Analiza Chimica si Instrumentala Aplicata - AcademicDirect

Lorentz JÄNTSCHI, Sorana BOLBOACĂ
18. Se foloseşte o lampă UV pentru a citi deplasările pentru fiecare probă de pe gelul G1; se notează
aceste deplasări într-un tabel de forma:
Deplasări în câmp electric ale aminoacizilor esenţiali
Gelul Proba
P1/P1
P2/P2
P3/P3
P4/P4
P5/P5
Deplasări faţă de punctul iniţial (mm)
G1/G2 P6/P6
P7/P7
P8/P8
P9/P9
P10/P10
P11/P11
19. Se foloseşte o lampă UV pentru a citi deplasările pentru fiecare probă de pe gelul G2; se notează
aceste deplasări în acelaşi tabel;
20. Se interpretează rezultatele.
Etapele separării în electroforeza pe hârtie
1. Se fixează benzile de hârtie în camera cromatografică;
2. Se impregnează fiecare bandă cu tamponul de electroforeză şi se fixează orizontal (prin
adeziune de rame) astfel ca cel puţin 1 cm din cele două capete să fie în soluţia tampon;
3. Se efectuează preelectroforeza pentru echilibrarea sistemului:
3.1. Se conectează redresorul la sursa de tensiune, se fixează amperajul la 0.2 mA/cm de lăţime;
3.2. Se lasă în funcţiune timp de 30 min.;
3.3. Se întrerupe curentul electric;
4. Se aplică proba:
4.1. Se aplică 5-10 µl ser sub forma unei benzi;
4.2. Se aşteaptă 10 min.;
5. Se efectuează migrarea electroforetică:
5.1. Se stabileşte legătura la sursa de curent;
5.2. Pentru migrare rapidă (4-5 ore) se reglează tensiunea la borne de 320-350 V şi amperajul la
0.3-0.5 mA/ cm de lăţime de bandă;
5.3. Se deconectează sursa de tensiune.
6. Se efectuează determinările:
6.1. Se scot benzile de hârtie din camera cromatografică;
6.2. Se pun în etuvă la 100ºC timp de 10-15 min. pentru uscare;
6.3. Se introduc în soluţia de colorare timp de 15 min.;
6.4. Se îndepărtează excesul de colorant prin trecerea proteinogramei prin 3 băi de spălare
(până la decolorarea benzii);
6.5. Se tamponează cu hârtie de filtru uscată;
6.6. Se introduc în etuvă la 80ºC timp de 10-15 min.;
6.7. Se pregătesc 5 eprubete;
6.8. Se decupează fiecare bandă începând cu banda corespunzătoare albuminei;
6.9. Se mărunţeşte fiecare bandă şi se introduce în eprubeta corespunzătoare;
6.10. Se pipetează în fiecare eprubetă câte 5 ml soluţie de eluare;
6.11. Se agită energic;
6.12. Pentru o bună eluare se lasă 30 min.;
6.13. Se citeşte extincţia fiecărei fracţiuni faţă de apă distilată la λ = 590 nm folosind un
spectrofotometru;
59