscar Vega Bustillos
Pesquisador do Centro de Química e Meio
Ambiente CQMA do Instituto de Pesquisas
Energéticas e Nucleares IPEN/CNEN-SP
55 11 3133 9343
Fonte: Australian Scientific Instruments.
Figura 3: Diagrama do espectrômetro de
massas SHRIMP “Sensitive High-Resolution Ion
Walczyk, T. TIMS versus multicollector-ICP-MS: coexistence or struggle
for survival? Anal. Bioanal. Chem. (2004) 378 : 229–231.
Taylor, H. Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry. Academic
Press. 2001. ovega@ipen.br
www.vegascience.blogspot.com.br
Moraes, N.M.P. Aplicação e avalição da técnica de diluição isotópica por
espectrometria de massas na determinação de elementos de Terras Raras em
materiais geológicos. Tese IPEN 1988.
*Oscar Vega Bustillos
Pesquisador do Centro de Química e Meio Ambiente CQMA do Instituto de

Análise de Minerais
44
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
Erros Sistemáticos em Sistemas de Medição
As incertezas de um sistema de
medição podem ser divididas em
dois componentes básicos: um
componente aleatório e outro sistemático.
O componente aleatório,
comumente chamado de erro, no
caso das análises minerais está
diretamente relacionado às características
intrínsecas dos minérios
submetidos à análise e não apenas
ao sistema de medição utilizado.
Isto ocorre independentemente das
técnicas amostrais ou analíticas estão
sendo utilizadas no processo de
determinação.
Já o componente sistemático,
também conhecido como vício ou
viés, está diretamente relacionado
ao sistema de medição, variando
de acordo com o minério que está
sendo amostrado ou analisado naquele
sistema. Ou seja, este vício
é a resultante do somatório da interação
dos efeitos dos elementos
sistema de medição e do minério. A
alteração de um minério em um determinado
sistema pode resultar em
um vício maior, menor ou ausente
quando comparado a outro mineral.
Mas, invariavelmente um erro sistemático
é sempre provocado pelo
projeto, modelo construtivo, ajustes
ou modelo operacional definido para
o sistema de medição.
Para uma amostra ser representativa
do todo é preciso que todas as
partículas tenham as mesmas chances
de serem amostradas. Podemos
extrapolar, de forma inequívoca,
esta definição para as mais diversas
etapas do processo analítico. Assim,
o erro sistemático pode ocorrer em
qualquer etapa: amostragem, preparação
da amostra para ensaios ou
análises e ensaios.
Esta falta de oportunidade de uma
partícula ser amostrada pode ocorrer
por uma infinidade de motivos,
como por exemplo, pelo volume
de produção da indústria mineral o
sistema de amostragem pode ser
incapaz de transpassar o fluxo e
coletar uma porção proporcional do
mesmo, ou porque durante a etapa
de preparação de amostras existe a
perda de um material extremamente
fino que constitui a amostra do minério
em análise.
Outro ponto fundamental para a
inserção de erros sistemáticos nos
sistemas de medição vem de um
importante conceito preconizado
pela ISO 9001:2015:
“Quando a rastreabilidade de
medição for um requisito, ou for
considerada pela organização parte
essencial da provisão da confiança
na validade de resultados de medição,
os equipamentos de medição
devem ser:
a) verificados ou calibrados, ou
ambos, a intervalos especificados,
ou antes do uso, contra padrões de
medição rastreáveis a padrões de
medição internacionais ou nacionais.”
Este ponto é capital, pois frente a
necessidade de redução de custos,
aumento de produtividade dos empregados
e equipamentos e a entrega
de resultados em prazos cada
vez mais curtos, os laboratórios se
preocuparam apenas em calibrar
seus equipamentos periodicamente,
em especial, balanças. Porém, entre
duas calibrações, muitos eventos
podem acontecer e os equipamentos
de medição podem não mais se
encontrar nas condições ideais pós
calibração. A verificação periódica
irá identificar o momento em que o
distúrbio ocorreu e, impedir que o
sistema de medição apresente vício
em seus resultados.
Em colunas anteriores já dissemos
a importância do uso de padrões de
qualidade, importantes aliados na
eliminação ou redução de vícios dos
equipamentos analíticos, como, espectrômetros,
tituladores, colorímetros,
entre outros. Os padrões que
permitirão o adequado ajuste destes
equipamentos, garantindo uma boa
acurácia dos resultados.
Outro elemento importante é o
operador, que muitas vezes tem
sua importância minimizada, em
especial em tempos de automação
dos processos analíticos, sendo um
potencial causador de erros sistemáticos.
Divergências operacionais
entre dois empregados, seja na for-
ma de calibrar e verificar um equipamento
ou no modo como interpreta
um determinado indicador de
qualidade, pode levar a sérios erros
operacionais sistemáticos de difícil
identificação. Assim, uma equipe
bem treinada é crucial, uma das
formas é através da construção de
fóruns, onde operadores compartilham
experiências e técnicas.
Estes são os erros sistemáticos
mais comuns que se pode ter nas
análises minerais e em um processo
de medição em geral. A redução
dos erros sistemáticos para níveis
aceitáveis para o cliente é uma obrigação
dos laboratórios de análises
minerais, uma vez que é a partir dos
resultados mensurados nestes que
se tem a valoração de reservas minerais,
a definição de valores para
comércio entre partes e ajustes de
qualidade de produtos comercializados.
Claro que reduzir ou eliminar
este vício tem um preço e que, por
óbvio, é menor do que a falta de
confiança nos resultados emitidos.
Eduardo Pimenta de Almeida Melo
é Engenheiro Químico,
Gerente de Laboratórios da CSN Mineração,
MBA em Gestão Empresarial,
Pós–Graduado em Gestão de Laboratórios e
Especializado em Data Science.
Coordenador da Comissão de Estudos para
Amostragem e Preparação de Amostras em
Minério de Ferro para a ABNT – Associação
Brasileira de Normas Técnicas.
LinkedIn: https://br.linkedin.com/in/eduardo-
-melo-16b22722
Telefone: 31 3749 1516
E-mail: eduardo.melo@csn.com.br

Promovendo a sinergia entre
a VIDA e a CIÊNCIA.
Sinônimo de qualidade, confiabilidade e credibilidade, a Bio Scie
representa marcas líderes de mercado, respaldada por uma equipe
técnica de profissionais altamente qualificados. Especializada na
importação e distribuição de produtos para laboratório, investe
constantemente na melhoria de seus processos para atender às
necessidades de seus clientes.
Com estoque local que flexibiliza seu atendimento e garante agilidade
e eficiência no cumprimento das legislações vigentes, a Bio Scie se
adapta às mudanças do mercado consolidando parcerias baseadas
em relações sólidas e duradouras.

Microbiologia
46
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
Aspectos microbiológicos do estudo de
estabilidade de produtos farmacêuticos
Por Claudio K. Hirai*
De acordo com as normas vigentes,
os estudos de estabilidade de
medicamentos devem ser realizados
sob diversas condições de temperatura
e umidade. A incubação dos produtos
em diferentes temperaturas e
condições de umidade tem o objetivo
de verificar a estabilidade do produto
nas diversas regiões do pais.
Sabe-se que Anvisa, através da RE
nº 1 de 2005, normatizou a realização
dos estudos de estabilidade de
produtos farmacêuticos com o objetivo
de determinar e acompanhar o
seu prazo de validade.
A regulamentação atual sobre o
tema está dividida em quatro normas
diferentes, além de existirem
diversas recomendações em outros
documentos da Anvisa, prejudicando
a compreensão dos critérios. Os
regulamentos não têm abrangência
total sobre o tema e falta clareza
sobre os requisitos para estudos de
estabilidade, o que motiva interpretações
subjetivas.
Os estudos de estabilidade de longa
duração levam 2 anos ou mais,
enquanto os estudos acelerados
levam cerca de 6 meses. Considerando
o investimento de tempo e de
recursos, é necessário que as empresas
que desenvolvem medicamentos
tenham certeza sobre a validade dos
estudos para análise pela Anvisa.
A revisão das regras também faz
parte do processo de aceitação da
Anvisa no International Conference
on Harmonisation (ICH), um
conselho internacional dedicado à
harmonização dos requisitos técnicos
para medicamentos humanos.
Em dezembro de 2017, foi publicada
a consulta pública nº 453 que
altera a RE nº 1 e atualiza os critérios
para a realização de estudos de estabilidade
de insumos farmacêuticos
ativos e medicamentos, exceto biológicos.
Com a conclusão desta fase inicial, aguarda-se a publicação da nova
norma.
Assim, nesta edição da revista Analytica, focaremos nos aspectos microbiológicos
dos medicamentos estéreis e não estéreis, com um foco concentrado
no último.
Em primeiro lugar, a estabilidade dos produtos não estéreis deve considerar a
carga microbiana dos excipientes, matérias primas ativas (ifas) e as condições
ambientais de fabricação. Tal informação pode ser obtida na 5º edição da Farmacopeia
Brasileira, manual produzido pela Anvisa, na qual informa os limites
microbianos.
A contaminação microbiana de um produto não estéril (especialidade e matéria-prima
farmacêutica) pode conduzir não somente à sua deterioração, com
as mudanças físicas e químicas associadas, mas também ao risco de infecção
para o usuário. Consequentemente, os produtos farmacêuticos orais e tópicos
(cápsulas, comprimidos, suspensões, cremes, etc.) que não são estéreis devem
ser submetidos aos controles da contaminação microbiana.
A garantia de qualidade e os controles de produção devem preconizar que os
micro-organismos capazes de proliferar e contaminar o produto estejam dentro
dos limites aceitáveis. Os limites microbianos devem ser adequados às várias
categorias de produtos que reflitam o tipo de contaminação mais provável introduzida
durante a fabricação, bem como a via de administração, o consumidor
final (neonatos, crianças, idosos, debilitados), o uso de agentes imunossupressores,
corticosteroides e outros fatores. Ao avaliar os resultados dos testes microbiológicos,
o número e os tipos de micro-organismos presentes devem ser
considerados no contexto do uso do produto proposto.
O teste microbiológico de produtos não estéreis e de matéria-prima para uso
farmacêutico é realizado segundo a metodologia descrita em ensaios microbiológicos
para produtos não estéreis, também descrito pela Farmacopeia Brasileira.
Além da descrição metodológica dos ensaios, o manual também oferece os
limites de aceitação, interpretados do seguinte modo:
- 10 1 UFC: valor máximo aceitável = 20
- 10 2 UFC: valor máximo aceitável = 200
- 10 3 UFC: valor máximo aceitável = 2000 e, assim sucessivamente.
Entretanto, há um grande questionamento quanto aos valores máximos
aceitáveis, quando desenvolvemos uma formulação de um comprimido, por
exemplo, devemos considerar a qualidade microbiológica dos excipientes, das
matérias primas ativas e das condições de fabricação. Assim, é inaceitável em
um estudo de estabilidade no qual dados iniciais apresentam um limite de 102
UFC, que seja aceito uma contagem de 200 UFC ou mais.
A repetição dos valores máximos aceitáveis devem ser objeto de uma reavaliação
da formulação e das condições de fabricação, portanto a especificação
final do produto não pode ser relacionada aos valores máximos aceitáveis.
Desta maneira, o valor máximo aceitável não deve fazer parte da especificação
de liberação final do produto. Valores acima da especificação devem ser
objeto de uma investigação pela Garantia de Qualidade.
Os produtos de uso múltiplo devem ser protegidos contra a contaminação microbiana
por meio da adição de conservantes. O ensaio do desafio microbiano
de conservantes deve ser realizado para todas formulações, antes do início dos

estudos de estabilidade, uma vez que
o produto pode estar contaminado
com: Candida albicans ATCC 10231;
Aspergillus niger ATCC 16404; Escherichia
coli ATCC 8739; Pseudomonas
aeruginosa ATCC 9027; e
Staphylococcus aureus ATCC 6538.
A quantidade de conservante utilizada
em uma formulação deverá
ser a mínima necessária para a proteção
do produto sem prejudicar o
paciente ou consumidor. A eficácia
antimicrobiana, seja ela inerente ao
produto ou devida à adição de conservantes,
precisa ser demonstrada
para produtos tópicos múltipla-
-dose, produtos orais, oftálmicos,
otológicos, nasais, fluidos de diálise,
irrigação, entre outros.
Com relação aos produtos estéreis,
os mesmos devem atender a
especificação, sendo que o ensaio
deve ser realizado no início e no final
do estudo de estabilidade.
Bibliografia:
BRASIL, Ministério da Saúde. Agência Nacional
de Vigilância Sanitária. Farmacopeia Brasileira. 5ª
Ed. Brasília, 2010. (pag 59 – 207).
*Claudio Kiyoshi Hirai
Gerente Técnico Biolab
É farmacêutico bioquímico, diretor científico da BCQ
consultoria e qualidade, membro da American Society
of Microbiology e membro do CTT de microbiologia da
Farmacopeia Brasileira.
Telefones: 55 11 3573-2905 55 11 3573-6812
chirai@biolabfarma.com.br www.biolabfarma.com.br
BRASIL, Ministério da Saúde. Agência Nacional
de Vigilância Sanitária. Resolução nº 1 Anvisa de
29/07/2005 - Guia para a Realização de Estudos
de Estabilidade.
BRASIL, Ministério da Saúde. Agência Nacional
de Vigilância Sanitária. Consulta Pública nº 453 de
28/12/2017 - Critérios para a Realização de Estudos
de Estabilidade de insumos farmacêuticos ativos
e medicamentos, exceto biológicos, e dá outras
providências.
Serviços técnicos Sartorius
seu equipamento sempre em sua melhor performance
Visite-nos na
FCE Pharma
Stand B106
A equipe de Serviços da Sartorius do Brasil sabe
que um equipamento parado causa transtornos e
paradas em sua produção.
Oferecemos a você serviços de manutenção
preventiva e corretiva, contratos de manutenção
e calibração em nosso laboratório certificado pelo
Inmetro para Calibração RBC de balanças até 1500
KG e pipetas de 1uL a 10000µL.
Entre em contato conosco e saiba mais.
Sartorius do Brasil Ltda
Tel.: 11 4362-8911| E-mail: at.br@sartorius.com

Informe Científico
Filtros Integrados
Quando escolher Ultrafiltração ou
Microfiltração?
Autores:
João Paulo dos Santos1,
Lucas Pedrosa Souto Maior2,
Eliane Costa Souza3,
Tatiana Almeida Omura de Paula4,
Lúcia Helena Ferreira Santos5,
Karwhory Wallas Lins da Silva6,
Yáskara Veruska Ribeiro Barros7,
Velber Xavier Nascimento8,
Alessandra Valério de Almeida Guedes9
Filtração é o processo de separação utilizado em sistemas de purificação de água, como uma barreira
física para eliminar contaminantes, tais como partículas e microrganismos, que possam reagir com as
amostras e causar efeitos negativos em aplicações laboratoriais específicas. A grande diferença entre os
dois sistemas de filtração integrado utilizados no PURELAB Chorus, são os tipos e tamanhos dos contaminantes
que podem ser removidos.
Como funciona a
filtração?
Ambos, microfiltração e ultrafiltração, utilizam membranas como uma
barreira física para retenção de partículas. Estes sistemas permitem a filtração
em baixa pressão, entretanto, se houver um bloqueio, então o gradiente
de pressão irá aumentar, e irá forçar o permeado a passar pelos poros das
membranas. Em aplicações que o PURELAB Chorus é utilizado, os cartuchos
de microfiltração ou ultrafiltração são utilizados após a Osmose Resversa
(OR), que remove efetivamente a maioria das partículas. Isto significa
que a filtração atua como a última etapa do sistema, removendo qualquer
partícula que, por ventura, não foi removida no filtro de pré-tratamento ou
na fase de Osmose Reversa (OR) ou ainda no caso improvável de quantidades
vestigiais de bactérias se proliferando no interior do reservatório.
Microfiltração?
O sistema de microfiltração (MF) é desenhado para remoção e retenção
de todas as partículas maiores que o tamanho controlado do poro da superfície
da membrana: tipicamente entre 0,05 e 0,2µm. Estes filtros, geralmente
são utilizados e posicionados o mais próximo possível do ponto
de uso do sistema, e funciona como uma “peneira”, retendo partículas e
bactérias com tamanho maior que 0,2 µm.
48
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
A importância em
Aplicações Analíticas
A microfiltração é particularmente
muito utilizada para aplicações
analíticas, como por exemplo a
preparação da fase móvel para Cromatografia
Líquida de Alta Eficiência
(CLAE) ou High Performance Liquid
Cromatography (HPLC). Podendo
remover moléculas orgânicas (como
por exemplo, pesticidas, herbicidas
ou vestígios de tecido vegetal ou
animal), bactérias (< 0,1UFC/ml) e
particulados (

Ultrafiltração
A ultrafiltração (UF) não é muito diferente da microfiltração, a não ser o
tamanho das partículas que podem ser removidas. Partículas tão pequenas
quanto proteínas e macromoléculas são removidas pela membrana, que
geralmente, é composta por fibras na forma de “tubos ocos” para aumentar
o fluxo de água. O tamanho do poro da membrana, tipicamente está entre
0,001 e 0,1µm. A água pode passar pela membrana de duas formas:
1. Toda a água passa diretamente pela
membrana (“dead-ended”);
2. Uma porção da água passa pela
superfície da membrana em
“cross-flow” (fluxo tangencial).
O benefício deste modelo é a
possibilidade de reduzir o acúmulo
de contaminantes através da
rinsagem do transportado pela água;
Filtração Integrada
(Interna) x Filtro de
Ponto de Uso
O PURELAB Chorus fornece
sistemas com ultrafiltração ou
microfiltração integrados aos sistemas.
Estes sistemas integrados
permitem uma maior efetividade
da filtração, combinando tecnologias
como Osmose Reversa, Troca
Iônica, Lâmpada UV. Sanitização
Química e Micro ou Ultrafiltração
para fornecer água ultrapura, não
dependendo apenas de um único
filtro de ponto de uso. O principal
benefício em relação aos filtros típicos
de ponto de uso (POU) é que
os níveis de bactérias ou endotoxinas
na água ultrapurificada ainda
podem ser garantidos pela filtração
antes da utilização. Como segurança
extra e tranquilidade, filtros de
ponto de uso podem ser adicionados,
também, aos dispensadores.
A importância em Aplicações Life Science
A microfiltração é particularmente muito utilizada para aplicações Life
Science, como por exemplo para Reação em Cadeia da Polimerase ou Polymerase
Chain Reaction (PCR). Promovendo a remoção de nucleases (RNase
/ DNase), endotoxinas bacterianas e pirogênios, compostos orgânicos
(como por exemplo, pesticidas, herbicidas ou vestígios de tecido vegetal ou
animal), bactérias (< 0,1UFC/ml) e particulados (

Em Foco
Fritsch e Altmann, uma nova parceria.
Há 84 anos no mercado de instrumentação
analítica, a Altmann sempre
busca novos desafios e prima
pela qualidade dos equipamentos
oferecidos aos seus clientes.
Representante de renomadas
marcas, muitas exclusivas, agregou
recentemente mais uma para seu
time: FRITSCH, fabricante líder mundial
em equipamentos para moagem,
preparação de amostra e peneiramento.
Possui uma linha de equipamentos
composta por diversas técnicas
de moagem (esferas, facas, rotores,
mandíbulas, discos, almofariz) que
se adequam para cada preparação,
volume de amostra e tipo de material,
obtendo resultados rápidos, com alto
rendimento e reprodutíveis.
Com uma gama de peneiras e
acessórios, os peneiradores da linha
são robustos e atendem a demanda
para peneiramentos via úmida e
seca, além de software de avaliação
incluído no fornecimento para uso
sem custos durante 90 dias.
Para completar a linha, oferece
equipamentos para divisão, dosagem
e limpeza ultrassônica, otimizando o
tempo na preparação e resultando
trabalho ainda mais eficiente.
A equipe de vendas e assistência
técnica da Altmann está preparada e
à disposição para fornecer todas as
informações e serviços.
Saiba mais em nosso site:
www.altmann.com.br
Serviços Sartorius – seu equipamento sempre em sua melhor performance
50
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
Confie em nossa
expertise para atingir
a performance máxima
do seu equipamento.
Calibração de pipetas
Calibração de balança
A equipe de Serviços da Sartorius
do Brasil está pronta para ajudar
aos clientes a atingir a melhor
performance de seus equipamentos.
Contamos com um time de
técnicos altamente qualificados e
material de primeira linha para que
os serviços sejam realizados sempre
com excelência.
Além de ações de manutenção
corretiva/ preventiva, a Sartorius
oferece serviços de IQ| OQ para
todos os equipamentos de seu portfólio.
Outra grande vantagem são
os contratos de manutenção pois
estes se adequam as necessidades
específicas de cada cliente e
garantem uma resposta mais ágil
aos chamados.
Outro importante serviço é Calibração
RBC de balanças até 1500
KG e pipetas de 1uL a 10000µL,
que quando realizadas em conjunto
com a manutenção preventiva,
mantem a precisão dos equipamentos.
Esta calibração também
pode ser executada em balanças
e pipetas que não são da marca
Sartorius.
A calibração RBC de balanças
deve ser realizada no local de operação
do equipamento pois sofre
influência das condições do ambiente.
No caso das pipetas, este
serviço é realizado em um laboratório
dedicado para este fim na
sede da Sartorius do Brasil.
Para saber mais,
entre em contato:
Sartorius do Brasil Ltda
Telefone 11 4362-8911
E-mail: at.br@sartorius.com

15ª Feira Internacional de Tecnologia para Laboratoríos, Análises,
Biotecnologia e Controle de Qualidade
24-26
SET.
2019
13h às 21h
SÃO PAULO EXPO
A Analitica Latin America é um dos principais pontos de
encontro mundiais da química analítica.
A feira proporciona uma plataforma completa que
possibilita a geração de negócios para expositores e visitantes.
de 7.500 visitantes qualificados
+ de 500 marcas expositores
Presença de 22 países
A Feira possui todas as novas tecnologias e
setores que atuam na cadeia da química:
Automação
de processos
Biotecnologia
Controle de
contaminação
Equipamentos
laboratoriais
Gases para
laboratório
Instrumentos
laboratoriais
Produtos e
reagentes químicos
Serviços
Software
Mobiliário
para laboratório
CATALISANDO RESULTADOS
EM DIFERENTES SEGMENTOS
DA INDÚSTRIA
Mais informações:
Organização e Promoção
www.analiticanet.com.br
Eventos Paralelos
+55 11 3205-5075 | analitica@nm-brasil.com.br
Apoio
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
Local
51

Em Foco
Soluções para o cultivo de células e tecidos
Placas e microplacas da Greiner Bio-One oferecem qualidade e versatilidade.
Um dos processos mais requisitados
no dia a dia dos laboratórios,
a cultura de células e tecidos é de
suma importância para aplicações
em diversos campos, contribuindo
desde o uso para a fabricação de
vacinas, pesquisas relacionadas
a doenças como o câncer, desenvolvimento
e testes pré-clínicos de
medicamentos, até terapia utilizando
células-tronco. Com todas estas
aplicações, é um processo que
necessita atender a diversas variáveis,
como o tipo de células que
estão sendo cultivadas, a escala
das culturas, finalidade da análise
e até mesmo o espaço físico disponível
para receber estas demandas
e, por isso, soluções versáteis e
com alto padrão de qualidade são
essenciais para facilitar e agilizar
as rotinas com os melhores resultados.
Por isso, a Greiner Bio-One
oferece uma variedade de placas
para a cultura de células para as
mais diversas finalidades. Entre os
destaques estão as inovações das
linhas CELLSTAR® e Advanced
TC oferecidas em diferentes tamanhos
e tipos de superfícies.
Para o cultivo de células aderentes,
as placas e microplacas
CELLSTAR® TC são fisicamente
modificadas por meio da inserção
de grupos polares no plástico, o
que torna a superfície hidrofílica
para otimizar a adesão celular. Enquanto
para células aderentes mais
sensíveis, o tratamento inovador da
superfície dos produtos Advanced
TC proporciona um ambiente
excelente para o cultivo celular em
condições de ausência ou redução
de soro, células primárias raras,
células transfectadas ou transduzidas.
Ambos os produtos estão
disponíveis em placas de 35 a 145
mm de diâmetro e microplacas de
6 a 1536 poços.
No cultivo de células não aderentes,
a CELLSTAR® Suspensão
oferece a superfície hidrofóbica,
indicada para o cultivo de células
que não necessitam de ancoragem
para se proliferar e sobreviver,
como células de origem hematopoética.
Há também a linha “Cell-repellent”,
uma tecnologia exclusiva
da Greiner que evita efetivamente
a adesão celular, muito utilizada
no cultivo de células em 3D, é indicada
para processos em que as
superfícies hidrofóbicas convencionais
não são suficientes para
impedir a adesão. As placas estão
disponíveis de 35 a 145 mm de diâmetro
e microplacas de 6 a 384
poços.
Os produtos apresentam o alto
nível de qualidade da Greiner Bio-
-One, já reconhecido no mercado,
e estão em conformidade com as
normas do Instituto Nacional Padrão
Americano (ANSI) para microplacas.
Para saber mais sobre estes e
outros produtos, entre em contato
pelo e-mail: info@br.gbo.com.
Analisadores de Carbono Orgânico Total (COT) Sievers®
52
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
Desempenho analítico, confiabilidade
e facilidade de uso incomparáveis
Como fabricante líder mundial de
analisadores e instrumentos analíticos
de COT, fornecemos tecnologia,
design, e qualidade superiores.
Os analisadores de COT da Sievers
cobrem um intervalo analítico dinâmico
de 0,03 ppb até 50.000 ppm
e fornecem soluções em diversos
setores e aplicações.
Sievers M9 Laboratório,
Portátil e On-line
Meça o COT mais precisamente
e maximize a produtividade
O Sievers M9 fornece dados
estáveis e precisos para monitoramento
de água ultrapura (UPW) e
farmacêutica, validação de limpeza
e outras aplicações. Com a tecnologia
de membrana condutométrica
Sievers, os analisadores M9 fornecem
desempenho analítico incomparável,
confiabilidade e facilidade
de uso. Recursos exclusivos, como
o teste simultâneo de condutivida-

your power for health
VISITE-NOS NA 48ª SBBQ!
De 14 a 17/05, no Centro de Convenções
do Hotel Majestic – Águas de Lindóia/SP.
Estandes 19, 20 e 21.
Cultura celular
Inovação e tecnologia ao seu alcance
A variedade de superfícies das placas e microplacas da Greiner
Bio-One oferecem qualidade e versatilidade na cultura de células
para as mais diversas finalidades.
A linha CELLSTAR ® TC oferece opções de superfície
hidrofílica para otimizar a adesão celular.
Os produtos Advanced TC são excelentes para o cultivo
celular em condições de ausência ou redução de soro,
células primárias raras, células transfectadas ou
transduzidas.
A CELLSTAR ® Suspensão oferece superfície hidrofóbica
para cultivo de células que não necessitam de ancoragem
para se proliferar e sobreviver.
A nossa tecnologia exclusiva “Cell-repellent” é indicada para
processos em que as superfícies hidrofóbicas convencionais
não são suficientes para impedir a adesão como, por
exemplo, para a realização de Cultura de Células em 3D.
Greiner Bio-One Brasil | Avenida Affonso Pansan, 1967 | CEP 13473-620 | Americana | SP
Tel: +55 (19) 3468-9600 | Fax: +55 (19) 3468-3601 | E-mail: info@br.gbo.com
www.gbo.com/bioscience

Em Foco
de Estágio 1 e COT. Nossa tecnologia
ajuda os clientes a aumentar
a eficiência e manter a conformidade,
principalmente em setores
como o de produtos farmacêuticos
e microeletrônicos.
Sievers 500 RL On-line
Cumpra os regulamentos e melhore
o controle do processo com
o monitoramento on-line preciso e
estável da UPW
O Sievers 500RL fornece a estabilidade
e a precisão, particularmente
para aplicações farmacêuticas.
Com operações variando
de 0,03 ppb até 2,5 ppm, esses
analisadores oferecem o menor
limite de detecção para analisadores
UPW on-line de COT sem
reagentes. Conformidade com a
USP e outras farmacopeias
internacionais e pode ser fornecido
com os protocolos críticos necessários
para a validação do processo
de teste em tempo real (RTT) e
conformidade com a 21 CFR Parte
11. O 500 RL usa a tecnologia de
membrana condutométrica Sievers
para fornecer precisão e confiabilidade,
sem leituras de falso positivo
e falso negativo associadas a outras
tecnologias de COT simplificadas.
Sievers 860 Laboratório
Excelente desempenho analítico
com um conjunto de recursos simplificado
Foi criado para testes gerais de
água farmacêutica, inclusive água
para injeção (WFI) e água purificada
(PW) e está em conformidade
com os principais requisitos
da farmacopeia global. Com um
intervalo linear de 0,3 ppb a 1,5
ppm, o 860 Lab utiliza a tecnologia
comprovada de membrana condutométrica
Sievers e oferece uma
alternativa mais robusta ao método
de condutividade direta. O 860
Lab é fácil de configurar, operar e
pode ser usado com o amostrador
automático RT12 para aumentar a
produtividade.
Padrões e vials Sievers
Minimize os riscos e elimine as
variáveis com vials e padrões certificados
Ao medir o COT é importante minimizar
os riscos de contaminação
e eliminar as variáveis de teste em
todas as análises.
• Padrões Sievers: de precisão,
de calibração, de verificação,
de condutividade, conjuntos de linearidade
e mais.
• Vials Sievers incluem:
vials certificados de baixo COT
(

HÁ 25 ANOS
CELEBRANDO
GRANDES
NEGÓCIOS.
25ª EDIÇÃO
01 - 03
junho
20
20
fcepharma.com.br

Em Foco
Grupo Polar inova mais uma vez e lança linha SafePack com o Polar PCM,
solução que elimina potencial risco de excursão de temperatura
Novas tecnologias, que serão apresentadas na 24 ª FCE Pharma, foram desenvolvidas para manter e
garantir estabilidade sob temperaturas extremas por muito mais tempo
56
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
O Grupo Polar, líder na fabricação
de elementos térmicos, desenvolveu
tecnologias exclusivas
para atender as novas exigências
regulatórias do mercado farmacêutico:
a linha SafePack com o Polar
PCM (Phase Change Material). As
novidades serão apresentadas durante
a FCE Pharma, maior feira da
indústria farmacêutica na América
Latina, entre os dias 21 a 23 de
maio no São Paulo Expo, em São
Paulo.
“Os PCMs são estudados há
mais de uma década em diversas
aplicações com o intuito de reduzir
o consumo de energia e melhorar
a qualidade de algumas aplicações
especificas, como o transporte de
produtos com temperatura controlada.
A Polar trouxe essa novidade
juntamente com a linha SafePack,
diversificando a gama de produtos
e os tipos de isolamento disponíveis
no mercado, como por exemplo
o VIP, que apresenta o melhor
isolamento térmico do mercado nacional
e internacional”, explica Anderson
Fernandes, engenheiro de
desenvolvimento do Grupo Polar.
Disponíveis em três versões “SafePack
Tec, SafePack Max e SafePack
Vip”, foram desenvolvidas
pela Polar Técnica e seguem os
parâmetros do Guia Anvisa para a
Qualificação de Transporte de Produtos
Biológicos, 2ª Edição (2017).
Elas serão comercializadas junto
com o Polar PCM, respeitando o
conceito de química verde, e mantendo
a faixa de temperatura, sejam
elas 2°C a 8°C, 15°C a 25°C
ou negativo.
Conheça a Linha SafePack
SafePack VIP:
Os painéis são fabricados por
meio de um material termicamente
não condutor, embalado a vácuo
e envolto por camadas de filme
especial impermeável. O vácuo
presente nos painéis, mitiga a variação
de temperatura, inibindo assim
a transferência de calor entre o
sistema passivo de transporte e o
exterior. Além disso, possui o melhor
isolante térmico atualmente no
mercado, é reutilizável, e garante
maior tempo de transporte seguro,
aumentando a confiabilidade
aos processos de manutenção da
temperatura para produtos termolábeis.
As placas POLAR VIP, que ficam
na parte interna da caixa, não
contêm asbestos (amianto), utilizando
materiais seguros e aprovados
pelas legislações ambientais.
SafePack Max:
Utiliza como isolante térmico
um plástico rígido de poliestireno
extrudado, chamado XPS, que possui
altíssima resistência mecânica.
Material com baixíssima absorção
de água ou vapor, sua estrutura
celular fechada e homogênea garante
excelentes características de
isolamento térmico e resistência
mecânica, tornando o tempo de
vida útil muito maior que o EPS.
Disponível com revestimento externo
em papelão corrugado branco
ou poliondas.
SafePack Tec:
É feita em EPS (Poliestireno Expandido)
para isolamento térmico,
uma ótima opção, por ser um material
altamente versátil. As possibilidades
de trabalho com o EPS são
diversas devido aos nossos modelos
exclusivos em parede tripla. A
SafePack Tec trabalha com caixas
de alta densidade garantindo um
melhor isolamento térmico para
o sistema passivo de transporte.
Sistema de alta confiabilidade,
propiciando uma excelente relação
custo x benefício para o transporte
de seus produtos.
24 ª edição da FCE Pharma
Data: 21 a 23 de maio de 2019
Horário: 11h às 19h
Estande E-107
Local: São Paulo Expo
Endereço: Rodovia dos Imigrantes,
KM 1,5 – São Paulo

A qualidade necessária
com a agilidade
desejada!
Laboratório Habilitado pela ANVISA desde 2004
Centro Analítico Reblas 131.
Certificado de Acreditação CRL 1117.
Centro de Estudos de Equivalência Farmacêutica -
EQFAR048
Centro Analítico de Análises e Estudos MAPA -
Licença SP-000545-2
Analítica Analises Fisico-químicas e
Microbiológicas Ltda.
R. Giovanni Batista Raffo nº 120 - Bairro Raffo
Suzano - São Paulo - CEP 08653-005
Fones +55 (11) 4747-7485
analitica@analiticalab.com.br
www.analiticalab.com.br

Em Foco
A importância da qualidade na logística
Para falarmos sobre a importância da qualidade na logística, precisamos falar sobre a importância do
sistema de gestão da qualidade.
58
REVISTA ANALYTICA - ABR/MAI 19
A principal atividade do sistema
de gestão da qualidade é gerar melhorias
em seus produtos e serviços,
garantindo a completa satisfação
dos clientes e superando suas
expectativas.
A NBR ISO 9001, é uma das
principais referências de qualidade
para as empresas por orientar as
empresas a focar seu trabalho na
satisfação do cliente, na melhoria
constante e no gerenciamento do
processo.
A atuação do farmacêutico é
fundamental para que a empresa
consiga atingir uma alta qualidade
na prestação do serviço, com a realização
de treinamentos aos colaboradores,
qualificação de fornecedores
e agentes de carga, controle
de higiene e limpeza do local e dos
veículos, controle de pragas e vetores,
controle de temperatura e
umidade do estoque e dos veículos,
compatibilidade de cargas, garantindo
a chegada ao usuário final, de
produtos íntegros e com qualidade
assegurada.
A empresa deve dispor de uma
boa infraestrutura para a guarda e
armazenamento dos produtos, com
área construída adequada que permita
o monitoramento de temperatura
e a conservação dos produtos,
fatores relacionados diretamente
é qualidade dos medicamentos e
produtos para a saúde.
A empresa deve cumprir as legislações
vigentes para a distribuição
e transporte de produtos farmacêuticos,
cosméticos e produtos para
a saúde conforme determinação
da ANVISA, órgãos certificadores e
vigilâncias sanitárias do município
onde atua.
A vontade da direção da empresa
em desenvolver um planejamento
a curto, médio e longo
prazo, e o comprometimento dos
seus gestores é fundamental para
a implementação do SGS.
Para aplicar a gestão da qualidade
nos processos logísticos é necessário
que os gestores entendam
a necessidade de aprimorar os
procedimentos de armazenagem e
transporte, a necessidade de qualificar
a mão de obra, a implantação
dos indicadores de desempenho
que possibilitam validar a execução
das tarefas e assegurar que estejam
sendo cumpridas, possibilitando
a tomada de decisões estratégicas
e assertivas, a eficiência na
gestão de estoque a fim de evitar
processos ineficientes que geram
desperdícios e prejuízos, o registro
das informações permite que haja
eficiência e agilidade na execução
das atividades.
Com o sistema de gestão da
qualidade implementado, com a
atuação direta do farmacêutico,
com mão de obra qualificada e com
o comprometimento dos gestores é
possível garantir as boas práticas
de armazenagem e distribuição de
produtos farmacêuticos, cosméticos
e produtos para a saúde.
Tâmisa Da Silva Barbosa
Farmacêutica/Coordenadora de
Qualidade

Em Foco
Grupo APS Brasil
REPRESENTADAS
THE INERTSIL COLUMNS' FAMILY
24ª edição
EXPOSIÇÃO INTERNACIONAL DE TECNOLOGIA
PARA A INDÚSTRIA FARMACÊUTICA
visite nosso estande B075
Mantenedores
Academia de Ciências Farmacêuticas do Brasil