GERSTEL Aktuell Nr. 42 - Gerstel GmbH & Co.KG

Automatisierte Probenvorbereitung
Auf Droge?
Umfassende Harnanalyse auf Drogenkonsum und Medikamentenmissbrauch mittels automatisierter
dispersiver Festphasenextraktion (Disposable Pipette Extraction, DPX) und HPLC-MS/MS
mit „Dynamic Multiple Reaction Monitoring“ (MRM).
Groß im Einsatz: Der GERSTEL-MultiPurpose-
Sampler (MPS2XL) mit DPX-Option.
Um biologische Proben auf Rückstände
von Drogen und Medikamenten
wie Benzodiazepinen zu untersuchen,
ist es notwendig, die Probe so
vorzubereiten, dass weder Matrixeffekte
noch Ionensuppression auftreten können.
Die Festphasenextraktion (SPE) ist im
Allgemeinen die bevorzugte Technik zur
Matrixabtrennung; in der hier beschriebenen
Untersuchung wurde zur Extraktion
die automatisierte, so genannte Disposable
Pipette Extraction (DPX) verwendet.
DPX ist eine schnelle dispersive
Festphasenextraktionstechnik unter Verwendung
lose in einer Einwegpipettenspitze
liegender Sorbentien. Die Probe
wird in die Spitze gesaugt und aktiv mit
dem Sorbens vermischt. Die Vorteile
der DPX-Technologie bestehen hauptsächlich
darin, dass die Extraktion sehr
schnell vonstattengeht, wenig Lösungsmittel
verbraucht wird und der gesamte
Prozess voll automatisiert werden kann,
einschließlich der Probenaufgabe ins
chromatographische System. Der MPS-
Autosampler von GERSTEL erledigt
DPX-Extraktionen in etwa fünf Minuten
unter Einsatz verschiedenartiger Sorbentien:
Reversed Phase (DPX-RP), Kationentauscher
(DPX-CX), schwache Anionentauscher
(DPX-WAX) oder Festphasen
zur Aufreinigung so genannter
QuEChERS-Extrakte.
Zur Bestimmung von Wirkstoffen
und deren Metaboliten aus Arzneimittelrückständen
sind GC/MS oder HPLC-
MS/MS im Allgemeinen die bevorzugten
Techniken. Der Vorteil bei der LC-MS/
MS ist, dass sich eine Derivatisierung der
Analyten erübrigt, sodass die Probenvorbereitung
vereinfacht wird und weniger
Zeit raubt. Hinzu kommt, dass die hocheffiziente
Ionisierung, kombiniert mit der
Tandem-Massenspektrometrie, zu höherer
Sensitivität und Selektivität führt.
Im Mittelpunkt dieser Untersuchung
stand die automatisierte Extraktion geringer
Probenvolumina für die LC-MS/MS,
um für einen hohen Analysendurchsatz
zu sorgen („one sample at a time“). Die
Gesamtdauer der Analyse konnte ver-
Vorbehandlung der Urinproben
• 260 μL Urin in ein sauberes Reagenzglas
(12 x 75 mm) pipettieren.
• 250 μL einer 1,0 M HCl in das Röhrchen
pipettieren und für einige Sekunden
vortexen.
• 250 μL Acetonitril in das Reagenzglas
pipettieren und für einige Sekunden
vortexen.
• Probe mit einem 2-in-1-Spritzenfilter
von Agilent filtern und das Filtrat in
einem sauberen Reagenzglas (12 x 75
mm) sammeln.
• Gefilterte Urinprobe auf dem GERS-
TEL-MultiPurposeSampler (MPS XL)
mit DPX-Option platzieren.
Vorbehandlung der Vollblutproben
• 200 μL Vollblut in ein sauberes Reagenzglas
(12 x 75 mm) pipettieren.
• 800 µL Acetonitril in das Röhrchen
geben und für einige Sekunden vortexen.
• Für zehn Minuten zentrifugieren und
den Überstand in ein sauberes Röhrchen
(12 x 75 mm) überführen.
• Die Probe auf dem GERSTEL-Multi-
PurposeSampler (MPS XL) mit DPX-
Option platzieren.
kürzt beziehungsweise die Produktivität
erhöht werden, weil sich Probenvorbereitung
und Analyse der vorherigen Probe
miteinander zeitlich verschachteln ließen.
20 GERSTEL Aktuell – März 2010