Laboratoriekursus Biologi B-niveau - KVUC

1. Tag støbeformen til gelen og sæt gummiklodserne på enderne.
2. Placer ”kammen” i positionen nærmest enden af formen.
3. Hæld nu gelen forsigtigt ud i formen uden at der dannes luftblærer.
4. Lad gelen størkne i ca. 20 minutter
Klargøring af gelen til elektroforese.
Når gelen er størknet fjernes gummiklodserne og kammen tages forsigtigt op så
prøvebrøndene ikke beskadiges. Gelen anbringes i elektroforesekarret og karret fyldes
op med elektroforesebuffer – gelerne skal være helt dækkede. Bemærk gelen skal være
orienteret i strømretningen (minus til plus).
Påsætning af prøverne fra patienten Valerie (B-D) og hendes to søstre (E-F).
Med mikropipette opsuges 35µL (mikroliter = 10 -6 liter) DNA prøve. Prøven afsættes i
gelens ”brønd” følg rækkefølgen A-F. Metoden kaldes ”submarine”, fordi prøverne
påsættes under væskeoverfladen. Husk at skifte pipettespids for hver prøve.
A: Kontrol DNA (uden restriktionsenzymer)
B: Valerie's blod DNA
C: Valerie's tumor DNA
D: Valerie's raske brystvæv DNA
E: Blod DNA fra Valerie’s ene søster (Lycky)
F: Blod DNA fra Valerie’s anden søster (Lucy)
Kørsel af prøverne - elektroforesen.
Strømmen sluttes til elektroforeseapparatet via strømforsyningen. Forbind sort ledning
til sort input (÷) og rød ledning til rød input (+). Elektroforesen kører ca. 2 timer ved 50
V spænding. Under kørslen kan man følge prøvernes vandring vha. en farvemarkør.
Lad markøren vandre 3,5 – 4 cm. inden kørslen stoppes.
Når kørslen er færdig slukkes for strømforsyningen og gelerne kan tages op af karret.
Farvning og fremkaldelse af DNA prøverne
Til denne del af forsøget bruges handsker.
Tørfarvningsmetoden 2 til 4 timer:
1. Tag gelen ud af formen og læg den i en farvebakke.
2. Dæk gelen med en smule gelbuffer.
3. Placer det farveholdige papir med den blå side ned mod gelens overflade.
4. Gnid let på papiret med fingrene, så det får god kontakt med overfladen.
5. Stil støbeformen ovenpå gelen for at sikre kontakten med farvepapiret og lad stå
2-4 timer.