GERSTEL Aktuell Nr. 42 - Gerstel GmbH & Co.KG

Der DPX-Prozess
0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5
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Sofern erforderlich, lässt sich das Sorbens in der
Pipette mit einem Lösemittel vor der Extraktion
konditionieren. Sämtliche Schritte der DPX verlaufen
auf dem MPS-Autosampler automatisiert:
1
Die Probe wird aus der Vorlage in die Pipettenspitze
gezogen, ohne mit der Nadel der
Mikroliterspritze in Berührung zu kommen.
DPX-Spitze
Festphase
konditionieren*
*optionale Schritte, methodenabhängig
Probe aufziehen
durchmischen
Probe
Gas
Probe entfernen
waschen*
eluieren
Extrakt
2
3
Durch Ansaugen von Luft werden Probe und
Sorbens optimal gemischt, mit dem Resultat einer
effizienten Extraktion mit hoher Ausbeute.
Nach 20 bis 30 Sekunden ist die Extraktion
erfolgreich beendet; die Probenflüssigkeit wird
aus der Pipettenspitze entleert. Bei Bedarf lässt
sich ein Waschschritt einfügen.
4
Anschließend werden die extrahierten Analyten mittels
eines geeigneten Lösemittels eluiert und der Extrakt wird
in ein vorbereitetes Vial pipettiert.
Die Extraktion einer Probe dauert nur wenige Minuten.
Probenvorbereitung und Analyse verlaufen zeitlich
verschachtelt.
Experimenteller Teil
Ausstattung: Die Trennung der Analyten
erfolgte auf einem HPLC 1200,
ihre Detektion auf einem Triple-Quadrupol-Massenspektrometer
6410 mit
ESI-Quelle (beide Geräte von Agilent
Technologies). Für die Probenvorbereitung
und die Probenaufgabe wurde der
MultiPurposeSampler (MPS XL) von
GERSTEL verwendet.
Material: Benzodiazepin-Multikomponenten-Mixtur
8 von Cerilliant (enthält
acht Komponenten in Acetonitril: Clonazepam,
Temazepam, Nitrazepam, Alprazolam,
Diazepam, Flunitrazepam, Lorazepam
und Oxazepam, 250 μg/mL; enthält acht
Komponenten in Methanol: Nordiazepam,
Clobazam, Bromazepam, Estazolam, Flurazepam,
Midazolam, Triazolam, 1,0 mg/mL,
und α-Hydroxyalprazolam, 100 µg/mL).
Aus den 16 Benzodiazepinen wurde eine
wässrige Stammlösung bereitet, aus der eine
Verdünnungsreihe hergestellt wurde. Deuterierte
Benzodiazepin-Analoga (d 5 -Nordiazepam,
d 5 -α-Hydroxyalprazolam, d 5 -Oxa-
zepam, d 4 -Clonazepam und d 5 -Estazolam,
jedes in Methanol, 100 µg/mL) wurden von
Cerilliant bezogen.
Extraktion: Ein MultiPurposeSampler
(MPS) von GERSTEL wurde zur
Extraktion des hydrolysierten Urins
mit 1-mL-DPX-CX-Pipettenspitzen
bestückt. Folgende Methode zur
Automatisierung kam zur Anwendung:
250 μL eines 30-prozentigen Acetonitril-Wasser-Gemischs
wurden langsam
(Fließgeschwindigkeit: 50 μL/s) durch
Analysenbedinungen HPLC
Säule:
Zorbax Eclipse
XDB C18 RRHT
(2,1 mm x 50 mm, 1,8 µm)
Eluenten: A – 20 mM Ammoniumformiat,
pH 8.6
B - 10% Isopropanol in
Methanol
Gradient:
Zeit (min)
Fluss (mL/min) Druck (bar) % B
0 0,2 600 45
2 0,2 600 45
5 0,2 600 95
9 0,2 600 95
9,5 0,2 600 45
Säulen-Temperatur: 35 °C
Injektionsvolumen: 2,5 µL
Laufzeit:
10 min
Analysenbedingungen MS
Ionisierung: ESI positive ion mode
Gas-Temperatur: 350 °C
Gas-Fluss (N2): 12 L/min
Nebulizer pressure: 35 psi
Capillary:
4,5 kV
Analyten Precursor- Produkt- Fragmentor CE (V)
Ion [m/z] Ion(en) [m/z] Spannung(V)
Bromazepam 316 182 (209) 140 (140) 30 (25)
Nitrazepam 282 236 (180) 160 (160) 25 (35)
d 4 -Clonazepam 320 274 120 30
Flunitrazepam 314 239 (268) 160 (160) 35 (30)
Clonazepam 316 270 (214) 120 (120) 25 (30)
d 5 -a-OH-Alprazolam 330 302 120 30
d5-Estazolam 300 272 140 25
a-OH-alprazolam 325 216 (297) 120 (120) 35 (30)
Estazolam 295 205 (267) 160 (160) 40 (25)
Clobazam 301 224 (259) 140 (140) 30 (15)
Triazolam 343 239 (308) 180 (180) 40 (25)
Alprazolam 309 274 (281) 160 (160) 30 (25)
d 5 -Oxazepam 292 246 120 20
Oxazepam 287 241 (269) 120 (120) 20 (15)
Lorazepam 321 229 (275) 140 (140) 30 (20)
Temazepam 301 255 (177) 120 (120) 35 (40)
d 5 -Nordiazepam 276 213 160 30
Nordiazepam 271 140 (165) 160 (160) 30 (30)
Midazolam 326 249 (291) 180 (180) 40 (25)
Diazepam 285 222 (257) 160 (160) 25 (25)
Flurazepam 388,1 288 (315) 140 (140) 25 (20)
Parameter der MS/MS-Detektion.
GERSTEL Aktuell – März 2010 21